马氏珠母贝外套膜组织培养

用本实验室已建立的贝类组织培养技术对马氏珠母贝外套膜组织成功地进行了体外培养,在外套膜组织中最先迁出的是颗粒细胞,紧随其后为透明细胞,在培养到２０ｈ时,圆形的上皮细胞开始迁出,上皮细胞很快在组织块圆形形成生长晕,继而铺满整个培养瓶底面,培养４ｄ以后,上皮细胞开始分泌颗粒状的物质,这时的上皮细胞从形态上发为Ａ型和Ｂ型两类,Ｂ型上皮细胞含有许多颗粒物质,而Ａ型上皮细胞不含或含少量颗粒物质,反映了其合成     

马氏珠母贝与解氏珠母贝的随机扩增多态DNA分析

用OPM组20种碱基随机引物对采自海南洋浦的马氏珠母贝（Pincada martensii）和解氏珠母贝（P.chemmitri）天然群体进行RAPD分析,其中6种引物扩增有效,这6种引物对马氏珠母贝和解氏珠母贝的总扩增带数分别为52条和58条。每一引物的扩增带数为3～16条,同一引物对两种贝类的扩增带数不同（OPM19B除外）,对两贝类的扩增带型也有较大差异。群体内的各个个体（实验个体为10个）RAPD扩增带谱全部呈多态,表明在同一群体中,各个体存在着明显的个体特征带,由于样品数量及引物数均少,2种贝类各自种群的共同特征尚未能确定。     

马氏珠母贝外套膜组织培养基的设计

分析了培养基中的小牛血清、贝血清、水解乳蛋白等几种天然成分和合成培养基ＴＣ１９９对中国马氏珠母贝外套膜组织细胞在体外的生长情况和珍珠质分泌功能的影响，并确定了它们在组成培养基时的适宜含量，其中，贝组织提取物，鸡胚汁对细胞的生长和珍珠质的分泌具有十分重要的作用：５％的小牛血清和１０％的贝血清共同使用对维持细胞形促进细胞生长有很好的作用，但单独使用则有一定的负作用。     

马氏珠母贝遗传多样性的RAPD分析

采用ＯＰＭ组２０个碱基随机引物对海南三亚（ＳＹ）,海南洋浦港（ＹＰ）,广西涠洲岛（ＷＺ）的３个天然群体和广东雷州人工养殖群体（ＬＺ）的马氏珠母贝进行了ＲＡＰＤ分析。其群体内的平均遗传相似度（ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ,Ｓ）分别是０．５８６６,０．６５１４,０．６６６６,０．７１５８,由低到高依次为ＳＹ〈ＹＰ〈ＷＺ〈ＬＺ;群体内的遗传变异度（ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ,Ｖ）分别是０．４１３４,）．３４８６,０     

二倍体及三倍体马氏珠母贝核型

二倍体马氏珠母贝为广西北海野生贝,２龄－３龄。三倍体马氏珠母贝用６－ＤＭＡＰ诱导获得,１．５龄。核型分析结果,二倍体２Ｎ＝２８,核型公式为７Ｍ＋３ＳＭ＋３ＳＴ＋１Ｔ,ＮＦ＝４８,三倍体３Ｎ＝４２,核型公式为７Ｍ＋３ＳＭ＋３ＳＴ＋１Ｔ,ＮＦ＝７２。染色体按Ｌｅｖａｎ等人的标准分类。     

6-DMAP诱导马氏珠母贝三倍体

用６－二甲基氨基嘌呤（６－ＤＭＡＰ）抑制马氏球母贝（ＰｉｎｃａｔａｄａｍａｒｔｅｎｓｉｉＤｕｎｋｅｒ）受精卵的极体释放获得三倍体,在２６℃条件下,进行了不同浓度梯度的６－ＤＭＡＰ（４０ｍｇ／Ｌ,６０ｍｇ／Ｌ,８０ｍｇ／Ｌ,１００ｍｇ／Ｌ,１２０ｍｇ／Ｌ）和不同的处理持续时间（５ｍｉｎ,１０ｍｉｎ,１５ｍｉｎ,２０ｍｉｎ,２５ｍｉｎ）的诱导实验,抑制第一和第二极体的三倍体诱导率最高分别为达３２．４％     

马氏珠母贝外套膜组织培养的条件和方法初探

经过反复试验，筛选出适宜于马氏珠母贝外套组织培养的平衡盐溶液（改进的ＭＭＢＳＳ）、基本培养基；确立了防止污染的组织净化方法，并筛选出一种能促进细胞生长的贴壁物质（ＳＭ）。其主要培养方法为：用合抗生素的改进ＭＭＢＳＳ（青霉素２０００Ｕ／ｍｌ，链霉素２５００Ｕ／ｍｌ）洗涤１０次，再用不含抗生素的改进ＭＭＢＳＳ清洗５次，将组织切成３ｍｍ×３ｍｍ的小块，贴于含０．５％ＳＭ的培养瓶底，加入改进的贝培养基，在２０℃，ｐＨ６．８条件下培养。经这种条件和方法培养的马氏珠母贝外套膜组织，４小时细胞开始游离，３天游离出来的细胞铺满瓶底，４天细胞分泌珍珠质．培养７天大量的成纤维细胞出现，细胞培养能持续数十天。     

北海营盘马氏珠母贝养殖海域春秋季水化学环境参数变化特征

于2008年9月21日和2009年4月12日对北海营盘青山头马氏珠母贝(Pinctada martensii Dunker)养殖区进行春、秋两季水化学要素调查与测定。结果显示,营盘青山头南珠养殖区水质良好,各水化学要素符合海水水质二类标准;秋季活性硅酸盐与盐度成显著正相关(r=0.828),无机磷与pH值、活性硅酸盐与溶解氧、无机磷与叶绿素a都有较高的正相关趋势,春季营养盐与各环境因子的相关关系不显著;春季N、P和秋季N、P、Si含量持平或高于浮游植物摄食的最低阈值,其中秋季Si含量丰富;春、秋两季氮磷比平均值分别为7.0和5.5,均以氮为浮游植物摄食的限制因子;营盘马氏珠母贝养殖区的无机氮以氨氮的存在为主要形式,春、秋两季氨氮所占无机氮含量的比例最高,分别为56.6%和74.4%。     

傅里叶变换红外光谱法对马氏珠母贝贝壳的研究

本文通过傅里叶变换红外光谱法对不同剖面层次的马氏珠母贝贝壳进行了研究。结果表明,马氏珠母贝贝壳的主要成分均为碳酸钙,并含有少量有机质。     

马氏珠母贝珍珠囊体外培养及插囊育珠

为建立马氏珠母贝珍珠囊体外培养的插囊育珠技术,一用０．３％胰蛋白酶消化液在ｐＨ值７．２￣７．４和温度２５℃条件下对马氏珠母贝外套膜组织进行解离,收集消化１５ｍｉｎ的细胞悬液于珠核上培养珍珠囊;二直接用外套膜组织块在珠核上形成珍珠囊。方法一所产生的珍珠囊未培育出珍珠;方法二所产生的珍珠囊培育出少量的珍珠。为促进细胞在珠核上的粘附和珍珠囊的形成,研究了各种贴壁因子的作用,其中多聚赖氨酸和ＳＭ物质能明显     

KAI1基因表达与肿瘤转移的抑制

就KAI1基因的发现、定位及作用机制：KAI1基因在肿瘤转移过程中的抑制作用；KAI1基因的表达与肿瘤预后之间的关系的意义等方面的研究结果作一综述。     

马氏珍珠贝肉营养成分分析及评价

对马氏珍珠贝肉进行较全面的营养成分分析,马氏珍珠贝肉的蛋白质为81．2％(DW),氨基酸的评分为84分;并富含牛磺酸、高度不饱和脂肪酸、维生素和钙、磷、锌、铁、锰等多种人体必需的无机盐及微量元素。其中牛磺酸含量为2320mg/100g(DW);脂肪酸含量占脂肪总量的67．5％以上,尤其是多不饱和脂肪酸C205(EPA)和C226(DHA)的含量丰富,分别为12．6％和22．1％。结果表明,马氏珍珠贝肉是一种高蛋白、低脂肪,营养价值丰富的海产品。     

P15——a new tumor suppressor gene

In addition to the tumor suppressor genes such as Rb and p53, it has been found that some molecules of the same class named CKI (cyclin-dependent kinase inhibitor) also play an important role in the inhibition of tumorigenesis and the tumor progression. In the KIP and INK4 families of CKIs, p15 shares extensive homology with p16. Findings in many tumors and their cell lines show that the inactivation of p15 (deletion, mutation, rearrangement, etc.) is very frequent, and inactive p15 is involved in the progress of some tumors. These studies provide evidence that the p15 is a new tumor suppressor gene. Furthermore, the research on the molecular mechanism of p15 in regulation of cell proliferation shows that p15 can inhibit the growth of some kinds of tumor cells, and p15 is the mediator of TGF-β-induced cell arrest. Investigations on p15 in cell differentiation suggest that increased p15 is related to the change of malignant phenotype. These results supply clues for further interpretation about the molecular mechnism of cell cycle control and cell tumorigenesis. And they may provide theoretical and experimental basis for application of p15 to clinical therapy of tumors.     

一个与人类待定肿瘤抑制基因同源的水稻基因的分离

从水稻基因文库中筛选到一个与人类待定肿瘤抑制基因QM同源的基因,命名为OSQM2．该基因片断长为3．1kb,编码一个具有184个氨基酸的高度碱性的蛋白质,与其他已知QM基因相比,该基因具有一个非常特殊的启动子,包含许多在植物中已发现的与抗逆有关的顺式作用因子,如：“G盒”,“DRE盒”,“MYC盒”等,故而该基因有可能是一个新的受环境胁迫因子诱导的基因,Southern杂交表明它以单拷贝形式存在于基因组中。     

Interaction of hepatitis B virus with tumor suppressor gene p53: its significance and biological function

The mechanism of the interaction of hepatitis B virus (HBV) with tumor suppressor p53 and its role in the hepatocar-cinogenesis have been studied by PCR-directed sequencing, gel shift assays and in situ ultraviolet cross-linking assay. The biological function of the interaction of HBV with p53 gene was investigated by co-transfection of chloramphenicol acetyltransferase ( CAT) reporter gene. p53 and HBV DNA. and quantitative PCR. Among the 16 primary hepatocellular carcinoma (PHC) samples. 13 were HBV-DNA positive. 10 HBxAg positive and 9 p53 protein positive. The p53 gene point mutation was found in 5 samples, one of which had a G to T substitution located at codon 249. After analyzing the HBV genome by a computer program, a p53 response element binding sequence was found in HBV genome at upstream of enhancer I. from 1047 to 1059 nucleotides. This sequence could specifically bind to p53 protein, increase p53 protein accumulation in the PHC cells and stimulate the transactivating activity of p53 and HBV replication . The results also revealed that HBxAg could combine with p53 protein to form a complex in the cells and enhance CAT expression. Immunocytochemical staining showed that p53 protein complex was located in the cytoplasm and the process of p53 entry to nuclei was. in part, blocked. From our results, we conclude that the mutation of p53 gene at codon 249 is infrequent in HBV-associated PHC. the DNA-protein binding between HBV and p53. and the protein-protein binding between HBxAg and p53 might lead to the reduction or inactivation of p53 protein, which in turn resulting in HBV-associated hepatocarcinogenesis.     

超滤分离对马氏珍珠贝肉蛋白酶解液特性的影响

研究了马氏珍珠贝肉蛋白酶解液在超滤过程中膜通量的变化及超滤前后感官评价、肽分子量分布以及氨基酸的变化,对超滤膜的选择性及分离效果进行了评价和分析.实验结果表明,马氏珍珠贝肉蛋白酶解液在超滤过程中,随着超滤时间的延长,膜通量不断减小,透过液的鲜味明显提高,腥味和苦味基本消失,透过液中含有分子量大于截留分子量（5000 Da）的多肽,超滤膜实际有效截留分子量约为7000 Da~8000 Da,分子量小于4500 Da左右的多肽在透过液中得到有效富集.超滤处理后,同一氨基酸在总氨基酸和游离氨基酸中含量的变化均不一致,透过液肽态氨基酸中鲜味氨基酸占总氨基酸比例高于原酶解液,而苦味氨基酸和疏水性氨基酸占总氨基酸的比例均低于原酶解液.     

柱前衍生化-HPLC测定马氏珠母贝肉中氨基酸的含量

以邻苯二甲醛-9-芴甲基氯甲酸酯为衍生化试剂,对氨基酸进行柱前衍生,建立了35℃下,醋酸钠缓冲液、甲醇及乙腈为流动相,用Eclipse AAA氨基酸分析柱和二极管阵列检测器的氨基酸色谱分析方法,18种氨基酸在36 min内获得了较好的分离,在一定浓度范围内,氨基酸的峰面积与浓度的线性相关系数在0.990 6～0.999 8之间,相对标准偏差为1.96%～5.45%(n=5).并测定了马氏珠母贝肉蛋白中氨基酸的组成和含量.结果表明,马氏珠母贝肉蛋白中含有至少18种氨基酸,其中8种必须氨基酸总含量达39%以上,是一种优质的功能食品原料.     

FHIT抑癌基因在头颈部鳞癌中的研究进展(综述)

脆性组氨酸三联体基因(FHIT)是1996年新发现的一种定位于人类染色体3p14．2上的抑癌基因，其编码的蛋白质具有ApnA水解酶的特性，可通过水解ApnA(主要是Ap3A)而阻止细胞生长信号传导途径，从而抑制细胞的生长；另有观点认为FHIT可与Ap3A等结合成FHIT底物复合物，这种复合物可能是一种信号物质，其抑癌作用可能比其水解酶作用更重要。研究表明FHIT在肿瘤的发生中起着重要的作用，现就FHIT在头颈部鳞癌中的研究进展作一综述。     

p53、Rb、p16抑癌基因在胃粘膜上皮异型增生病变中表达的意义

目的：研究p53、Rb和P16 3个抑癌基因在正常胃粘膜→异型增生粘膜→胃癌发展过程中的表达状态及相互关系。方法：收集胃手术及胃镜活检标本共60例,镜下观察胃粘膜并选取不增生病灶、35例胃腺癌和32例正常胃粘膜中的表达情况。应用聚合酶链反应单链构象多态性分析技术（PCR-SSCP）对35例胃腺癌进行p16基因点突变检测。结果：p53阳性率在轻、中、重度异型增生病灶的分别为7.5%、35.1%、59.1%,胃癌组为68.6%,正常对照组中无表达。Rb蛋白阳性率在轻、中、重度异型增生病灶中分别为80.0%、89.3%、81.8%,胃癌组为57.1%,正常对照组为90.6%。p16蛋白在正常胃粘膜、异型增生粘膜和胃癌中普遍表达,3组间阳性率比较无显著性差异。p16基因PCR-SSCP分析示只有1例低分化腺癌出现异常单链泳动带。不同类型（隐窝型、腺瘤型、再生型）异型增生病灶组间、位于癌旁和良性病变旁的异型增生病组间p53、Rb和p16蛋白的阳性率无显著性差异。高-中分化、低分化、未分化胃癌组p53、Rb和p16蛋白的阳性率无显著性差异。结论：突变型p53蛋白的积聚在胃粘膜异型增生阶段已经开始,随着异型增生程度的加重逐渐增加,重度病变中p53表达率与胃癌组相似,提示p53基因突变是胃癌发生过程中的早期事件。Rb蛋白在癌变组中缺失率较异型增生显著,可能是胃癌发生过程中的较晚事件。推测在p53基因突变的基础上加以Rb蛋白的缺失最终导致胃粘膜上皮癌变。p16蛋白的表达在胃癌发生过程的3个阶段病变中无显著的变化,可能不起要作用。不同类型（隐窝型、腺瘤型、再生型）异型增生间、癌旁或良性病变旁的异型增生间,不同分化程度的胃腺癌组间这3种抑癌基因蛋白表达状态基本相同。