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A mechanism for initiating RNA-dependent RNA polymerization 总被引:26,自引:0,他引:26
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Double-stranded RNA viruses have an RNA-dependent RNA polymerase activity associated with the viral particles which is indispensable for their replication cycle. Using the yeast L-A double-stranded RNA virus we have investigated the mechanism by which the virus encapsidates its genomic RNA and RNA polymerase. The L-A gag gene encodes the principal viral coat protein and the overlapping pol gene is expressed as a gag-pol fusion protein which is formed by a -1 ribosomal frameshift. Here we show that Gag alone is sufficient for virus particle formation, but that it fails to package the viral single-stranded RNA genome. Encapsidation of the viral RNA requires only a part of the Pol region (the N-terminal quarter), which is presumably distinct from the RNA polymerase domain. Given that the Pol region has single-stranded RNA-binding activity, these results are consistent with our L-A virus encapsidation model: the Pol region of the fusion protein binds specifically to the viral genome (+) strand, and the N-terminal gag-encoded region primes polymerization of Gag to form the capsid, thus ensuring the packaging of both the viral genome and the RNA polymerase. 相似文献
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逆转录聚合酶链式反应快速检测水稻条叶枯病毒 总被引:1,自引:0,他引:1
逆转录聚合酶链式反应(Reverse Trascription and Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)具有灵敏度高,准确性好的特点,因而被广泛应用于植物病毒检测。在RT反应中,RNA样品的快速制备尤为重要用异丙醇二步沉淀法获得RNA,快速检测水地片中RStV伯RT-PCR方法,可使测定时间缩短至6h,并可从0.078mg感病叶片中检测出RStV。 相似文献
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从病变鸡法氏囊组织中分离纯化IBDV,提取其基因组RNA.以IBDVRNA为模板,进行反转录反应合成cDNA第1链.采用PCR技术扩增VP5基因.将PCR产物经酶切后与pcDNA3.1(+)载体连接,经转化、筛选得到重组质粒pIBDV-VP5.对VP5基因进行了测序并对其序列进行了分析. 相似文献
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对虾桃拉病毒(TSV)RT-PCR快速诊断技术的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
对虾桃拉病毒(Taura Syndrome Virus,TSV)最早于1992年在凡纳对虾(Penaeus vannamei)体内发现,此病毒是对虾养殖业危害较严重的病毒之一.将该病毒基因组的一段序列克隆至转录载体pSP64(PolyA)上。经体外转录、磁珠法分离、纯化获得了人工的TSV-RNA模板;用定量的TSV-RNA阳性对照模板进行RT-PCR条件优化。灵敏度检测以及样品制备方法等试验,结果表明:RT-PCR检测的灵敏度可达到0.1fg,相当于100个病毒粒子;所制备的样品对病毒RNA的逆转录及扩增无抑制,适合于对虾桃拉病毒快速检测. 相似文献
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模板甲基化水平对鼠肝RNA聚合酶体外转录活性的影响 总被引:1,自引:2,他引:1
利用3H-UTP同位素参入法,研究了大鼠肝细胞RNA聚合酶在核内外的转录活性,结果表明:在细胞核内的转录活性明显低于在无核抽提物中的转录活性。利用自身的DNA模板,优于利用外加的DNA模板。并比较了不同DNA甲基化水平的模板对RNA聚合酶体外转录活性的影响,发现模板的甲基化水平与其体外转录水平呈反相关。 相似文献
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利用RT-PCR技术鉴定人ZP3嵌合肽基因在昆虫细胞中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨在转录水平上对人卵透明带蛋白3(hZP3)嵌合肽在昆虫细胞中的表达鉴定.方法:用含目的基因的重组病毒感染昆虫细胞,用LiCl法提取RNA,以其为模板,利用一步法RT-PCR反转录出目的DNA.结果:琼脂糖凝胶电泳显示其PCR产物只有一条DNA条带且与目的基因大小一致,而阴性对照未见任何条带.结论:hZP3嵌和肽基因在重组病毒感染的昆虫细胞中成功转录,初步验证了目的基因的表达. 相似文献
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Specific binding of the transcription factor sigma-54 to promoter DNA. 总被引:11,自引:0,他引:11
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