吲哚美辛对人喉癌Hep-2细胞系的抑制作用

目的：评价吲哚美辛对人喉癌Hep-2细胞系的抑制作用。方法：应用不同剂量的吲哚美辛作用于人喉癌细胞系Hep-2后,进行细胞形态观察,并用台盼蓝染色法检测细胞生长情况和流式细胞仪分析细胞DNA含量。结果：Hep-2细胞系在吲哚美辛作用下,细胞生长形态改变,细胞活力降低,流式细胞仪分析形成明显的亚二倍体峰,并与药物剂量及作用时间有依赖关系,电镜下见凋亡细胞。结论：吲哚美辛能抑制人喉癌细胞系Hep-2的生长,诱导细胞凋亡。     

Hep-2细胞的PCC研究

以Ｈｅｐ＿２ 细胞为材料研究早熟染色体浓集技术（ＰＣＣ） 结果表明：诱导细胞融合的条件包括使用ＰＥＧ作融合剂，并使用高ｐＨ 值的培养基。得到了Ｇ１ 期、Ｓ期、Ｇ２ 期的ＰＣ染色体。     

人源CPP32基因表达对酵母细胞生长的影响

为研究人源ＣＰＰ３２基因的表达对酵母细胞生长的影响,了解其所编码的蛋白质在分子进行过程中的功能特性,将不原ＣＰＰ３２基因克隆到表达载体ｐＧＢＴ９中,得到重组质粒并命名为ｐＧＢＴ９／ＣＰＰ,再将其和对照质粒ｐ（ＧＢＴ９）分别转化到ＣＧ１９４５和ＨＦ７ｃ酵母细胞中,一定时间测定培养物的ＯＤ６００值并做出生长曲线。结果表明：诱导真核细胞程序性死亡的人源ＣＰＰ３２基因对不同种的酵母细胞的作用不同;转化到宿     

百草枯对人肝HepG2细胞生长和周期的影响

为全面理解百草枯(PQ)对人肝的毒性效应,寻找新的方法增强肝对PQ的解毒能力,本文采用显微观察和流式细胞术分析了PQ处理24h对人肝HepG2细胞生长和周期的影响.结果显示,7.21mg/L的PQ处理即可抑制部分HepG2细胞的生长,23.36mg/L的PQ可导致HepG2细胞周期停滞,S期细胞明显减少、G1和G2期细胞明显增多,且细胞生长抑制和周期受阻程度与PQ处理浓度呈正相关.该结果表明,PQ对HepG2细胞的生长和周期具有明显阻滞作用,生长因子类或促增殖类药物可能有助于增强人肝对PQ的解毒能力.     

乳苣水提取物对人肺癌细胞SPCA-1生长的影响

为了探讨乳苣水提取物对体外培养的肺癌细胞SPCA-1的影响,分别用质量浓度为0.5、1、1.25和1.5 g/L(mg/m L)的乳苣水提取物处理SPCA-1细胞,24 h后通过CCK-8法检测发现,与对照组(未处理)相比,处理组细胞增殖活力均显著下降(P0.001).流式细胞仪检测(AnnexinⅤ-FITC/PI染色)发现随着处理浓度的增加,处理组细胞凋亡率都显著提高(P0.05),且呈剂量依赖关系.为了探索乳苣是否对体内肿瘤有抑制作用,构建了SPCA-1细胞的裸鼠皮下瘤模型,通过观察喂食乳苣水提取物后皮下瘤的生长情况发现,与未喂食乳苣水提取物的对照鼠相比,喂食5周后的实验组的瘤体得到明显的抑制.实验结果表明乳苣水提取物能够抑制体外和体内生长的SPCA-1细胞,可以作为一种潜在的预防和治疗肺癌的药物做进一步研究.     

臭灵丹中HTMF诱导Hep-2细胞凋亡

目的:探讨中药臭灵丹中3,5-二羟基-6,7,3',4'-四甲氧基黄酮(HTMF)诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡的机制.方法:倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst 33258染色,观察对Hep-2细胞的致凋亡能力;流式细胞仪检测HTMF对Hep-2细胞的凋亡率和线粒体跨膜电位(Δφm)的改变;Western blotting法检测凋亡蛋白caspase-3和caspase-9的变化.结果:倒置显微镜下Hep-2细胞随HTMF浓度加大而变小变圆,细胞存活数随浓度增加而减少.Hoechst 33258染色后高浓度组Hep-2细胞核固缩并出现呈致密浓染蓝白色颗粒状荧光的凋亡小体.流式结果显示HTMF对Hep-2细胞有促凋亡作用并呈明显的量效关系,线粒体跨膜电位(Δφm)随HTMF浓度的增加而下降.Western blotting结果显示HTMF可诱导Hep-2细胞中caspase-3和caspase-9蛋白活化,并呈浓度依赖性关系.结论:HTMF可通过线粒体途径诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡.     

敲低EYA3基因抑制人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞的生长

为了探讨人眼缺失基因(EYA3)在人视网膜母细胞瘤发生发展中的生物学作用,构建了EYA3小干扰RNA (siRNA)的真核表达载体,并验证敲低效果和观察其对人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞生长的影响.根据人EYA3的cDNA序列,将设计含有小发卡结构的寡核苷酸序列克隆到siRNA表达载体上;将重组质粒转染HEK293T细胞中,通过实时定量RT-PCR及Western印迹检测EYA3基因的表达水平;重组质粒稳定转染人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞并利用生长曲线检测EYA3对其生长的影响.结果表明:构建的siRNA能够抑制EYA3基因的表达,生长曲线验证EYA3 siRNA基因能抑制人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞的生长.最后结论是EYA3 siRNA能够抑制人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞的生长,本实验为进一步研究EYA3在视网膜母细胞瘤中的功能奠定了基础.     

新狼毒素A对人肝癌Hep G2细胞糖酵解的影响

目的研究新狼毒素A对Hep G2细胞糖酵解的影响。方法 SRB法检测新狼毒素A对Hep G2细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测细胞形态变化以及对细胞增殖的影响;试剂盒法检测新狼毒素A对Hep G2细胞三磷酸腺苷(ATP)含量的影响,试剂盒法检测新狼毒素A对细胞上清液中乳酸含量(LD)和葡萄糖含量的改变,以及新狼毒素A对细胞中己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响。结果新狼毒素A(0,20,40,80μg/m L)显著抑制Hep G2细胞的增殖且呈剂量依赖性;不同浓度的新狼毒素A作用48 h后,细胞中ATP含量逐渐降低,细胞上清液中葡萄糖含量逐渐增大和乳酸含量逐渐减小;糖酵解相关酶(PK和LDH)的活性也逐渐下降。结论新狼毒素A能够影响Hep G2细胞糖酵解水平,其机制可能与减少葡萄糖摄取,抑制糖酵解关键酶有关。     

PTTG基因对人垂体瘤细胞侵袭能力的影响

目的：本研究的目的在于PITG基因过表达及沉默对人垂体瘤细胞侵袭力的影响,探讨其与垂体瘤细胞侵袭性的关系及调控机制。方法：用脂质体转染携带PTTG基因的表达质粒,构建过表达PTTG基因的垂体细胞株,观察细胞形态。另外我们运用脂质体转染PITGsiRNA对垂体瘤中的PITG基因进行干扰;利用Western blot技术检测其基沉默效应;通过Transwell小室法测定垂体瘤细胞侵袭能力的改变。结果：转染PITG siRNA后,垂体瘤细胞中PTIG的mRNA转录和蛋白表达受抑,显著低于未经处理的垂体瘤细胞（P〈0.01）。利用PTTGsiRNA对PTTG进行RNA干扰后,垂体瘤细胞的侵袭能力下降。结论：（1）在正常垂体细胞中过表达PTTG基因也可以引起细胞癌变,增强侵袭能力。（2）设计的PTTG siRNA能有效抑制体外培养垂体瘤细胞中PTTG的mRNA转录和蛋白表达水平,实现其基因沉默效应。PTTG与人垂体瘤的侵袭能力密切相关,其表达水平下降导致细侵袭能力降低。     

LPA对人结肠腺癌Caco2细胞SLC26A3表达的影响

为探讨溶血磷脂酸(LPA)对溶质载体26 A3(solute carrier 26 A3′SLC26A3或DRA)在Caco2细胞中细胞内定位及蛋白表达的影响。采用构建pIRES2-ZsGreen1-SLC26A3质粒,转染Caco2细胞,G418筛选获稳转pIRES2-ZsGreen1-SLC26A3 Caco2细胞。设立未处理的Caco2细胞组(Caco2组)、转染空质粒的Caco2组(NP-Caco2组)、转染SLC26A3质粒的Caco2组(SLC26A3-Caco2组)、LPA处理的转染空质粒的Caco2组(LPA+NP-Caco2组)和LPA处理的转染SLC26A3质粒的Caco2组(LPA+SLC26A3-Caco2组),以LPA与Caco2细胞共孵育12 h为观察时间点(LPA浓度为100μmoL/L),利用细胞免疫荧光实验观察Caco2细胞中SLC26A3的定位分布,Western blot法检测Caco2细胞中SLC26A3蛋白的表达。结果显示,细胞免疫荧光实验观察结果显示LPA+SLC26A3-Caco2组SLC26A3细胞膜定位较SLC26A3-Caco2组的略有增加;Western blot检测结果显示LPA+NP-Caco2组的糖基化SLC26A3蛋白表达量较Caco2组与NP-Caco2组的均增加,有统计学意义(相对β-actin的表达量,LPA+NP-Caco2组vs.Caco2组:0.83±0.446 vs.0.14±0.050,P=0.018;LPA+NP-Caco2组vs.Np-Caco2组:0.83±0.446 vs.0.29±0.032,P=-0.044)。由此可知,LPA可促进SLC26A3在Caco2细胞的细胞膜定位和蛋白表达,从而为LPA作为治疗结肠炎相关性腹泻的候选药物提供更多理论依据。     

SOD1、SOD2基因缺失对砷诱导酵母细胞凋亡的影响

为了探讨SOD1和SOD2基因在亚砷酸钠诱导酵母细胞凋亡中的作用,文章以酿酒酵母野生株BY4741(WT)及其突变体Δsod1和Δsod2为材料,研究了亚砷酸钠对酵母细胞生长和相对存活率的影响,以及酵母细胞在亚砷酸钠胁迫下活性氧(Reactive oxygen species, ROS)水平、线粒体膜电位和细胞凋亡率的变化。结果显示,亚砷酸钠可抑制酵母细胞生长,诱导胞内ROS水平和细胞凋亡率升高。在相同砷处理组中,Δsod1相对存活率和线粒体膜电位显著低于野生株,而细胞胞内ROS水平和细胞凋亡率显著高于野生株;Δsod2细胞凋亡率显著高于野生株。因此,亚砷酸钠诱导的酵母细胞凋亡与胞内ROS水平的升高有关,而超氧化物歧化酶基因与亚砷酸钠引起的细胞凋亡密切相关。     

转染野生型p53基因对人白血病细胞系生长的影响

目的研究转染野生型p53基因对人白血病细胞的生长影响作用．方法将克隆有野生型p53基因的pUHD10-3质粒,通过Lipofectin转染人白血病细胞株U937、K562、HL60,用四甲基偶氮唑（Mlvr）法观察细胞的生长情况．结果转染野生型p53基因,可使人白血病细胞U937、K562、HL60的生长明显受到抑制,第4天生长抑制率分别是28．6％、44．9％及49．0％．结论转染野生型p53基因能有效抑制人白血病细胞U937、K562、HL60的生长．     

对映-贝壳杉烷二萜化合物RabdosinB对人肝癌细胞HepG2生长的影响

采用显微观察法、生长曲线法检测Rabdosin B对人肝癌细胞HepG2的增殖抑制和致死效应;同时采用考马斯亮蓝染色法检测该化合物对与细胞贴壁性相关的应力纤维的影响,以探讨对映-贝壳杉烷二萜化合物Rabdosin B对人肝癌细胞HepG2的增殖影响及致其死亡的作用.研究结果表明:Rabdosin B低浓度条件下(3.125～12.5 μmol·L-1),人肝癌细胞HepG2增殖受到明显的抑制;高浓度条件下(25～50 μmol·L-1),处理时间为0～24 h时,HepG2细胞的增殖被完全抑制;当药物持续处理24～60 h时,细胞显示出明显的致死效应,其中25 μmol·L-1处理组细胞显示了凋亡特征,而50 μmol·L-1处理组则显示了坏死现象.细胞的应力纤维随药物浓度增加,其数量逐渐减少,最后降解.由此所得结论是:Rabdosin B表现了显著的细胞毒性,在低浓度条件下抑制细胞生长,高浓度条件下可通过凋亡和坏死途径致细胞死亡.其机理尚需进一步研究.     

拉伸应变波形对人肺腺癌细胞A549粘弹性的影响

通过FX-4000柔性基底加载系统研究了不同波形的周期性拉伸应变对体外培养人肺腺癌A549细胞粘弹性的影响,采用微管吸吮技术考察A549细胞的粘弹性特性,将方波及正弦波作用下的A549细胞与对照组细胞粘弹性进行比较．选择三参数标准线性固体模型拟合实验结果,并用三个粘弹性系数比较各组A549细胞的力学性质．实验结果表明：与对照组比较,在胶原蛋白基底膜上,应变幅度15％,频率0．5Hz,加载时间4h,方波拉伸组A549细胞的粘弹性系数k1,k2和μ值均明显降低;正弦波拉伸组A549细胞的k1和k2值有所减小,μ值无明显差异．研究表明：方波拉伸后的A549细胞更容易变形,细胞刚性减小．     

龙葵碱对HepG2细胞NAT1酶活性的影响

探讨龙葵碱对HepG2人肝癌细胞的N-乙酰基转移酶1(NAT1)酶活性的影响.采用高效液相色谱法(HPLC),以对氨基苯甲酸(PABA)为底物,以PABA被NAT1乙酰化为乙酰对氨基苯甲酸(Ac-PABA)的量反应NAT1酶的活性.观察不同质量浓度、不同时间龙葵碱对完整HepG2细胞NAT1酶活性的影响;龙葵碱对HepG2细胞细胞质中NAT1酶活性的影响.结果表明,在NAT1酶活性测定中,龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT1的活性;龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT1的活性,且作用具有剂量依赖性;随着时间的增加NAT1转化产物的量逐渐增加,但龙葵碱能显著降低同一时段NAT1的活性.提示龙葵碱通过抑制HepG2细胞中NAT1的活性是龙葵碱抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用机制之一.     

pEGFP-IFI16表达载体构建及其表达对Hep-2细胞增殖的影响

RT-PCR扩增的IFI16基因连接到pUCm-T载体并测序鉴定,经测序正确的IFI16基因再连接到pEGFP-C1载体构建pEGFP-IFI16重组质粒,重组质粒pEGFP-IFI16转染Hep-2细胞后用荧光显微镜及半定量RT-PCR分析其表达情况,并用流式细胞仪测定细胞生长曲线分析其表达对Hep-2细胞增殖的影响.结果显示pEGFP-IFI16重组质粒构建正确,转染Hep-2细胞后荧光显微镜下观察到绿色荧光信号,半定量RT-PCR结果显示转染后Hep-2细胞IFI16基因条带亮度明显升高,细胞生长曲线测定结果显示转染后Hep-2细胞从第二天起其增殖速度变慢、至第三天时其增殖速度明显慢于对照细胞的增殖速度.说明成功构建了能在Hep-2细胞中表达EGFP-IFI16融合蛋白的pEGFP-IFI16重组质粒,pEGFP-IFI16重组质粒体表达能抑制Hep-2细胞的增殖.     

人RP2基因在果蝇胚胎细胞中的表达

将质粒pJLA503中的RP2编码cDNA用PCR的方法扩增,并与pIND-3myc质粒上的人c-myc编码序列连接到果蝇转基因载体pUAST上,构建了UAS－RP2－3myc和UAS－RP2(del6)-3myc融合质粒。用脂质体转染的方法,将质粒导入果蝇培养细胞系Schneider line2(S2),并用PCR加以证实,然后通过Western blot检测证明了RP2和RP2 del6的表达。证明了人的RP2基因在果蝇细胞中表达的可能性,说明果蝇系统是可以用来分析人的RP2基因功能的。     

RATS1基因对人食管癌细胞c—myc基因表达的降调…

将含有ＲＡＴＳ１ｃＤＮＡ的真核表达载体ｐＣＤＶ１与含有ｎｅｏ抗性基因的表达载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ法共转染人食管癌细胞系ＥＣ１０９细胞。结果发现：转染ＲＡＴＳ１基因后的抗性克隆细胞生长受到抑制，形态发生明显改变，并且逐渐脱落死亡。经ＲＴ－ＰＣＲ分析发现，转染后有ＲＡＴＳ１基因表达的细胞克隆，ｃ－ｍｙｃ基因表达降低，两者呈反向相关，即ＲＡＴＳ１基因表达愈高，ｃ－ｍｙｃ基因表达降低愈     

多糖对人胃癌SGC7901细胞生长抑制

以培养的人胃癌SGC7901细胞为对象,研究了用多糖处理后培养细胞的变化特征.结果显示,多糖可以抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖,并呈现出对剂量和时间的依赖性.用1.0×10-2g/mL的多糖处理培养细胞48h后,出现典型的形态学凋亡现象和明显的DNA片段化,细胞凋亡率达到40%左右.随着细胞凋亡的发生,BCL-2蛋白的表达下降,而BAX蛋白的表达上升.因此,结果表明多糖可以通过诱导细胞发生凋亡来抑制人胃癌SGC7901细胞的生长,从而达到治疗胃癌的目的.     

eEF1A2敲除对小鼠骨骼肌组成的影响

目的 探究真核细胞翻译延长因子1-α2 (eEF1A2)缺失对小鼠骨骼肌的含量和组成的改变。方法 12月龄的eef1a2^fl/fl;CreER^T2+小鼠(iHBKO)及其对照eef1a2^fl/fl;CreER^T2-小鼠(Control)分别连续3 d腹腔注射30 mg/kg他莫昔芬,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot验证小鼠骨骼肌eEF1A2敲除效率,利用HE染色检测小鼠骨骼肌形态,qRT-PCR检测小鼠骨骼肌主要纤维类型标志物的表达变化。结果 与对照组小鼠相比,iHBKO小鼠骨骼肌实现了eEF1A2的高效敲除。敲除小鼠腓肠肌脏器系数下降,但腓肠肌形态及横截面积无明显变化。eEF1A2基因敲除还导致快肌腓肠肌和趾长伸肌中慢肌标志物肌球蛋白重链7(myosin heavy chain 7,Myh7)表达明显升高,快肌标志物肌球蛋白重链4(myosin heavy chain 4,Myh4)明显降低,而慢肌比目鱼肌和胫骨前肌的Myh4和Myh7显著降低。结论 eEF1A2...