胚胎分割、分割胚的体外培养及移植

用玻璃微针对小鼠胚胎进行分割,分割的裸半胚经体外培养和移植到受体后,获得由半胚发育的仔鼠。小鼠早期胚胎(2细胞,8细胞阶段)在链霉蛋白酶中软化透明带后,用直径为0.5μm的玻微针徒手对胚胎进行切割。切割的半胚体外培养24～48h,观察半胚的活力、发育率、发育阶段及胚泡的大小与未切割的正常胚胎进行比较。共切割胚胎342枚,切割后成活的半胚为411枚,半胚成活率为60.08％(411/682)。2细胞和8细胞阶段切割的半胚,成活率分别为     

克隆兔在广西大学动物繁殖研究所诞生

20 0 2年 5月 1 3日上午 ,一只胚胎细胞克隆仔兔顺利在广西大学动物繁殖研究所降生。这是由广西大学动物繁殖研究所石德顺博士领导的科研小组完成的。该小组于 2 0 0 1年 5月开始“克隆兔课题”的研究。他们先从一只兔子身上获得早期胚胎 ,注入已去除细胞核的成熟卵母细胞中 ,融合形成重组胚。重组胚在体外培养后 ,于 4月 9日被移入一只雌性兔子的输卵管内 ,经过 3 4天的正常孕期后 ,克隆兔顺利降生。这只胚胎细胞克隆兔出生时 ,体重为 82 g。2天后体重增至 1 2 5 g。据了解 ,我国在上世纪 90年代初就相继掌握了羊、牛、兔等动物的胚胎细胞…     

克隆兔能给人类带来什么?

广西大学动物繁殖研究所的科研人员日前成功地繁殖了一只胚胎细胞克隆兔。记者在实验室看到,这只出生于5月13日的胚胎克隆兔现在已经能够蹦跳,看上去发育良好,健康而活泼。主持这项研究工作的石德顺研究员说,他们先从一只兔子身上获得早期胚胎,注入已去除细胞核的成熟卵母细胞中,融合形成重组胚。重组胚在体外培养后,于4月9日被移入一只雌性兔子的输卵管内,经过34天的正常孕期,克隆兔顺利降生。这只胚胎细胞克隆兔出生时,重82克,现在体重已增至数倍。     

实验用小型猪胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞为核供体生产转基因克隆胚胎

目的比较不同类型体细胞对生产转基因克隆胚胎效率的影响。方法利用脂质体介导的方法将质粒pEGFP-N1转染到五指山小型猪胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞,经过G418筛选后均获得了阳性细胞株。然后分别以两种类型转基因细胞以及未转基因细胞为核供体进行体细胞核移植,比较不同类型供体细胞克隆胚胎的囊胚发育率。结果胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞克隆胚的囊胚发育率差异不显著(P>0.05,8.3%vs.7.1%);转基因胎儿成纤维细胞(9.6%)和转基因骨髓间充质细胞(9.9%)克隆胚胎的囊胚发育率差异不显著(P>0.05,9.6%vs.9.9%);每一种类型供体细胞转基因与否对克隆胚的囊胚发育率无影响(P>0.05)。结论通过体细胞核移植技术,小型猪骨髓间充质细胞与胎儿成纤维细胞均可有效地生产转基因囊胚。     

小鼠体细胞核移植及ES细胞样集落分离

利用小鼠皮肤成纤维细胞为核供体进行体细胞核移植并从重构胚中分离胚胎干细胞(ES)样集落,以便对体细胞核移植重构胚来源的ES细胞样集落进行研究.结果显示,小鼠皮肤成纤维细胞作为核供体,核移植重构胚激活率为60.48%(254/420),囊胚发育率为6.90%(29/420),6个囊胚中分离出ES细胞样集落,分离率为1.43%(6/420),3个ES细胞样集落能够稳定传代,至第5代时核型正常率分别为77.84%,75.18%,77.20%.分离出的ES细胞样集落具有岛屿状团状隆起结构,碱性磷酸酶染色呈阳性,体外可自发分化成上皮样或梭形细胞.实验证实小鼠唇部皮肤成纤维细胞能够支持体细胞核移植重构胚发育至囊胚,并能分离出可以稳定传代的ES细胞样集落.     

影响体细胞核移植重构胚发育的因素

目前已有多种动物被成功克隆,但存在着诸多未知因素,使体细胞核移植重构胚发育至囊胚阶段的比例过低,克隆动物存在早衰等异常现象.该文围绕这产生这些现象的根本原因、高度分化的体细胞核移入卵质后所发生的分子事件以及其影响因素如体细胞的来源和培养代数、细胞周期、核质相互作用、细胞核再程序化、线粒体等方面对体细胞核移植重构胚发育的影响等进行综述.     

转基因和再克隆对克隆胚胎细胞凋亡的影响

细胞凋亡在着床前胚胎发育过程中发挥着重要作用,胚胎凋亡检测能为获得高质量的体细胞克隆胚胎提供有益信息,进而有助于提高克隆效率.用原位末端标记法对牛的转基因克隆和转基因再克隆囊胚进行了细胞凋亡检测,再克隆囊胚是利用转基因克隆牛的体细胞作为供体细胞进行体细胞核移植后获得的第二代克隆胚胎.结果表明转基因克隆胚胎的囊胚发育率显著低于非转基因克隆胚胎的囊胚发育率,而转基因克隆囊胚的细胞凋亡指数显著高于非转基因克隆胚胎的细胞凋亡指数.此外,转基因再克隆胚胎的囊胚发育率和胚胎细胞凋亡指数与非转基因克隆胚胎的囊胚发育率和胚胎细胞凋亡指数相比差异性不显著.结果表明早期的转基因克隆胚胎发育能力的减弱可能是由于供体细胞的基因转染和药物筛选过程导致的,而再克隆对其早期胚胎的发育能力没有负面影响.     

昆明小鼠胚胎移植技术的研究

目的研究不同时期胚胎对胚胎移植成功率的影响,以提高胚胎移植率。方法采用经超数排卵的KM雌鼠与正常615雄鼠交配,取受精卵,分别将1-细胞胚、2-细胞胚和桑椹胚、囊胚分别移入发情的假孕KM雌鼠的输卵管和子宫中,妊娠产仔。结果移入1-细胞胚、2-细胞胚、桑椹胚和囊胚的假孕母鼠妊娠率分别为36.36%、42.86%、10%、27.27%,产仔率分别为46.58%、38.46%、58.33%、60%。结论2-细胞胚的移植可提高小鼠的胚胎移植成功率,子宫移植可提高小鼠的产仔率。     

兔桑椹胚胎细胞周期同步化及核移植后的发育能力

进一步改进兔供体桑椹胚Ｇ１期可逆性同步化方法，并比较Ｇ１期核移植胚胎和未同步化核移植胚胎在体内的发育能力。将兔早期１６细胞胚用秋水仙胺和ａｐｈｉｄｉｃｏｌｉｎ处理适当时间，这时期胚胎细胞处于３２细胞期的Ｇ１期。经扫描显微分光光度法测定表明，没有ＤＮＡ合成。经两种药物同步化处理，胚胎正常细胞周期、分裂及移植前发育均不受影响。与用未同步化３２细胞胚细胞核移植相比，用同步在Ｇ１期胚胎细胞进行核移植后，显     

昆明鼠胚胎干细胞的分离培养与鉴定

目的：从昆明系小鼠的早期胚胎分离和培养胚胎干细胞(ES细胞)．方法：收集小鼠3．5d胚龄的囊胚，将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上，5—6d后取隆起生长的内细胞团块分离后再培养，观察集落的生长情况并通过碱性磷酸酶染色、原位杂交、细胞核型分析等对细胞集落进行鉴定．结果：KS细胞集落性生长，符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性．结论：昆明系小鼠囊胚在胚胎成纤维细胞饲养层上可以发育成ES细胞，并能进行传代培养．