366例疑似乙型肝炎患者HBV-DNA检测与乙肝5项指标结果分析

目的：探讨HBV-DNA与乙肝5项指标检测之间的相关性。方法：采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）测定HBV DNA,并同时运用酶联免疫吸附（ELISA）法测定乙肝5项指标分析二者相关性。结果：小三阳组HBV-DNA阳性检出率及拷贝数均低于大三阳组,有显著性差异（P〈0.01）,各组比较结果表明,大三阳组患者血清HBV-DNA检出率最高,达91.92%,平均拷贝数为6.83×106拷贝/ml。结论：乙肝5项指标全部阴性及仅HBsAb阳性者仍有HBV-DNA检出阳性病例,因此在检测中应联合应用两种方法进行检测,以提高检出率,避免漏诊,为临床HBV感染、复制及传染性的判断以及指导治疗提供更为可靠的判定依据。     

366例疑似乙型肝炎患者HBV-DNA检测与乙肝5项指标结果分析

目的:探讨HBV-DNA与乙肝5项指标检测之间的相关性.方法:采用荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)测定HBV DNA,并同时运用酶联免疫吸附(ELISA)法测定乙肝5项指标分析二者相关性.结果:小三阳组HBV-DNA阳性检出率及拷贝数均低于大三阳组,有显著性差异(P＜0.01),各组比较结果表明,大三阳组患者血清HBV-DNA检出率最高,达91.92%,平均拷贝数为6.83×106拷贝/ml.结论:乙肝5项指标全部阴性及仅HBsAb阳性者仍有HBV-DNA检出阳性病例,因此在检测中应联合应用两种方法进行检测,以提高检出率,避免漏诊,为临床HBV感染、复制及传染性的判断以及指导治疗提供更为可靠的判定依据.     

废水处理功能菌株FA-2的实时荧光定量PCR检测

FA-2是油脂化工废水处理系统中分离到的降解脂肪酸和脂肪胺的功能菌.本研究以大肠杆菌为参照菌,基于荧光定量PCR技术,建立了检测FA-2相对含量的荧光定量PCR方法.根据FA-2已知特异序列GENE2和大肠杆菌16 s rRNA基因序列GENE1分别设计合成特异引物和Tagman探针,采用实时荧光定量PCR技术分别检测各样本FA-2和E.coli 16 s rRNA基因的相对拷贝数,获得了FA-2及大肠杆菌的标准曲线.并比较这两种基因剂量之比例和混和的菌数比例之间的关系.结果表明混合菌液中FA-2的含量与CtGENE2与CtGENE1的差值ΔCt呈线性关系,由此可以推算出模板DNA的数量及对应的细菌数量.荧光定量检测结果与直接计数结果基本一致.该方法的建立,为进一步在废水处理系统中应用FQ-CR检测功能菌的含量打下基础.     

血清乙肝病毒DNA含量与一氧化氮和一氧化氮合酶水平的相关性研究

目的:探讨乙型肝炎患者血清中乙肝病毒DNA、谷丙转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)与一氧化氮(NitricOxide,NO)和一氧化氮合酶(Nitricoxidesynthase,NOS)水平的相关性,以求证实乙肝病毒在体内复制,损伤肝细胞,引起慢性纤维化和肝硬变乃至发生肝癌的疾病进程中,NO和NOS所起的作用及意义。方法:选取42例慢性持续性肝炎(CPH)患者,30例慢性活动性肝炎(CAH)患者,31例乙型肝炎肝硬化(HC)患者,19例乙肝病毒相关性肝癌(HCC)患者;30例健康体检者作为对照。分别运用荧光定量PCR技术和化学分析法对上述病例的血样同时进行乙肝病毒DNA含量、ALT、TBA、NO和NOS水平的检测。结果:对照组、HBV-DNA阴性组与HBV-DNA低浓度水平组之间的NO、NOS的水平无显著性差异(P>0.05)。HBV-DNA低浓度水平组与中、高浓度组之间的NO、NOS水平有显著性差异(P<0.05)。慢性活动性肝炎组,乙型肝炎肝硬化组,乙肝病毒相关性肝癌组与对照组间HBV-DNA、ALT、TBA、NO、NOS含量之间均存在显著性差异(P<0.05)。慢性持续性肝炎组的NO水平则低于正常对照组(P<0.05)。HBV-DNA的含量(取对数值)与NO水平呈正相关(r=0.687)。结论:NO在乙肝病毒感染所导致的一系列连锁疾病的多个阶段扮演着重要角色,在不同类型的乙肝患者中NO水平的高低与病毒复制强弱和肝细胞损伤程度有关。在检测ALT,TBA的同时,连续监测乙肝患者血清中HBV-DNA含量及NO、NOS的水平对了解乙肝患者病情的演变和预后以及治疗起着重要作用。     

慢性乙型肝炎患者血清HBeAg与HBV-DNA、ADA及ALT浓度的相关性研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清HBe Ag与HBV-DNA、ADA及ALT浓度的相关性。方法用时间分辨荧光技术定量检测104例慢性乙型肝炎患者HBV血清标志物,用荧光定量聚合酶链反应法检测血清HBV-DNA含量,同时检测ALT、ADA的浓度。结果 HBV-DNA载量在"HBs Ag+HBe Ag+HBc Ab"和"HBs Ag+HBe Ab+HBc Ab"两种HBe Ag相关血清标志物模式中的分布不同(p0.01)。在"HBs Ag+HBe Ag+HBc Ab"组,HBV-DNA的水平及ADA、ALT的浓度显著高于"HBs Ag+HBe Ab+HBc Ab"组(p0.01)。"HBs Ag+HBe Ag+HBc Ab"组,HBe Ag含量与HBV-DNA载量的对数值低度相关(rs=0.3,p0.05),与ADA、ALT浓度不相关(rs均小于0.1,p0.05)。在"HBs Ag+HBe Ab+HBc Ab"组中,HBe Ag含量与HBV-DNA载量的对数值、ADA、ALT浓度不相关(rs均小于0.1,p0.05)。结论在"HBs Ag+HBe Ag+HBc Ab"组,HBV-DNA的水平及ADA、ALT的浓度显著高于"HBs Ag+HBe Ab+HBc Ab"组,但两种e抗原相关血清标志物模式中HBe Ag含量与HBV-DNA载量、ADA、ALT浓度相关性低。     

TMEM43基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

根据Genbank中登录的TMEM43基因序列设计并合成引物,建立了TMEM43SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法.利用该方法构建标准曲线,并对灵敏性及重复性进行验证.最后对随机选取的几种人源细胞及不同物种细胞进行检测.结果显示,建立的TMEM43SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法线性关系好,以标准品构建的标准曲线相关系数R2=1;灵敏性比普通PCR高10倍,能成功检出不同细胞中TMEM43表达量.表明建立的TMEM43SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法可用于TMEM43基因表达的检测及定量分析,可为临床TMEM43相关疾病的检测及分析提供实验依据.     

扩展青霉菌实时定量PCR内参基因挖掘与应用

实时定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术因其高效且便捷的特点在基因表达检测中被广泛应用。实时定量PCR结果数据处理策略之一是使用内参基因进行基因表达数据的标准化。文章基于扩展青霉菌孢子不同生长阶段的RNA-seq数据，挖掘和注释了694个稳定表达的候选内参基因；随机挑选出Knr4、Isy1、Spt5、Nucb、Hp1、Hp2、Whth、Hp3、Gph3、Pwi、Taf4、Hp4、Asy、GTPase在内的14个基因，以4、25℃条件下PDB培养基生长6、12、24、36 h的扩展青霉菌为材料，进行实时定量PCR实验。实时定量PCR数据基于geNorm和NormFinder 2种软件的综合分析，表明Isy1、Spt5、Nucb、Hp1适合作为内参基因。以Isy1和Spt5分别作为内参基因，检测Gh30基因在4、25℃条件下扩展青霉菌生长发育过程中的基因表达，显示出一致的基因表达水平，进一步验证了挖掘得到的内参基因的可靠性。该研究为扩展青霉菌的分子生物学研究提供了优良的内参基因，同时提供了一种高效的内参基因的挖掘和鉴定方法。     

RACK1基因在急性冠脉综合征行PCI术患者外周血中的表达及意义

选取在我院行PCI术的急性冠脉综合征患者66例,用实时荧光定量PCR法分别测定PCI术前及术后3个月时患者外周血单个核细胞中RACK1基因的表达。40名健康者作为对照组。测定结果是:(1)急性冠脉综合征组患者外周血单个核细胞中RACK1 mRNA表达水平明显高于对照组(17.56±4.98 vs 3.11±1.24,P0.05);(2)急性冠脉综合征患者行PCI术3月后,外周血单个核细胞中RACK1 mRNA表达水平较术前明显降低(10.84±3.71 vs 17.56±4.98,P0.05),但仍高于健康者(10.84±3.71 vs 3.11±1.24,P0.05)。RACK1在急性冠脉综合征患者外周血中表达上调,其表达水平可能和病情进展相关。     

荧光共振能量转移(FRET)的定量检测及其应用

荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET)技术被广泛应用于活细胞中生物大分子构象变化和分子间动态相互作用的实时研究.针对光谱串扰和供体受体间的浓度比等困扰FRET效率定量检测的两大难题,已经发展了多种定量检测FRET效率的方法.作者结合自己的研究结果介绍了多种FRET效率定量检测技术在细胞信号转导机制研究中的应用.     

中位芳基吡唑卟啉荧光量子产率与分子结构的定量关系研究

化合物的发光性能主要由该物质的分子结构确定.卟啉作为重要的光化学和光生物学化合物一直备受关注.从实验室合成的中位芳基吡唑卟啉的分子结构描述参数出发,着重考察了前线轨道能级、旋转半径等参数与卟啉荧光量子产率之间的关系,并建立了各参数与该类化合物荧光量子产率之间的线性模型,从理论上定量阐述了不同取代基对化合物荧光量子产率的影响.     

乙肝患者血清HBVDNA与e系统相关性的研究

用聚合酶链反应检测１３２例ｅ系统阳性慢性乙型肝炎患者血清ＨＢＶＤＮＡ．结果表明，ＨＢｅＡｇ阳性组，ＨＢＶＤＮＡ阳性率达８９．９％；抗－ＨＢｅ阳性组，ＨＢＶＤＮＡ阳性率为６８．３％．ＨＢＶＤＮＡ阳性患者的丙氨酸水平显著高于ＨＢＡＤＮＡ阳性患者，结果表明大部分抗－ＨＢｅ阳性患者体内仍存在ＨＢＶ复制及病情进展．     

HBV C区基因扩增与PCR条件的优化

目的:为提高PCR检测乙型肝炎病毒(HBV)的特异性和灵敏度,降低成本,对PCR条件进行优化.方法:将HBV特异性基因片段转化到大肠杆菌DH5α中,提取质粒,利用PCR扩增HBV C区基因,对PCR条件中的退火温度、Mg2 浓度进行优化,并比较3种不同Taq DNA聚合酶的灵敏度.结果:HBV C区基因扩增的最佳退火温度为58℃,最佳Mg2 浓度为1.5mmol/L,Biostar Taq DNA聚合酶扩增到10-6.讨论:对HBV C区基因进行了转化和PCR实验条件的优化,为扩大PCR在乙型肝炎病毒(HBV)检测领域中的应用提供实验依据.     

T—ALL／淋巴瘤中BCL11B基因转录本的分析

目的:分析T-ALL/淋巴瘤中BCL11B基因转录本的特点。方法:利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)方法分析12例T-ALL/淋巴瘤外周血单个核细胞(PBMC)中BCL11B基因的表达情况;限制性内切酶消化确定PCR产物的特异性。结果:3例T-ALL/淋巴瘤患者中出现2种BCL11B转录本:野生型和第3外显子缺失型,其余9例均表达第3外显子缺失型的转录本。两组病人PBMC中BCL11B表达水平无显著差别(P=0.301)。结论:3例T-ALL/淋巴瘤病人中存在2种BCL11B基因转录本,但在表达水平上无明显差别。     

132例急性乙型肝炎患者HBV基因型分析

为检查本地区HBV感染者基因型，对132例本地区急性乙型肝炎患者血清中HBV、DNA通过PCR检测技术进行基因型分析，结果：C型101例（75．5％），B型15例（11．7％），BC混合型12例（8．7％），A型1例（0．9％），检测结果与KaoJ H、XinDing等报道基本相似．但在132例患者中，有3例未确定基因型，原因，有待进一步探讨．     

应用聚合酶链反应检测环境污水脊髓灰质炎病毒的研究

用聚合酶链反应技术检测５个市县１５份环境污水中肠道病毒，其中１１份阳性，与细胞中和试验鉴定阳笥结果符合率９０．９０％－１００％，该法不仅简单，敏感，特异分型，而且可作型内鉴别，使细胞中和试验分型和Ｔ特征型内鉴别所需１４ｄ缩短到２ｄ。为环境样品中脊髓灰质炎病毒污染提供了检测手段。     

乙肝患者胎盘MDR1 mRNA表达及意义

目的:探讨MDR1 mRNA在乙肝患者胎盘组织中的表达及其意义。方法:选取乙肝患者足月胎盘20例;选择正常产妇足月胎盘20例作为正常对照组。实时荧光定量RT-PCR分别检测两组产妇胎盘中MDR1mRNA的表达。结果:各组荧光定量PCR检测MDR1mRNA的相对表达量为乙肝组(0.454±0.398),正常组(0.086±0.099),与对照组相比,差异有显著性(P<0.001)。结论:MDR1mRNA在胎盘组织中表达的升高,可能与乙型肝炎病毒感染有关。     

猫杯状病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

根据GenBank中编码猫杯状病毒（FCV）衣壳蛋白ORF2的保守序列, 设计并合成了一对引物和相应的TaqMan探针, 建立了快速检测FCV的荧光定量PCR
方法. 通过对该方法的反应体系和反应条件进行优化, 建立了标准曲线, 给出了特异性、 敏感性和重复性实验, 并对临床24份疑似样品（其中阳性3份、 阴性21份）进行检测.  结果表明: 该方法检测cDNA的线性关系为0.992, 线性范围为2.26×10¹¹~2.26×10¹拷贝/μL; 可检测出样品中的FCV, 其他猫相关病毒检测为阴性; 批内重复性实验变异系数为2.158%， 与病毒分离结果相符.     

转基因马铃薯植株中外源基因PCR扩增和拷贝数测定

本文报道一种简便、快速、可靠，同时又适合大量转基因植株中外源基因测定的ＰＣＲ检测技术，同时改进了转基因植物中总ＤＮＡ提取方法，并且用窄缝转移杂交测定了转基因植株中外源基因拷贝数。     

甜菊钙调蛋白基因的克隆及结构分析

钙调蛋白（Calmodulin）是生物细胞内一种重要的调控蛋白，通过其与靶酶的相互作用控制细胞正常的生长发育及细胞对外界环境变化的反应，我们从甜菊顶芽和花芽中提取总RNA，逆转录合成cDNA第一链，以此为模板，参考GenBank上已发表植物的钙调蛋白基因序列合成5′端和3′端引物，利用多聚酶链式反应（PCR）扩增并克隆得到了甜菊钙调蛋白基因的两个异型基因，序列分析表明，它们均由450个核苷酸组成，编码148个氨基酸，在核苷酸序列上与迄今已知的多种植物钙调蛋白均有很高的同源性，同源率在83％以上，编码的氨基酸序列同源性更同，同源率高达95％以上，这两个基因之间存在差异，其核苷酸序列同源率为85％，编码区的氨基酸序列的同源率为99％，仅在第122个氨基酸由ALA代替了VAL。     

乙肝病毒前S1抗原与HBeAg及HBV-DNA之间的相关分析

目的：探讨乙型肝炎病毒前S1抗原与HbeAg及HBV-DNA的关系．分析前S1抗原在临床诊断乙型肝炎病毒复制中的作用．方法：采用ELISA法检测前S1抗原,化学发光法检测乙肝五项指标,PCR法检测HBV-DNA．结果：400例HBV—DNA阳性的乙肝患者中,HbeAg阳性率为86．0％,前S1抗原阳性率为75．5％．其中：前S1抗原阳性率在HbeAg阳性患者中为75．6％、在抗-HBe阳性患者中为75．0％．HBV-DNA阳性情况下,Hbe鲰阳性与HbeAg阴性患者的前S1抗原阳性率,两组经χ^2检验,P〉0．05,无统计学差异．结论：前S1抗原是诊断乙肝病毒复制的有价值的一项血清学指标．