蛇神经毒素在毕赤酵母中的分泌表达及其分离纯化

文中主要研究了毕赤酵母基因工程菌的构建及其发酵表达产物蛇神经毒素的分离纯化条件。蛇神经毒素编码基因由本实验室设计、合成，并重组构建成表达质粒pPIC9k-hPK。经电穿孔将该质粒转化毕赤酵母GS115 (His-Mut+)，筛选His+Muts型菌株，经诱导表达，产物进行SDS- PAGE电泳鉴定，相对分子质量与理论值一致，目标蛋白经小试发酵产量可达350mg/L。利用超滤、离子交换树脂及分子筛分离纯化，产物经高效液相色谱(HPLC)分析纯度达92%。     

交联海藻酸钙凝胶固定化酵母醇脱氢酶研究

对用海藻酸钙包埋、戊二醛交联法固定酵母醇脱氧酶催化苯乙酮酸合成(R)-扁桃酸的过程进行研究,比较游离酶与固定化酶的酶学性质.实验结果表明:固定化酶的热稳定性显著提高,游离酶在70℃时酶蛋白变性失去活力,而固定化酶在65℃保温1 h的能保持64%的酶活力,在70℃时酶活力仍町保留48.6%;固定化酶的最适温度由30℃升至40℃,最适反应pH值由6.8下降为5.8;固定化酶保留了62.72%的游离酶活性, 固定化酶的表观米氏常数和最大反应速率分别为37.33 mmol/L和358.42 nmol/min.该固定化酶具有良好的储存稳定性和操作稳定性.     

金属亲和层析法分离纯化醇脱氢酶

报道了用金属亲和层析法分离纯化酵母细胞中醇脱氢酶(ADH).以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,乙二胺为螯合配基,制备了金属螯合亲和吸附剂.通过溶胀法从酵母细胞中抽提胞内酶,粗抽提液再经过硫酸铵盐析以及亲和柱层析.收得率为16.9%,纯化倍数达11.5.     

梧桐花粉主要变应原的分离纯化

以离子交换和凝胶过滤层析对梧桐花粉变应原进行分离和纯化,采用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附分析法（BSA-ELISA）测定其抗原活性,得到两个具高活性的单一变应原组分PT13和PT53。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得它们的分子质量分别为20ku和18ku。     

蛋白质分离纯化与层析技术进展

蛋白质分离纯化是蛋白质产品工业化生产的关键之一。文中分析了蛋白质分离纯化的特点，指出了分离纯化蛋白质应解决的一些问题。层析技术是一种有效的蛋白质纯化方法，文中从层析方法、层析固定相、层析过程的数学模拟三方面评述了层析技术的新进展     

猪心肌乳酸脱氢酶的提纯工艺及酶反应最适条件

研究了适合于工业化生产的猪心肌乳酸脱氢酶的初步提取工艺，经硫酸铵分级沉淀得到酶的比活为86．5U／mg，再经DEAE离子交换层析比活可达525．0U／mg，酶活总收率为54．5％．并对酶促反应的最适条件进行了研究，其最适反应pH为7．6～7．8，最适反应底物浓度分别为NADH5mg／mL和丙酮酸钠25mmol／L。     

疏水层析法分离纯化脂肪酶的研究

采用疏水层析法对商业解脂假丝酵母的中性脂肪酶粗制剂进行了分离、纯化,实验以Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ为固定相,异丙醇－哌嗪为流动相,经一次柱层析,从该粗酶中分离出的单一脂肪酶的比活可提高１０倍以上。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测定其分子量约为２０．８ｋＤ;管状等电聚焦法测其等电点约为４．５０。     

吐温80—盐—水液—固萃取体系分离纯化醇脱氢酶

研究了醇脱氢酶和牛血清白蛋白在吐温８０－盐－水液－固萃取体系中的分配行为，讨论了ｐＨ值和分相盐浓度对酶及蛋白质萃取率的影响。用该体系从酵母中分离纯化醇脱氢酶，一步纯化倍数１．４，收得率８０％。     

假丝酵母类金属硫蛋白的分离、纯化及功能研究

假丝酵母Cu-12(Candida sp．Cu-12)经Cu^2 诱导产生的蛋白进行Sephadex G-100和纤维素DE-52分离纯化及理化性质测定，获得的蛋白具有四个亚型，其主理化性质均与MT的定义相符，因此确定得到了假丝酵母的类金属硫蛋白，同时测定了该Cu—MT清除羟自由基和氧自由基的能力．     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的分离纯化

报道了葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的分离纯化. 在0.1 mol/L的碳酸氢钠溶液中,以溶胀法从酵母中提取胞内酶.粗抽提液经过60 %～75 % 饱和度的硫酸铵盐析, Sephadex G-100凝胶柱层析.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的收得率为12.4%,纯化倍数达51.2.     

Acetobacter Z127乙醇脱氢酶的纯化及酶学性质

利用自行筛选、鉴定的Acetobacter Z127,纯化出高活性的乙醇脱氢酶,并对该酶的生化特性进行了初步研究.试验表明：粗酶液通过硫酸铵分级沉淀、透析脱盐、Sephadex G-100层析分离,纯化出一种以NAD^＋为辅酶的ADH,经SDS-PAGE电泳检测其分子量为28KDa;ADH反应的最适pH值为7.0,最适温度为60℃,K^＋离子对其酶活有促进作用,二价金属离子对其活性有抑制作用,Fe^3＋极易使ADH产生沉淀.研究为ADH的应用及其新用途的探索提供了理论基础和可靠的工艺参数.     

酵母细胞中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的分离纯化及性质

报道了葡萄糖-6磷-酸脱氢酶（G6PDH）的分离纯化和酶学性质研究．以溶胀法从酵母细胞中提取胞内酶，粗抽提液再经过硫酸铵盐析和Sephadex G-100凝胶柱层析．酶学性质研究结果表明：G6PDH的酶促反应最适温度和pH值分别为37℃和pH8．8．考察了金属离子对G6PDH荧光光谱的影响，发现Cu^2＋和Hg^2＋对G6PDH具有荧光猝灭作用，且符合荧光静态猝灭的Stern—Volmer公式，因此可利用荧光猝灭的性质进行痕量金属离子测定．     

Separation and Purification of Betaine Aldehyde Dehydrogenase from Wild Suaeda liaotungensis

High active betaine aldehyde dehydrogenase (BADH,EC1.2.1.8) is found in wild Suaeda liaotungensis.The enzyme is purified 206-fold with recovery of 1.5%,It have a spectific activity of 2363 nmol/min.mg protein and the molecular mass of each subunit is 64.5kDa as determined by SDS-PAGE.     

从微生物细胞提取ADH的探讨

讨论了从醋酸杆菌发酵中提取ＡＤＨ以及从酵母细胞中提取ＡＤＨ的可能性。在一定的ｐＨ及酶解时间内，醋酸杆菌细胞内ＡＤＨ活性很低，而酵母细胞内ＡＤＨ活性相对较高。     

植物乳杆菌产乳酸脱氢酶的发酵条件优化及酶的纯化

对植物乳杆菌突变株RS2 2的发酵条件做了优化, 在25 L发酵罐上进行放大实验, 使菌株RS2 2的乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase）产酶水平有了较大提高, 细胞抽提液比酶活达到24.6U/mg．利用DEAE离子交换、 疏水层析对酶的纯化进行 了研究, 最终酶的纯化倍数为49.1, 比活力达1　208.6 U/mg,初步确定了LDH的纯化路线.     

羊心肌乳酸脱氢酶的纯化及性质研究

建立了一种较为简单、高效的羊心肌乳酸脱氢酶的纯化工艺,经硫酸铵分级沉淀及DEAE-Sepharose离子交换层析纯化,可以得到纯度较高的乳酸脱氢酶,酶的比活力达106.67 U/mg,纯化倍数达54.7,酶活力总回收率为48.6%.酶学性质的研究表明:其最适反应温度为50℃,最适反应pH值为7.8,在25~45℃条件下能够保持较高的酶活力,60℃后酶活力下降较快.1.0 mmol/L的Mg2 、Fe2 、Ca2 ,0.5 mmol/L的Ca2 对酶活力有促进作用;1.0 mmol/L和0.5 mmol/L的Cu2 和Fe3 ,1.0mmol/L的Ni2 ,0.5 mmol/L的Mg2 和Fe2 对酶活力有抑制作用;Co2 的作用不太明显.     

反胶束固定化醇脱氢酶的制备

报道了用反胶束体系固定化醇脱氢酶(ADH)的研究.在此体系中,以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)作为表面活性剂,辛烷和己醇作为溶剂及助溶剂.考察了ADH固定化的影响因素,确立了最佳固定化条件:含水量w0即cH2O/cCTAB为13,酶液pH值为7.8,CATB浓度为0.35 mol/L,己醇浓度为13%.     

猪肝铜锌超氧化物歧化酶的分离纯化与理化性质研究

利用硫酸铵盐析分级分离、乙醇．氯仿沉淀除杂、丙酮再沉淀分级得到含铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）的粗酶液,通过DEAE-52离子交换层析和G-75凝胶层析实现了CuZnSOD的分离纯化,得到电泳纯产品CuZnSODI对猪肝CuZnSOD的理化性质、酶学特征和光谱性质进行了研究．     

异硫氰酸酯法固定化醇脱氢酶乳酸脱氢酶和辅酶Ⅰ

本文探索了一条较为简便、实用的制备异硫氰酸酯活性载体的新方法,研究了用异硫氰酸酯共价法固定化醇脱氨酶、乳酸脱氢酶和辅酶Ⅰ的条件,并对三者进行了共固定化。按本实验方法得到的固定化醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的活力回收可达8.9%和11.9%,得到的固定化三元全酶系统的辅酶再生能力为相应游离酶系统的4倍。