鄱阳湖滨湖水牛锥虫病的研究——二、间接血凝试验抗原的制备及其应用

本文介绍以DEAE纤维素层析法从感染动物的血液内获得纯净的锥虫后,用来制备间接血凝抗原,先后试制18批,其效价均达1:2,560—327,680.抗原低温保存,有效期可达半年以上.现场对比试验表明,阳性率可达96.50%,阴性符合率为96.83%.1984年在江西、云南、湖南等省大面积试用,并用血纸代替血清做间凝试验,检查耕牛近30万头,使大批病斗得到确诊和及时治疗,收到明显的经济效益.     

应用PAPS免疫微球法快速诊断家畜锥虫病

ＰＡＰＳ锥虫快速诊断试剂，是中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所研制成功的一种新型的载体微球，它与伊氏锥虫抗原交联所制备的锥虫快速诊断液具有特异性强、敏感性高，重复性好、快速、简便的特点。笔者应用锥虫快速诊断液检测１４９头锥虫阳性病牛（见虫），阳性检出率为９８．７％。对２２５头非疫区阴性牛进行检测，阴性符合率为９９．６％。ＰＡＰＳ试验与间接血凝试验的符合率为９６．１％。对２２７７头耕牛血清和血纸两     

抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究——二 、用McAb直接斑点法检测伊氏锥虫抗原的实验研究

抗伊氏锥虫糖蛋白的单克隆抗体ⅡG_6标记过氧化物酶后,用于直接法斑点试验检测血清中伊氏锥虫(T.e.)抗原,36份感染2—4d的鼠血清全部呈阳性反应;12份正常鼠血清全部呈阴性反应.上述结果表明本方法具有较好的敏感性和特异性.ⅡGMcAb Dot ELISA检测结果显示血中伊氏锥虫密度与抗原滴度呈正相关.该法操作简便易行,不需特殊设备.肉眼即可观察结果.本次实验研究将为现场应用提供快速诊断的重要依据.     

鄱阳湖滨湖水牛锥虫病的研究——一、伊氏锥虫的分离和纯化

我们利用自制的离子交换柱,使用进口的(英国,DE-52)和国产的(上海,DEAE-1)DEAE纤维素,对严重感染伊氏锥虫的小白鼠、大白鼠和小犬的血液进行了成功的分离,获得了无血细胞和无血小板的纯净锥虫.经过DEAE纤维素提纯后的虫数是:小白鼠8—20亿;大白鼠41—310亿;小犬120—650亿.分离和提纯后的锥虫运动活泼,具有感染力.分离主要依赖宿主血细胞、血小板和锥虫之间表面电荷的差异;成功的关键是缓冲液PH的标准状态和离子强度.     

间接血凝试验诊断日本血吸虫病的研究

本文对间接血凝试验诊断日本血吸虫病的实验方法和影响因素进行了研究.实验证明:不论采用1％或2.5％鞣化红细胞,加入1％正常兔血清(Normal rabbit serum,简称1％NRS)后,可以消除鞣化红细胞的自凝现象.比较鞣化红细胞加入1％NRS后再致敏与致敏红细胞加入1％NRS后对间接血凝试验的影响,结果表明:二者对间接血凝试验的敏感性无显著差异(P>0.05).不同致敏红细胞浓度对间接血凝试验的影响,实验结果显示:采用1％致敏红细胞试液可提高间接血凝试验的敏感性;采用2.5％浓度则可提高间接血凝试验的特异性.故在血吸虫病重流行区,为了提高间接血凝试验的特异性,可考虑用2.5％浓度的致敏红细胞试液,而在非流行区及轻流行区,为了提高间接血凝试验的敏感性,可采用1％浓度,以节省致敏红细胞的用量.温度与间接血凝试验反应速度的关系是:随着温度的升高,间接血凝试验反应速度加快,观察结果的时间可以相应缩短.     

肠结肠炎耶尔辛氏菌研究——Ⅱ肠结肠炎耶尔辛氏菌与布氏杆菌血清学交叉反应的鉴别

本文探索并提出了肠结肠炎耶尔辛氏菌(Yersinia enterocolitica,简称Y.e.,下同)与布氏杆菌血清学交叉反应的鉴别方法:(1)二巯基乙醇(2M-E)试管凝集试验;(2)Y.e.O:35酚相抗原与两种抗血清作SPA协同凝集试验;(3)Y.e.O:47水相抗原致敏血球与两种抗血清作间接血凝试验;(4)Y.e.O:47水相抗原与两种抗血清作酶联免酶吸附试验.通过比较上述几种方法,发现间接血凝试验在鉴别中具有简单、快速、特异且敏感四大特点,适宜临床推广使用,并成功地研制了冻干致敏血球诊断试剂.     

应用反向间接血凝试验测定马铃薯Y病毒的研究

用 PVY 免疫球蛋白致敏绵羊红血球,对 PVY 抗原及侵染的烟草叶片汁液进行了测定。结果表明,测定提纯的抗原所用的 PVY 免疫球蛋白致敏绵羊红血球 PBS 的最适 PH 为5.6,感病汁液 PBS 的 PH 为7.2。反向间接血凝试验测定 PVY 抗原的最低浓度为135ng/me,感染 PVY 烟草叶片汁液的最高稀释倍数为1:128。     

动物牛皮蝇蛆病诊断方法的进展(综述)

综述了牛皮蝇蛆病临床诊断的方法以及一些免疫学诊断方法：免疫电泳、双向免疫扩散试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验。并重点介绍了国内外在酶联免疫吸附试验的进展,介绍了采样的方法、对血清和牛奶的检测以及检测循环抗原HC的夹心ELISA,并对该病未来诊断方法的发展做了展望。     

甘南碌曲县绵羊弓形虫病调查

应用间接血凝试验(IHA)对甘南碌曲县屠宰绵羊进行了弓形虫抗体检测,共抽查绵羊血清397头分,检出阳性36分,阳性率为9.07%。     

利用间接血凝试验检测猪气喘病

本文介绍采用间接血凝反应(IHA)技术检测猪气喘病。试验结果表明,对患有气喘病猪的检出率可达97.7％,对健康猪的检出率达100％。在诊断猪气喘病方面,IHA是一种快速,敏感的检测方法,比目前普遍采用较长时间的观察临床症状的诊断方法,更具有可靠性和实用性。     

抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究——三、应用酶标单抗ELlSA竞争法检测抗T.e.抗体的实验研究

应用酶标单抗(HRP-MCAbⅡG_6)ELISA竞争法对7只感染伊氏锥虫的家兔血清进行了检测,结果表明该法具有特异、敏感、快速等优点.与间接ELISA检测结果相比呈现明显的正相关,两种方法检测相符合,因此本法可作为流行病学调查和血清学诊断的工具.     

成虫切片免疫酶染色诊断华枝睾吸虫病

作者采用华枝睾吸虫石蜡包埋成虫切片做抗原片,应用酶联金葡菌 A 蛋白间接过氯化物酶试验(PPA—IIP)诊断华枝睾吸虫病.本试验测定病狗血清最适稀释度为1∶200.酶联金葡菌 A 蛋白(HRP—Protein A)适宜工作浓度为1∶40.诊断狗华枝睾吸虫病敏感性为94.4%,特异性为92.9%.比较纵横两种成虫切片对病狗血清的诊断价值,统计学上,两种成虫切片无显著差异(P>0.05).本法抗原性稳定,操作简便快速.     

小鼠细小病毒抗体的检测

<正> 小鼠细小病毒(MVM)普遍存在于开放饲养的实验小鼠群中,呈隐性感染状态,在某些条件下,可诱发此病,以致影响实验结果。由于小鼠呈隐性感染时,无临床症状,也无病理形态学的改变,很难分离到病毒,所以血清抗体的检测在诊断上有着重要的意义。我们采用血凝抑制试验(HAI)、免疫荧光(IFA)和酶免疫吸附试验(ELISA)方法来检测开放鼠群中的MVM抗体。材料和方法一、MVM标准株:由中国医学科学院医学实验动物研究所提供。二、MVM抗原的制备: 1.用于HAI抗原:MVM感染二代小     

SARS病毒的S1蛋白基因的克隆、表达及其ELISA检测方法的建立

为了建立方便、敏感和特异的SARS病毒血清学诊断方法,利用PCR扩增,克隆了SARS冠状病毒S蛋白基因中从第68～918位碱基的基因序列(S1蛋白).并通过pGEX-4T1表达系统在大肠杆菌BL21中高效表达了SARS病毒S1蛋白,用超声波破碎菌体及用不同浓度的尿素洗涤包涵体,纯化了S1蛋白,纯度可达75%以上.以在E.coli高效表达的S1蛋白为抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人IgG为二抗,建立了检测SARS抗体的间接ELISA方法.经检测,筛选出最佳反应条件为5μg/孔.用纯化的E.coli表达的抗原包被酶标板,用5 g/L的小牛血清进行封闭,以正常E.coli裂解上清液稀释待检血清.实验表明,应用表达的蛋白作为诊断SARS抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点.     

抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究——一、分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

为了对伊氏锥虫病的免疫诊断提供有价值的单克隆抗体,笔者通过了3次SP2/0骨髓瘤细胞与伊氏锥虫抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞间的融合试验和多次筛选以及克隆化,建立起7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中ⅡG_6杂交瘤作了进一步的检定分析,用ⅡG_6上清液对T.e.抗原进行ELISA试验,显示出高度的特异性,与血吸虫、弓形虫抗原均未出现交叉反应。ELISA测试ⅡG_6细胞株培养上清效价为1:5.1×10~3,而杂交瘤细胞接种BALB/c小鼠诱生腹水抗体的效价为1:1.6×10~7。该株单克隆抗体免疫球蛋白的类型鉴定属IgG_1亚类。该株细胞已在体外培养下,稳定地分泌特异性抗体至少达6个月之久,同时在液氮冻存近8个月之后仍能保持分泌抗体的能力。     

4—氨基—6—三氯乙烯—1,3—苯双磺胺对牛、羊肝吸虫的驱虫效力

对于苯磺胺类药物经过大量的化学研究和生物学试验结果,证明4—氨基—6—三氯乙烯—1,3—苯双磺胺(4—Amino—6—Trichloroethenyl—1,3—Benzenedisulphonamide)对驱除片形科吸虫是最有效的。其剂量,在犊牛和绵羊每公斤体重为10毫克和15毫克,对童虫驱虫效力为97%和92%;在牛、羊每公斤体重一次给药3.75毫克。可将体内的成虫驱除尽.     

仙台病毒抗原的制备及初步应用

目的纯化和制备仙台病毒(Sendai Virus,SeV)抗原,初步应用于间接酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫印迹(Western-blot)试验对SeV抗体进行检测。方法通过鸡胚尿囊腔及BHK-21细胞增殖法培养增殖SeV,低温冻融去除细胞碎片后,用差速离心及超声破碎法纯化并制备SeV抗原,以SDS-PAGE电泳进行纯度鉴定;优化确定间接SeV-ELISA抗原的最佳包被浓度,对比检测间接免疫荧光试验(IFA)初筛小鼠SeV阳性血清,同时用Western-blot检测法进行特异性验证。结果用BHK-21细胞培养增殖的SeV,病毒滴度HA为1∶128,SeV抗原的电泳纯度达80%;确定SeV-ELISA抗原最佳包被浓度为2.5μg/mL时,测得小鼠SeV抗体ELISA与IFA的阳性符合率为100%,并由Western-blot检测法得到了证实。结论通过BHK-21细胞增殖和差速离心及超声破碎法制备的SeV抗原,可用于ELISA及Western-blot法对小鼠SeV抗体的检测,进而验证了SeV具有较强的抗原特异性及蛋白活性。     

鄱阳湖滨湖水牛锥虫病的研究——三、锥虫病传播媒介种群及生态初步观察

本文报导了鄱阳湖湖区水牛锥虫病传播媒介的种群和生态观察的结果.调查证明湖区水牛锥虫病的传播媒介——虻、蝇、蠓计3科6属18种,其中8种为江西省的新纪录.中华斑虻、华广原虻、端小斑斑虻、白跗黄虻、厩螫蝇、南螫蝇为湖区的优势种.每年5—10月为传播媒介的活动季节.作者提出每年5月以前和10月以后进行家畜锥虫病的诊断和治疗,可以加速控制锥虫病.     

MS2介导的口蹄疫类病毒颗粒疫苗的研究

研究表明,口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的VP1蛋白含有关键的抗原决定簇.根据O/HL-JOC12/03猪源FMDV毒株VP1上第141～160位氨基酸序列设计引物,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术将该序列插入在大肠杆菌(Escherichia coli)噬菌体MS2外壳蛋白基因的特定位点.然后连接到原核表达载体pET28a上,构建了重组表达质粒28a-CP-VP1,转化BL21(DE3),ITPG诱导表达得到融合表达的CP-VP1.透射电子显微镜下观察融合蛋白CP-VP1成类病毒颗粒(virus-like particles,VLPs)状.间接ELISA实验证实该蛋白能够特异地结合豚鼠抗O型FM-DV的阳性血清,30μg的CP-VP1的VLPs蛋白免疫小鼠后可以诱导其产生高效价的特异抗体.故该口蹄疫病毒抗原决定簇展示在噬菌体MS2上表面的VLPs蛋白具有开发成口蹄疫疫苗的前景.     

4种促性腺激素释放激素抗体的制备、鉴定和纯化

用3-马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯(MBS)法将人工合成的4种不同来源的促性腺激素释放激(GnRH)(即章鱼GnRH、海鞘GnRH-Ⅰ、七鳃鳗GnRH-Ⅰ和七鳃鳗GnRH-Ⅲ)分别与匙孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联后作为抗原,免疫新西兰大白兔获得GnRH抗体.用间接ELISA方法检测抗血清效价,并用Western blot鉴定其特异性.制备抗原肽亲和纯化柱,纯化多克隆抗体.结果显示,4种多克隆抗体效价高达1∶500 000(体积比),并能和相应的GnRH多肽特异性结合,纯化后的抗体在SDS-PAGE显示为单一条带.通过上述方法,获得4种高效价、高纯度的GnRH抗体,为低等动物GnRH的研究提供了理论依据.