云南省几种主要烟草病毒病理特征的观察

采用ＥＬＩＳＡ，免疫电镜，常规电镜及田间症状观察法对云南省３４个县市烟草病毒病害进行了调查。云南省烟草病毒病害主要病原为ＴＭＶ，ＴＥＶ，ＣＭＶ，ＰＶＸ，ＰＶＹ。五种主要烟草病毒复合侵染的现象非常突出有两种至五种病毒复合侵染的现象，表现出非常复杂的田间症状。     

烟株不同叶位及接种方式对TMV传播的影响

为进一步弄清烟草普通花叶病毒病的传毒规律.试验以烟草品种K326为材料,连续3a以不同接种方式对健康烟株进行TMV接种试验.结果表明:烟草普通花叶病不通过烟叶气孔传毒,而是通过微伤口、大伤口和叶面与叶面接触渠道传播病毒,而且病毒人口离生长中心越近,病毒传播表现的速度更快,病毒的潜伏期为15～30 d,且在接种30～45d内,烟叶的发病率有一高峰值;烟草普通花叶病毒在烟株的幼嫩叶片上更易传播,症状表现在接种以上的叶片上,带病症的老叶片随着烟株的生长,症状会慢慢消失;在20～35℃的范围内,高温高湿有利于病毒的侵染和症状的表现.杜绝烟草幼嫩叶片摩擦伤口和TMV接触,是防治烟株上TMV传播的有效途径.     

TBSV病毒瞬时表达载体构建及其表达

为了深入理解植物RNA病毒载体表达系统,初步建立了利用TBSV病毒表达载体在寄主植物烟草中表达外源蛋白的技术体系.以番茄丛矮病毒(Tomato bushy stunt virus,TBSV)为材料,构建了含报告基因sGFP的WY1,WY2等2个重组病毒表达载体,并将载体导入农杆菌GV3101用于侵染烟草植株叶片;利用农...     

嘧肽霉素对烟草花叶病毒在不同寄主上的防效研究

嘧肽霉素是一种新型抗病毒生物农药,针对烟草花叶病毒的不同系统寄主进行了该药剂的防效实验．结果表明：嘧肽霉素对不同系统寄主上的TMV引起的病毒病害都具有很好的防效,对TMV侵染烟草引起的烟草病毒病害的预防较为显著,抑制率达80．4％,在辣椒、番茄上也具有很好的防治效果．     

烟草病毒病的化学防治初报

烟草病毒病中 ,烟草花叶病是烟田发生最严重危害最大的一种 ,平均发病率在 15 %左右 ,大发生年份可达 6 0 % ,严重的田块病株率超过 80 % ,甚至绝收 ,给烟叶产量和质量造成极大损失。感病烟株表现为矮化、萎缩、畸形、小叶、蕨叶和坏死等症状 ,直接影响烤烟的产量特别是影响中、上等烟的比例 ,造成中上等烟比例下降[3 ,4] 。本研究用新型植物病毒抑制剂———病毒必克(烟草专用型 )对烟草花叶病进行防治试验 ,并初步分析了药剂防治后对烤烟化学成分的影响。本试验是在西北农林科技大学试验田及陕西烟草研究所泾阳实验田的中壤土、肥力中等的…     

植物源抗病毒活性物质研究进展

国内外研究者进行了大量的研究工作 ,以求筛选出高效防治植物病毒的活性物质。1)抑制病毒侵染类。在植物提取液中存在与植物病毒体外结合的活性成分 ,使其丧失侵染能力 ,陈启建等测试了从三叶鬼针草中提取的黄酮甙对烟草花叶病毒TMV的抑制作用 ,发现黄酮甙对TMV具有明显的体外钝化作用 ,其质量浓度为 10 0 μg·mL-1时 ,对TMV的抑制率为 91.3% ,但对烟草体内病毒复制无显著的抑制效果。聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明黄酮甙可与TMV外壳蛋白结合 ,透析或萃取可使这种结合解离 ,使病毒恢复侵染力 ,说明黄酮甙对病毒无直接杀灭作用。刘国坤…     

利用叶圆片法获得CMV_（CP）转基因烟草植株

利用叶圆片法得到ＣＭＶＣＰ转基因烟草植株ＤＮＡ，ＲＮＡ与ＣＭＶＣＰ放射性标记探针点杂交及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交的结果表明：ＣＭＶＣＰ基固可整合到烟草转基固株并且表达．叶面病毒接种后，转基因植株对ＣＭＶ病毒具有高抗性．     

烟草双生病毒RaMoV在烟粉虱中的检测

苎麻花叶病毒(Ramie mosaic virus,RaMoV)是常见由烟粉虱传播的双生病毒(Geminivirus)。用特异性引物进行PCR检测,结果发现,B型烟粉虱(Bemisia tabaci)能够在烟草上传播该双生病毒。     

过氧化物酶活性与烟草脉坏死病抗性的关系

测定了接种马铃薯Y病毒脉坏死株系后转PVY－N1b基因的抗性烟草NC89和非转基因敏感烟草NC89的叶片组织透性和过氧化物酶活性,并对过氧化物酶同工酶进行了电泳分析,结果表明：抗、敏烟草叶片的组织透性与叶片内过氧化物酶活性的变化趋势一致,两者在接种后均呈增高趋势,且敏感烟草的增高幅度明显高于抗性烟草;接种后,两者的过氧化物酶同工酶均出现了一条新酶谱,抗性烟草植物的新酶带在接种后第2天开始出现,而敏感烟草的新酶带则在接种后第6天开始出现,且活性明显强于抗性烟草。     

烟草坏死病毒植物病毒载体的构建

烟草坏死病毒A是单链RNA病毒，它的全基因组序列已被测出，含有6个开放表达阅读框。利用套叠PCR的方法将克隆于pMD18-T载体上烟草坏死病毒A基因的ORFⅣ与ORFⅤ（外壳蛋白）之间的非编码区形成突变SphI位点，最后将突变后的TNV-A全基因插入植物表达载体pE1802的SadI／SmaI之间，构建成植物病毒载体pE1802-TNV。     

植物病毒增殖的数值研究与转基因植株的抗病毒机理

通过计算机模拟病毒增殖过程并结合对基因组ＲＮＡ高级结构的预测,对烟草花叶病毒增殖中的负链特异终止现象给解释。     

云南省烟草病毒病的调查与研究

采用ＥＬＩＳＡ，免疫电镜，常规电镜及田间症状观察法对云南省３４个县市烟草病毒病害进行了调查。云南省烟草病毒病害主要病原为ＴＭＶ，ＴＥＶ，ＣＭＶ，ＰＶＸ，ＰＶＹ。其分别占病毒病发病率的４２．４８％；６０．４２％；５６．４８％；３７．２０％；３７．７３％；ＴＥＶ发病率最高。另外混合侵染的现象非常突出，有两种至两种病毒复合侵染的现象，表现出非常复杂的田间症状。     

间接酶联检测法浅谈

比较了间接酶联检测法和双抗体夹心法检测烟草花叶病毒(TMV)的结果，检测提纯的病毒和叶片榨汁中的病毒，间接酶联检测法的灵敏度都比夹心法高．     

斑点免疫结合法检测3种植物病毒

研究了改进的斑点免疫结合法在检测芜菁花叶病毒、烟草花叶病毒和小西葫芦黄化花叶病毒中的应用.无论是使用全抗血清还是纯化的免疫球蛋白,检测感染组织粗汁液中的病毒或纯化的病毒,均获得了满意的结果.同时进行的斑点免疫结合试验、酶联免疫吸附试验和免疫吸附电子显微术等的比较结果表明:无论是检测纯化病毒还是感染组织粗汁液中的病毒,斑点免疫结合法的检测敏感性均优于后2种方法,病毒的可测感度芜菁花叶病毒为0.65ng,烟草花叶病毒为0.39 ng,小西葫芦黄化花叶病毒为0.45 ng;应用碱性磷酸酶标记抗体及羟基吲哚磷酸盐和氮兰四唑为底物较为合适,这种底物可在室温下长期保存,并且反应产物为不褪色的紫色,易于观察和保存.     

H5N1型禽流感病毒HA基因在烟草中的表达

禽流感病毒H5N1是可以直接感染人类的甲型流感病毒,发展植物源口服疫苗是疫苗研究的方向之一.本研究通过农杆菌介导的方法将禽流感病毒H5N1的HA基因转化烟草.共获得38株潮霉素抗性植株,经PCR和Southern-blotting检测,目的基因已整合到转基因植株的基因组中.Western-dotting检测结果表明,目的基因在转基因烟草中得到表达,具有免疫原性,获得了能够表达HA基因的植物口服疫苗候选植株.     

用斑点免疫结合法检测转化的烟草植株中的TMV—CP和CMV—CP

1982年,Hawkes 等人仿照分子生物学中点杂交(dot hybridization)的方法发展了斑点免疫结合测试技术(DIBA)用于检测单克隆抗体。本实验就 DIBA 应用在检测转基因烟草。烟草用发根农杆菌 Ri 质粒介导,将烟草花叶病病毒外壳蛋白基因(TMV—CP)和黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因(CMV—CP)导入烟草的叶片外植体中,通过对外植体的培养,得到愈伤组织,从愈伤组织进而获得了再生植株,对再生植株进行检测导入的外壳蛋白基因的表达量。     

中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCV-CHI)外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备

经PCR获得了中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCV-CHI)外壳蛋白(CP)基因,并克隆到pGEM-7Zf(+)载体上.序列分析表明,TYLCV-CHI感染番茄或烟草时,CP基因的核苷酸序列发生变化,并且在烟草上随感染时间的延长,突变频率增高.连接到含有编码tRNAarg4基因argU的表达载体pSBET后,TYLCV-CHI CP基因在大肠杆菌中以包含体形式得到大量表达(约33 ku).以表达的蛋白作抗原免疫家兔,制备了抗TYLCV-CHI CP的抗血清.ELISA实验表明,该血清与抗原特异反应,血清效价为1:3000.Western印迹实验还表明,该血清除了与感染TYLCV-CHI的番茄、烟草有特异免疫反应外,还与感染南瓜曲叶病、烟草曲叶病的叶片有免疫反应,表明这些病毒之间有明显的血清学关系.     

由感染流感病毒的组织提取感染性核糖核酸

引言从Gierer与Schrammm及Frankel-Conra分别报告用酚及硫酸十二酯钠法分离出感染性的烟草花叶病毒核酸以来,许多作者都分别以类似的方式、尤其是时法从植物病毒、动物病毒中分离出二十种以上的不同病毒核酸,并证明这些核酸具有感染性.不过全部报导几乎限于核糖核酸病毒.其中对于流感病毒的感染性核酸似还存在不少问题.     

新疆甜菜上两个病毒分离物的研究

在新疆甜菜的根部和叶片分离到两种病毒分离物。回接到甜菜上均产生环斑和沿脉线纹。最后形成坏死斑。病毒粒体为20面体,平均直径28nm。除侵染甜菜外还侵染苋色藜,昆诺阿藜、番杏、菠菜等,引起局部坏死斑,在普通烟、心叶烟、菜豆、黄瓜、番茄上无症状侵染,病毒致死温度为70℃,10分钟,体外存活期13天以上,冻干病叶三年后仍有侵染力。通过PEG沉淀。差速离心,琼脂糖柱层折及蔗糖梯度离心,可得到较高浓度的纯化病毒,病毒的紫外吸收最低值在245nm,最高值在260nm。病毒外壳蛋白的分子量为54000道尔顿,病毒基因组核酸为两个组份。在琼脂双扩散实验中,能与番茄黑环病毒(TBRV)抗血清产生较弱的沉淀线,与黄瓜花叶病毒(CMV),烟草坏死病毒(TMV)。烟草环斑病毒(TRSV)不发生反应,从上述结果可以初步认为这两种分离物为番茄黑环病毒侵染甜菜的一个株系。     

H5N1型禽流感病毒HA基因在烟草中的表达

禽流感病毒H5N1是可以直接感染人类的甲型流感病毒，发展植物源口服疫苗是疫苗研究的方向之一．本研究通过农杆菌介导的方法将禽流感病毒H5N1的HA基因转化烟草．共获得38株潮霉素抗性植株，经PCR和Southern-blotting检测，目的基因已整合到转基因植株的基因组中．Western-dotting检测结果表明，目的基因在转基因烟草中得到表达，具有免疫原性，获得了能够表达HA基因的植物口服疫苗候选植株．