基因重组人Gamma—干扰素发酵和提取优化工艺的研究

对基因重组人Ｇａｍｍａ－干扰ＰＢＶ２２０ＤＨ５ａ工程菌株的发酵工艺进行了研究。结果表明,采用２５０ｍＬ摇瓶中装液量为１５０ｍＬ,按照１：４０的稀释比进行两次扩大培养,并在大肠杆菌生长最为活跃的对数生长期内进行诱导表达效果最好。     

摇瓶中重组大肠杆菌生产人γ-干扰素工艺优化

目的优化大肠杆菌生产重组人γ-干扰素摇瓶发酵工艺条件,分析摇瓶发酵过程中的制约因素。方法在摇瓶中研究了种子菌龄、接种量和诱导时机等因素对工程菌生产rhIFN-γ和质粒稳定性的影响,及优化条件下工程菌发酵参数。结果最佳条件:种子液为OD6000.5~1.5,接种量为6%,培养至OD600为1.5时42℃诱导表达4 h。在此条件下,在摇瓶中使用M9II培养基时,质粒无丢失,摇瓶中rhIFN-γ的表达量占菌体总蛋白的43.2%,光密度为3.3。对发酵过程中总糖、还原糖、总氮和pH的分析表明,发酵过程中培养基中碳源、氮源丰富,而溶解氧的不足和pH值偏酸性可能是整个培养过程的限制性因素。结论构建的工程菌发酵的稳定性和重复性良好,为rhIFN-γ的大规模生产提供可靠的放大依据。     

γ干扰素工程菌发酵工艺研究

在摇瓶培养及恒化培养研究的基础上,对含温度敏感型质粒γ干扰素工程菌高密度、高表达的发酵工艺作了探讨。摇瓶培养结果表明,菌体的良好生长状态对外源基因表达起着重要作用,工程菌于对数后期升温,干扰素滴度最高。以葡萄糖为限制性基质的恒化培养,得出了工程菌细胞生长得率与比生长速率之间的关系,同时表明工程菌升温表达前的比生长速率对表达后干扰素的比活有影响,比生长速率在0.10～0.15h~(-1)时比活最大。通过碳、氮、镁的间歇流加培养与连续流加培养,均使工程菌达到高密度与高表达,但以控制比生长速率为目的的连续流加培养较间歇流加比活提高近4倍,棕1.1×10~(10)IU/L。     

响应面法优化发酵藤茶黄酮和多糖的提取工艺

根据单因素试验的结果,采用响应面分析法优化藤茶黄酮和多糖的提取工艺.结果表明:最佳提取工艺条件为提取温度96℃,时间1.6h,料液比1∶21.在此优化工艺条件下,总黄酮和多糖的提取得率分别为22.94%和2.13%.藤茶黄酮和多糖的优化提取工艺有利于藤茶资源的综合开发利用.     

丙酮酸(盐)的液体发酵及其产物提取工艺优化的研究

采用TTC-CaCO3复合平板法筛选丙酮酸(盐)高产菌株,并采用正交实验优化丙酮酸(盐)的液体发酵条件及其产物提取工艺,结果表明:丙酮酸(盐)液体发酵培养的最优维生素组合为盐酸硫胺素0.015 mg/L,烟酸9 mg/L,生物素0.020 mg/L,盐酸吡哆醇0.35 mg/L;最优提取条件组合为:萃取剂种类为磷酸三正丁酯,发酵液与萃取液体积比为1:2,提取温度为20℃,其中萃取剂种类、发酵液与萃取液体积比对提取率的影响显著(P<0.05)丙酮酸(盐)发酵产物浓度及提取率均基本达到国内研究水平。     

微生物发酵果渣蛋白饲料Ⅰ．发酵工艺条件的研究

对产朊假丝酵母和黑曲霉在苹果渣上混合发酵生产蛋白饲料的条件进行了研究。其最佳工艺条件为：接种比例3：1，接种量29／5，pH4～5，最适温度28℃。利用1．5％尿素为氮源，培养基含水量70％左右。在上述条件下发酵48h以后，蛋白质含量达到30％以上，且有酒香味，适口性好。     

大肠杆菌生产重组人干扰素-γ培养基的研究

在M9培养基的基础上，优选出重组大肠杆菌生产人干扰素—γ(rhIFN-γ)的优化培养基配方。结果表明：优化的碳源为含量2％的葡萄糖，氮源为蛋白胨和少量的(NH4)2SO4；优化培养基有利于菌体的生长和目标蛋白的表达，使rhIFN—γ的生产能力达0．64g/L，比优化前提高了190．9％。     

Pichia pastoris发酵表达重组人复合α干扰素

在Pichia pastoris表达系统中,研究了甘油补料周期、甲醇流加策略和诱导pH对cIFN表达的影响,优化后的发酵条件是:甘油补料周期为4 h,诱导pH为5.0,基于在线甲醇检测维持甲醇浓度不超过5 g/L。培养96 h后,最大细胞干重、cIFN的表达量和生物活性分别达到168 g/L、1.24 g/L和5.4×107U/mL。     

重组人肿瘤坏死因子粗提取工艺的研究

通过研究重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)的粗提取工艺中各操作条件对目标蛋白纯化的影响,发展了一条纯化rhTNF-α的集成化工艺.该工艺组合细胞破碎,热变性与硫酸铵分级沉淀,有效节省离心步骤,缩短工艺流程,所得粗提物中目标蛋白占总蛋白含量的57%,目标蛋白回收率为90.3%,活性回收率为85.8%,各项指标均比未集成的工艺有较大程度的提高.     

微生物发酵果渣蛋白饲料Ⅱ.发酵工艺条件的研究

对产朊假丝酵母和黑曲霉在苹果渣上混合发酵生产蛋白饲料的条件进行了研究.其最佳工艺条件为:接种比例3:1,接种量2%,pH4～5,最适温度28 C.利用1.5%尿素为氮源,培养基含水量70%左右.在上述条件下发酵48 h以后,蛋白质含量达到30%以上,且有酒香味,适口性好.     

响应曲面法优化重组人神经生长因子发酵培养基组成的研究

通过响应曲面法(RSM)达到优化重组人神经生长因子发酵培养基组分含量的目的.对发酵基础培养基采用四因素三水平实验设计,优化了葡萄糖、酵母粉、蛋白胨和KH2PO4的最佳浓度,得到了最大预测值并进行了验证.最终优化培养基组分为:葡萄糖7.95 g/L、蛋白胨19.06 g/L、酵母粉13.51 g/L和KH2PO43.87g/L,此时预测最大菌体量Ymax=2.398 g/L.验证试验结果表明:使用优化后的培养基表达重组人神经生长因子,其菌体量的平均值为(2.357±0.083)g/L,实验值与预测值基本相符,均高于优化前菌体量,且其表达量也得到相应提高.     

D-核糖提取工艺的研究

核糖发酵液用饱和醋酸铅除去菌体、杂蛋白,然后通过ＡＢ－８ 树脂进行脱色,脱色液分别经过００１×７,２０１×７ 树脂脱盐后,经过浓缩,于２０１×４ 硼酸型阴离子交换树脂进行分离。以０．０２ ｍ ｏｌ／Ｌ四硼酸钠缓冲液为洗脱液,将其中核糖流分浓缩、加甲醇除去硼酸根后,加乙醇减压浓缩得到白色核糖固体。     

重组人干扰素α-2b工程菌培养条件的优化研究

对重组人干扰素α-2b工程菌的培养条件、诱导条件进行研究.提高菌体目标蛋白表达量.通过实验条件的优化确定了适合重组人干扰素α-2b表达的诱导温度、诱导时间和诱导收获时间等.改进工艺后,目的蛋白的表达量大大提高,为进一步的下游工艺的开发奠定了基础.     

基因重组质粒稳定性与苯丙氨酸发酵的研究

本研究应用具有苯丙氨酸生产基因 pheA~(FR)、aroF~(FR)、CI_(857) 的质粒 pSY130～14和质粒 pS Y16,重组构建了具有苯丙氨酸生产基因系统的新质粒 pSY200-14。然后,使其转化到大肠菌 AT2471中,育成了基因重组菌株 AT2471/pSY200-14。试验表明,新菌株质粒稳定性比原菌株有较大的提高。在2. 5升通气搅拌罐进行苯丙氨酸发酵试验,在搅拌转速850rpm、通气速率1. 0VVM,38. 5℃和 pH7. 0的条件下,发酵48小时苯丙氨酸生成量达14. 2g/L,比原菌株 AT2471/pSY130-14增产11. 8%。     

包含体蛋白质的分离与复性研究概况

本文概述了近年来包含体分离和复性方面的研究结果,总结了包含体的形成、分离、纯化和复性条件,展望了该领域的研究前景.     

透析法和稀释法复性重组人Cu,Zn-SOD包含体

以稀释法和透析法对在E.coli中以包含体形式表达的重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)进行复性.以8 mol/L尿素溶解分离纯化的包含体(纯度达80%以上),对其稀释或透析至尿素终浓度为1.0 mol/L后,在稀释样品中补加终浓度50μmoL/L的Cu2+和5.0μmoL/L的Zn2+,在透析样品中补加终浓度5.0μmoL/L的Cu2+和0.5μmoL/L的Zn2+,分别获得了比活3 300 u/mg和4 300 u/mg的复性rhSOD.该复性样品经铜螯合亲和层析柱纯化可获得更高比活性的rhSOD.     

灵芝GL8801液体发酵胞外多糖的提取和结构研究

报导液体发酵的灵芝ＧＬ８８０１胞外多糖的提取和结构特性．以溶媒沉淀法提取灵芝胞外多糖，其胞外多糖可分为水溶性和水不溶性两种，均含氮．水溶性多糖由半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖和木糖组成，４种单糖比值为６∶４∶４∶１，水不溶性多糖中的单糖组分则绝大部分为葡萄糖．     

蚕蛹蛋白提取工艺优化的研究

以蚕蛹为原料,选用5种不同溶剂作为提取剂,采用索氏提取法提取蛹油制备脱脂蛹;对脱脂蛹采用二次回归正交旋转组合设计,以碱溶酸沉法提取蚕蛹蛋白.结果表明,正己烷为蚕蛹油最佳提取溶剂,其出油率为28.9%,提取蚕蛹蛋白的最佳条件为pH=10,料液比1:12,温度60℃,提取时间90 min,连续提取两次,提取率为48.22%;蚕蛹蛋白等电点为4.4,冻干后蛋白含量达到95.2%.     

重组鲑鱼降钙素融合蛋白工程菌发酵工艺研究

为研究大肠杆菌表达重组鲑鱼降钙素融合蛋白(GST-sCT-Gly)工程菌的发酵工艺,采用瑞士比欧生物工程公司40 L发酵罐发酵,对影响工程菌生长和目的蛋白的表达条件进行优化;在优化条件下,以40 L发酵罐发酵工程菌,菌体收获量可达到57 g/L,目的蛋白表达量占总蛋白的23.5%;结果表明,研究确定的发酵工艺可以提高工程菌收获量及目的蛋白的表达量,且稳定可靠,可应用于生产。