血清转铁蛋白受体的研究进展及临床意义

血清转铁蛋白受体(sT fR)是完整的细胞受体的一个可溶性节段,通过酶免疫法或免疫浊度法可从血清中检出。sT fR反映机体贮存铁的数量以及所需铁的数量,是判断机体是否缺铁的一项敏感指标。sT fR可以定量评价骨髓幼红细胞的生成,尤其适用于评价各类骨髓红系显著增生的溶血性贫血。     

补充维生素A对血清转铁蛋白受体及红细胞系影响的实验研究

选择血红蛋白＜114 g/L的56名体育传统学校学生为研究对象,随机分为3组：补铁补维生素A组19人,补铁组19人和对照组18人,实验组补铁方法为服用L-苏糖酸亚铁胶囊（7 mg元素铁/粒,3粒/d）4周,同时口服维生素A丸20万单位（10万U/d ×2 d）.4周后补铁补维生素A组sTfR、血清视黄醇、SI、Tf和TS%水平与实验前和对照组比较显著提高（P＜0.05）,Hb,RBC,Hct水平显著提高（P＜0.01）.补铁组SI,Tf, TS%,Hb,RBC,Hct水平显著提高（P＜0.05）.提示短期补铁加大剂量维生素A能使机体铁分布及营养状况改善,显著改善贫血学生的红细胞系的状态.     

超顺磁氧化铁标记对干细胞转铁蛋白受体基因和蛋白表达的影响

目的:探讨超顺磁氧化铁(SPIO)标记对大鼠脂肪干细胞(ADSCs)内转铁蛋白受体(TfR)基因和蛋白表达的影响,及SPIO标记与TfR表达的剂量-效应关系.方法:从3周龄雄性SD大鼠脂肪组织中提取干细胞,用多聚赖胺酸(PLL)介导SPIO(质量浓度分别为12.5～、25～、50～、75～、100～μg/mL,PLL/SPIO为1:0.03)标记大鼠ADSCs 12 h后,用普鲁士蓝染色、台盼蓝及噻唑蓝法(MTr)试验检测SPIO标记率、细胞活力及增殖力,并用逆转录聚合酶链反应( RT - PCR)、Western blot技术检测各质量浓度SPIO标记细胞内TfR表达情况.结果:PLL介导SPIO可以简单、高效地标记大鼠ADSCs.当SPIO终质量浓度为25～100 μg/mL时,SPIO标记率达到近100％;各质量浓度SPIO标记可抑制细胞增殖,但对细胞活力没有明显影响.SPIO标记大鼠ADSCs内TfR表达水平下调,其中rfR mRNA表达量以标记后24h时最低,TfR蛋白表达量以标记后7d时最低.随着SPIO标记质量浓度的增加,TfR表达水平越低,持续时间越长,但当SPIO标记质量浓度达25μg/mL及以上时,TfR mRNA表达维持在一定的水平.结论:PLL介导SPIO可以简单、高效的标记大鼠ADSCs.PLL介导SPIO标记可引起大鼠ADSCs内TfR表达水平暂时性降低以减少对细胞外铁的摄取,且随着SPIO标记质量浓度的增加,TfR表达水平越低,低水平表达持续时间越长.     

结核分枝杆菌对感染小鼠肺泡巨噬细胞转铁蛋白受体和铁蛋白表达的影响

探讨不同毒力结核分枝杆菌感染对小鼠肺泡巨噬细胞转铁蛋白受体(TfR)和铁蛋白(Fn)表达的影响及其时相性变化。利用制备的卡介苗(以下简称BCG)和结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株(以下简称H37Rv株)悬液,分别经小鼠尾静脉注射,建立各组小鼠感染模型,各组小鼠感染模型建立成功后,分别于第1、3、5、7、9、11、13、15天,进行各组小鼠肺泡灌洗,收集小鼠肺泡灌洗液,获取各组小鼠肺泡巨噬细胞。应用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR和Fn的表达。利用ELISA方法检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR的表达结果显示:H37RV组与BCG组小鼠肺泡巨噬细胞TfR表达均高于空白对照组,在感染第7、9、11天差异最明显,具有统计学意义(P0.05)。利用Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR表达结果显示:于模型建成后第7、9、11天,H37RN组、BCG组、空白对照组三组之间差异有统计学意义(P0.05)。用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达结果显示:于模型建成后第7、9、11天,H37RV组与BCG组的小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达量明显减低,并且于第7天时表达量最第,异有统计学意义(P0.05)。结核分枝杆菌感染小鼠,导致小鼠肺泡巨噬细胞TfR的表达增高,而Fn的表达降低。不同毒力的结核杆菌感染后Fn蛋白表达差异并不明显,而不同毒力的结核杆菌感染后TfR蛋白的表达有差异性。     

新型雌激素受体ERα36在张氏肝细胞和人肝癌细胞中的表达比较分析

研究新型雌激素受体ERα36在人肝细胞和肝癌细胞系中的差异表达具有重要的意义.以张氏肝(Chang Liv-er)、Caveolin-1基因沉默细胞株CAV7、人肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2为实验材料,通过免疫印迹杂交法观察了不同细胞内ERα36蛋白的表达情况,并与典型雌激素受体亚型ERα66蛋白的表达进行了比较.结果发现:(1)几种细胞中均有ERα36蛋白的表达;(2)与张氏肝细胞相比,Caveolin-1基因沉默时ERα36表达明显增加(P0.01);(3)ERα36在SMMC-7721中表达水平较低,而在HepG2细胞中表达水平较高,与ERα66和Caveolin-1的表达水平相关.提示新型雌激素受体ERα36可能参与Caveolin-1介导的雌激素信号转导,而在肝细胞的恶性增殖过程中发挥一定的作用.     

汉滩病毒受体与细胞因子TNFRⅠ真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

摘要 目的：构建带有荧光标签的汉滩病毒受体整合素β3与细胞因子TNFRⅠ的稳定转染细胞系。方法：构建目的基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-β3和pIRES2-DsRed-TNFRⅠ(EC),并转染CHO细胞,直接荧光观察报告基因和荧光定量RT-PCR检测目的基因mRNA表达。结果：转染重组质粒pIRES2-EGFP-β3的细胞可检测到荧光报告基因和目的基因β3 mRNA的表达,转染pIRES2-DsRed-TNFRⅠ(EC)的细胞可检测到荧光报告基因和目的基因TNFRⅠmRNA的表达。结论：成功构建真核表达整合素β3与TNFRⅠ的稳定细胞系。     

MTA1基因在肝癌细胞系HepG_2及其异质性亚系中表达的差异性

目的:探讨MTA1基因在肝癌细胞系HepG2及其异质性亚系中的表达水平.方法:采用半定量RT-PCR、荧光定量RT-PCR的方法检测3种细胞中MTA1基因的表达差异;Western blotting检测蛋白水平的表达差异;用细胞免疫组织化学方法观察MTA1蛋白的细胞定位.结果:HepG2-H和HepG2细胞株的mRNA和蛋白表达水平均高于HepG2-L细胞株;细胞免疫组化显示3株细胞的MTA1蛋白均定位于细胞核和细胞浆,以细胞核为主.结论:MTA1基因在具有不同转移潜能的肝癌细胞亚系HepG2-H、HepG2-L中的表达具有明显差异.     

OsICK1 基因植物反义表达载体的构建及遗传转化

OsICK1是水稻细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂基因.我们构建了水稻细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂基因(OsICK1)的植物反义表达载体,在农杆菌的介导下尝试使antisense OsICK1 整合到水稻基因组中并初步得到验证.为进一步研究OsICK1 对水稻细胞周期调控的作用奠定了基础.     

基于小鼠肝癌细胞系的卤代咔唑的芳香烃受体激活能力测定与比较

选取多种卤代咔唑,以小鼠肝癌细胞系为测试体系,应用基于瞬时转染的荧光素酶报告基因方法对其AHR激活效力进行比较.发现其在1μM浓度下的激活效力排序为：2367CCZ>136BCZ>27BCZ>1368BCZ>其他,同系物/不同卤素取代之间具有明显差异.因此,基于瞬时转染的报告基因方法可以有效开展类二噁英化合物的毒性评估,且提示可以通过变换转染细胞系开展其他物种特异性的毒性评估.     

癌基因AVIL在肝癌中的表达及其预后分析

为探究Advillin(AVIL)基因在肝细胞癌(HCC)中的表达水平及其与患者临床特征、预后的关系,回顾性收集76例肝细胞癌患者的癌及配对癌旁组织,利用免疫组化法对AVIL蛋白表达水平进行检测;采用χ~2检验分析AVIL表达差异与患者临床特征的关系,运用Kaplan-Meier进行生存分析,并通过Cox单因素及多因素探索影响患者生存预后的相关因素。结果表明:AVIL在肝细胞癌组织中高表达(P0.01),其表达水平与BCLC分期及Edmondson分级有关(P0.05);AVIL高表达患者的生存时间显著低于低表达患者(P0.05);Cox单因素法提示AVIL表达水平、BCLC分期、肿瘤大小、有无癌栓、有无多灶性、甲胎蛋白(AFP)表达水平、谷草转氨酶(AST)表达水平、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)表达水平、有无肝外转移与肝细胞癌患者预后相关(P0.05);然而Cox多因素法提示AVIL表达水平并不是预测肝细胞癌患者预后的一个独立因素(P0.05)。综上可知,AVIL基因在HCC中高表达并与BCLC分期及Edmondson分级有关,其高表达提示肿瘤恶性程度高、预后不良,但AVIL不作为影响肝癌预后的独立因素,研究结果为寻找肝细胞癌诊断及判断预后的分子标志物提供了新的方向。     

Overexpression of PITPNM3 promotes hepatocellular carcinoma cell metastasis

A previous study indicated that C–C chemokine(C–C motif)ligand 18(CCL18)is capable of inducing tumor cell invasion and metastasis by interacting with receptor membrane-associated phosphatidylinositol transfer protein 3(PITPNM3)in breast cancer cells.The present study aims to investigate the correlation between the PITPNM3 expression and metastasis in hepatocellular carcinoma(HCC).Real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blot were performed to detect the expression pattern of PITPNM3 in patient samples and HCC cell lines.Wound-healing and transwell chamber assays were performed to assess the migration and invasiveness of HCC cells,and the activation of the signaling protein downstream of PITPNM3 was also detected by Western blot and immunofluorescence.The results revealed that PITPNM3 was upregulated in HCC tissue compared to matched normal liver tissue.Silencing the expression of PITPNM3 by specific siRNAs markedly attenuated the invasive and metastatic abilities of HCC cells,whereas the upregulation of PITPNM3 significantly increased HCC cell mobility.Furthermore,inhibiting the expression of PITPNM3 suppressed the activation of Pyk2,FAK,and Src,while overexpression of PITPNM3enhanced the phosphorylation of FAK and Src in HCC cells.Besides,suppression of Pyk2 can also impair the clustering of integrin.These results imply that PITPNM3 is a vital determinant of HCC migration and invasion.     

叶酸受体在血液肿瘤细胞株的表达及叶酸-聚乙烯亚胺共聚物的制备

目的:研究叶酸受体(folate receptor,FR)在血液肿瘤细胞表达的特点,合成叶酸-聚乙烯亚胺(FA-PEI)聚合物,探讨其作为靶向性基因输送载体的可行性.方法:用实时荧光定量PCR(real time PCR)法检测α、β、γ3种FR在血液肿瘤细胞K562、K562/A02、U266细胞株上的表达;利用叶酸(FA)活性酯在微碱性条件下与聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)的支链氨基反应,合成FA-PEI共聚物;用葡聚糖凝胶柱G-25分离、纯化;用紫外分光光度计波长扫描法及氢核磁共振谱(~1H NMR)法验证交联是否成功.结果:α、β、γ3种FR在K562、K562/A02、U266 3种细胞株上均表达,其中,α-FR的表达占优势,较β-FR和γ-FR表达量高;紫外分光光度计扫描图谱在365 nm处出现叶酸的特征性吸收峰;核磁共振(~1H NMR)示:在2.5～3.2处出现PEI亚甲基质子的特征性化学位移,在6.5～9.0处出现叶酸芳香质子的特征性氢信号.结论:FR在K562、K562/A02、U266 3种细胞株上均有较高表达;FA-PEI偶联成功,为其作为血液肿瘤治疗中1种潜在的靶向性基因输送载体提供了依据.     

葡萄糖转运蛋白1（GLUT-1）抑制剂BAY-876体内活性的正电子发射型计算机断层显像（PET）检测

目前,葡萄糖转运蛋白(glucose transporter,GLUT)不仅是细胞摄取葡萄糖的功能与物质保障,同时也是恶性肿瘤抗肿瘤药物治疗的新型干预靶点。建立GLUT抑制剂的体内活性评价方法具有重要意义。利用正电子发射型计算机断层显像检测仪(positron emission computed tomography,PET)对小动物肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)肿瘤模型进行PET检测,建立GLUT抑制剂的小动物体内活性检测方法。在HCC细胞系中检测GLUT-1的表达,选取GLUT-1表达水平最高的细胞系接种BalB/c免疫缺陷动物皮下,形成免疫缺陷动物皮下肿瘤模型。连续三日口服灌胃给药,给予动物5 mg/kg的GLUT-1抑制剂BAY-876后,进行PET检测。动物行尾静脉注射200μCi的核素探针~(18)F-FDG,约30 min后进行PET检测。在此基础上,使用盖革计数器检测动物肿瘤与血液的放射性强度比较。在所选细胞系中,MHCC-97H细胞中GLUT-1的表达显著高于其他细胞系,BAY-876治疗动物能够显著抑制MHCC-97H皮下肿瘤组织对18F-FDG的摄取。GLUT-1抑制剂BAY-876能够显著抑制HCC细胞对葡萄糖的摄取,成功建立了利用PET检测GLUT抑制剂动物体内活性的PET检测方法。     

Cyclin D1与p21WAF1在鼻咽癌中的表达

目的探讨鼻咽上皮癌变过程中周期蛋白CyclinD1与抑癌基因p21（wild—type p53 activated fragment 1,p21wAF1）蛋白的表达及其意义。方法应用免疫组化方法检测47例鼻咽癌组织、21例癌旁上皮组织和14例正常鼻咽粘膜中Cyclin D1与p21WAF1蛋白表达。结果从鼻咽正常粘膜、癌旁粘膜上皮组织到癌组织,Cyclin D1表达阳性率逐渐增加,并且差异有显著意义（均为P〈0．05）。p21WAF1蛋白在以上组织中阳性率较高,且各组间差异无显著性。结论Cyclin D1、p21WAF1蛋白与鼻咽部上皮细胞恶性增生密切相关,p21wA兀蛋白表达可能与细胞周期调控的反馈机制有关。     

PSF1在肝细胞肝癌组织中的表达及其临床意义

为探讨肝细胞肝癌中PSF1的表达情况及其临床意义,利用免疫组化技术检测PSF1在肝细胞肝癌及其对应癌旁组织中的表达水平,并运用SPSS17.0软件分析PSF1与肝癌临床病理特征之间的关系。在肝癌细胞系MHCC97-H、HepG2、SMMC-7721和肝细胞系HL-7702中运用实时定量PCR检测PSF1的表达情况。在肝癌细胞系MHCC-97H中,通过siRNA特异性下调PSF1的表达,通过Transwell小室实验检测PSF1对MHCC-97H细胞侵袭能力的影响。所得结果表明:与癌旁组织相比,PSF1在90对肝癌癌旁组织中有67.7%(60/90)的样本高表达(χ2=28.611,p0.01)。统计分析发现PSF1高表达与患者有无肝硬化(χ~2=4.703,p0.05)、是否发生远处转移及门脉侵犯(χ~2=6.939,p0.05)、肿瘤分化程度(χ2=4.293,p0.05)、TNM分期(χ~2=16.987,p0.01)显著相关;其表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤数目无关。在肝癌细胞系MHCC97-H、HepG2、SMMC-7721和肝细胞系HL-7702中,其表达逐渐降低,提示PSF1可能参与了肝癌的侵袭进程。在MHCC97-H中采用siRNA技术特异性下调PSF1的表达后,其侵袭能力降低。PSF1在肝癌组织中高表达且与患者远处转移及门脉侵犯、TNM分期相关,抑制PSF1的表达后MHCC-97H侵袭能力减弱,PSF1可能作为治疗肝癌的一个靶点。     

P-gp在肝细胞肝癌组织中的表达及其意义

目的探讨P-gp在肝细胞肝癌（HCC）中以及癌旁肝组织的表达意义。方法采用免疫组织化学S-P法,检测30例HCC中P-gp的表达情况,以30例相应癌旁肝组织作为对照组,所得结果用统计学卡方检验及列联表等级相关分析进行比较。结果P-gp蛋白在HCC、癌旁肝组织中阳性表达率分别为83．3％（25／30）、30％（9／30）;HCC与癌旁肝组织表达差异有显著性（P〈0．05）。结论P-gp参与介导HCC多药耐药。     

丹参酮IIA调控孕烷X受体的转录因子活性诱导肝细胞癌细胞对索拉非尼耐受

本文旨在探索丹参酮IIA对孕烷X受体(pregnane X receptor),PXR转录因子活性的影响,确定丹参酮IIA诱导肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)细胞对分子靶向药物索拉非尼等耐受的分子机制。使用系列浓度梯度的丹参酮IIA处理HCC细胞系MHCC97-H细胞,检测丹参酮IIA对PXR转录因子活性以及PXR下游耐药基因表达的影响。同时在裸鼠中利用MHCC97-H细胞建立HCC肿瘤模型,对动物给予丹参酮IIA后,再使用分子靶向药物索拉非尼对动物进行抗肿瘤治疗,确定丹参酮IIA对索拉非尼抗肿瘤作用的影响。利用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)检测丹参酮IIA对MHCC97-H细胞及肿瘤组织中索拉非尼代谢与清除速率(半衰期)的影响。结果显示,丹参酮IIA能够在HCC细胞中诱导PXR的转录因子活性、上调PXR下游耐药相关基因CYP3A4以及MDR-1的表达、加速分子靶向药物索拉非尼在HCC细胞中的代谢与清除作用,最终诱导HCC细胞对分子靶向药物索拉非尼的耐受。这表明, 丹参酮IIA调控孕烷X受体的转录因子活性诱导肝细胞癌细胞对索拉非尼耐受。