ELISA定量测定单克隆抗体方法改进

本文介绍了以亲和层析纯化的免抗鼠IgG类抗体及其酶标物作为捕获及检测抗体进行鼠杂交瘤培养上清及腹水中IgG类单克隆抗体的ELISA定量测定方法。结果表明:小牛血清(BS)、免血清(RS)、马血滑(HS)、人血清(HuS)及非抗体产生细胞的培养上清对本项εLISA实验无干扰,使测定的结果较可靠,测定的鼠IgG各亚类的标准曲线的线性范围均在5～100ng/ml之间,因此这个快速、可靠的方法可为鼠IgG类单克隆抗体的定量测定提供一种实用的手段。     

单克隆抗体连接表阿霉素导向治疗乳腺癌的体外基础研究

本文报道了抗人乳腺癌单克隆抗体Ｍ４Ｇ３与表阿霉素结合物的制备及其体外免疫活性．首先用高碘酸钠氧化葡聚糖，使其成为多醛基葡聚糖，并以此为中间载体将表阿霉素与单抗连接，经测定，每一抗体分子能携带３１个药物分子，且结合物仍具有良好的免疫活性，为单抗导向药物治疗乳腺癌提供了理论基础和实验依据．     

禽流感病毒H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的研究

 在获得禽流感病毒多克隆抗体及H5亚型特异性单克隆抗体的基础上,研究建立H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H5亚型禽流感病毒.优化反应条件,确定包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与RT-PCR方法比较.同时使用该方法对野外样品进行检测.结果表明:该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物中的H5亚型禽流感病毒.     

禽流感病毒H9亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的研究

 采用禽流感病毒多克隆抗体及H9亚型特异性单克隆抗体,研究建立H9亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H9亚型禽流感病毒.优化了反应条件,确定了包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,对该方法的敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与RT-PCR方法比较.通过使用该方法对野外样品进行检测.结果表明该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物中的H9亚型禽流感病毒.     

单克隆抗体与葡萄球菌肠毒素A结合物的制备及其抗肝癌作用

目的：制备超抗原（BAg)葡萄球菌肠毒素A（SEA）与抗人原发性肝细胞癌（简称肝癌）单克隆抗体（McAb)HAb18F(ab‘)2段的结合物,探讨其介导外周血单个核细胞（PBMC）的抗人肝癌作用。方法,制备McAb HAb18,并用木瓜蛋白酶消化法制备其F（ab‘)2段,再用化学连接剂N－琥珀酰亚氨基－3－（2－二硫吡啶）丙酸酯（SPDP）制备HAb18 F(ab‘)2-SEA结合物,结合物经经快速蛋白质液相层析系统用凝胶色谱柱纯化后,用SDSPAGE鉴定各种收集峰,免疫组化ABC法鉴定结合物的抗体活性,MTT法鉴定结合物活化PBMC的活性及其介导PBMC的杀伤肝癌细胞作用,结果,制备的HAb18F(ab‘)2-SEA结合物具有肝癌抗体活性和活化PBMC的功能,此结合物具有明显的介导PBMC杀伤肝癌细胞的作用,并与其[浓度呈正相关,结论,SPDP是一种很好的蛋白质交联剂,HAb18 F(ab‘)2-SEA结合物民向治疗肝癌具有一定的发展前景。     

环丙沙星人工完全抗原的制备与鉴定

分别采用碳二亚胺法和氯甲酸异丁酯法制备环丙沙星的牛血清白蛋白与卵清白蛋白载体的人工完全抗原CPFX-BSA和CPFX-OVA.人工完全抗原经SDS-PAGE凝胶电泳初步鉴定后,考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量分别为1.24和0.58 mg.mL-1,将偶联抗原稀释至一定浓度,紫外分光光度法测其波形,根据偶联前后波形及吸收峰的变化鉴定偶联物分子量大于载体蛋白,证实CPFX与BSA和OVA偶联成功,根据游离半抗原、载体蛋白和完全抗原偶联物各自的紫外吸光度、摩尔吸光系数,初步定量计算出偶联结合比分别为7.2∶1和6.4∶1.质谱法测定CPFX-BSA和CPFX-OVA分子量分别为6.895×104和4.586×104,推算偶联比分别为5.6∶1和4.2∶1,进一步证实了偶联比和人工抗原制备成功.制备的人工完全抗原CPFX-BSA和CPFX-OVA可分别作为免疫抗原和包被抗原,为环丙沙星单克隆抗体的制备以及环丙沙星快速检测试剂盒的研制奠定基础.     

抗多巴胺-BSA抗体的制备及质量鉴定

本文以Mannich反应改良法连接多巴胺与载体BSA,以此结合物免疫家兔制备多巴胺抗体,此抗体特异性强,效价可达1:64,用于免疫学检测很可行。     

抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究——二 、用McAb直接斑点法检测伊氏锥虫抗原的实验研究

抗伊氏锥虫糖蛋白的单克隆抗体ⅡG_6标记过氧化物酶后,用于直接法斑点试验检测血清中伊氏锥虫(T.e.)抗原,36份感染2—4d的鼠血清全部呈阳性反应;12份正常鼠血清全部呈阴性反应.上述结果表明本方法具有较好的敏感性和特异性.ⅡGMcAb Dot ELISA检测结果显示血中伊氏锥虫密度与抗原滴度呈正相关.该法操作简便易行,不需特殊设备.肉眼即可观察结果.本次实验研究将为现场应用提供快速诊断的重要依据.     

^99Tc^m通过金属硫蛋白标记抗肿瘤单克隆抗体的研究

本文系统研究了^99Tc^m通过双功能联接剂金属硫蛋白（MT）标记抗肿瘤单克隆体的化学问题，并发展了新的实验方法和技术。用交联剂戊二醛制备MT与抗体（Ab)偶联物（MT－Ab)，偶联率为58％。用还原标记法制备^99Tc-MT-Ab，放射性利用率高达90％以上，而非特异标记低于10％。体外试验表明，在强络合剂竞争时，标记物有较高的稳定性。抗结肠癌单抗CL－3标记物的免疫反应活性保留87％。     

Science Letters：Synthesis of arbutin by two-step reaction from glucose

Arbutin was synthesized from glucose by two-step reaction below: (a) 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-a-D-glucosyl chloride or bromide was prepared by glucose and acetyl halide (chloride or bromide). (b) 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-a-D-glucosyl halide (Cl, Br) reacted with hydroquinone, methanol as solvent at pH=9.5～10.0.     

新生儿溶血病血清学检查分析

通过对我院临床确诊的34例新生儿溶血病血清学检查回顾,对血清学诊断方法进行分析评价。确诊为高胆红质血症,新生儿溶血病患儿进行血型鉴定、直接抗球蛋白试验(DAT)、血清游离抗体测定试验、新生儿红细胞抗体释放试验检测。结果显示34例ABOHDN患儿中新生儿红细胞直抗试验阳性率85.29%,血清游离抗体试验76.47%,新生儿红细胞抗体释放试验100%。说明新生儿红细胞抗体释放试验是鉴定新生儿溶血病最敏感的一项试验。     

抗肺癌免疫光敏剂的制备及其杀伤作用

以碳二亚胺(EDCI)为连接剂将抗肺癌单克隆抗体(McAb 3D3与血卟啉衍生物(HpD)共价连接,制备成免疫光敏剂,经ELISA法测定及溶血试验,结果表明偶联物保留了 McAb的反应性及HpD的光敏活性,偶联物经紫外光谱及荧光光谱扫描分析表明,偶联HpD与非偶联HpD的光谱特性有所差别,体外杀伤试验表明,偶联物的杀伤效率提高了10.5倍,且对非靶细胞的杀伤作用微弱,证明HpD与McAb偶联后,对靶细胞具有特异杀伤作用,可为肿瘤的治疗提供一种新的药物。     

求解病态线性方程组的共轭向量基算法

结合最速下降法计算量小和共轭方向法收敛速度快的特点,提出了一种求解病态方程组的共轭向量基的方法。线性方程组的精确解能够由共轭向量基线性表示,利用迭代的方式给出了构造共轭向量基以及对应系数的方法,证明了算法所构造的向量基的共轭性。同时给出了一个改进算法以适合不同精度要求,加快迭代的收敛速度。通过对5000阶的Hilbert方程组进行求解,结果的相对误差小于0.45％,并与当前普遍使用有效的方法进行了比较,数值实验结果表明,该算法适合求解大型病态线性方程组,且具有快速收敛,精度较高的特性。     

ELISA对毒理实验动物血清中神经生长因子抗体动态的研究

用ＥＬＩＳＡ法对神经生长因子（ＮＧＦ）毒理实验动物犬和大鼠血清作了抗－ＮＧＦ抗体检测。结果表明在大鼠血清中没有发现抗－ＮＧＦ抗体,但犬血清中有相应的抗体产生,并随注射剂量增加和注射时间延长而逐渐升高,另外,对ＥＬＩＳＡ间接法和竞争抑制法进行了比较,结果表明,竞争抑制法明显优于间接法,而且是一种简便、特异的好方法。     

兔抗人多发性骨髓瘤细胞多克隆抗体的制备与鉴定

制备人多发性骨髓瘤全细胞兔多克隆抗体。用人多发性骨髓瘤细胞系ARH-77全细胞和福氏完全佐剂通过背部皮内多点注射首次免疫新西兰大白兔,第14 d用ARH-77全细胞和福氏不完全佐剂同样剂量加强免疫,第28 d和38 d时再次免疫。第45 d颈动脉采血80 mL,4℃静置过夜,收集血清。然后采用亲和层析系统纯化血清中的多克隆抗体。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测纯化多克隆抗体的效价;免疫印迹法和荧光免疫细胞化学检测纯化多克隆抗体的特异性。结果:ELISA检测多克隆抗体滴度为1∶20 000,免疫印迹检测结果显示该抗体具有较高特异性,荧光免疫细胞化学检测多克隆抗体能够有效的结合细胞表面抗原。实验获得了高效价的特异性的兔抗人骨髓瘤细胞多克隆抗体,为进一步研究多发性骨髓瘤诊断和治疗奠定了基础。     

兔圆小囊抗菌肽对鸡新城疫病毒及禽流感病毒血清抗体水平影响的研究

选择90只1日龄星杂蛋鸡随机分为两组,实验组在7、14、21、28、35、42、49日龄时分别胸肌注射无菌处理过的兔圆小囊抗菌肽0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.5、0.5mg,对照组同时分别注射相同体积的灭菌生理盐水。常规免疫后,分别于第7、14、21、28、35、42、56日龄采血分离血清,实验组及对照组均随机抽取10只鸡的血清进行血凝抑制实验(HI),分别测定NDV和AIV血清抗体的血凝抑制效价。结果显示:实验组NDV和AIV血清抗体水平均明显高于对照组(P<0.01)。表明兔圆小囊抗菌肽可显著提高鸡新城疫弱毒苗及禽流感灭活苗的抗体水平。     

VMP1基因的克隆及其抗体的制备与鉴定

为了得到效价高、特异性强、能用于检测内源性VMP1蛋白的抗体，采用RT-PCR法，从L929细胞株中克隆鼠VMP1基因，重组入pCMVS载体，用PCR扩增与其氨基酸132-239区域对应的DNA片断，将该片段连接到原核表达载体pGST parallel中，在大肠杆菌BL21菌株中大量表达，经谷胱甘肽-琼脂糖树脂纯化后，得到高纯度的VMP1抗原．免疫新西兰兔，获得抗VMP1蛋白的兔抗血清，将血清纯化后即得到抗VMP1的多克隆抗体．用Western blot分析手段检测了该抗体的特异性及效价．在用该抗体检测外源性和内源性VMP1蛋白的试验中，证实该抗体效价高，特异性强，效果很理想．此方法可用于获得大量廉价的抗VMP1蛋白的高滴度和高特异性的抗体，为进一步研究VMP1在细胞内，尤其是在信号转导通路中的功能和作用奠定了基础．     

吗啡人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

利用化学法合成吗啡人工抗原,将此抗原免疫新西兰大白兔制备抗吗啡多克隆抗体.利用混合酸酐法将吗啡人工抗原分别与蛋白质载体BSA及OVA偶联,经蛋白质电泳以及紫外扫描检测,证明吗啡人工抗原合成成功.用间酶联免疫检测法检测,证明制备得到了高效价的吗啡多克隆抗体血清,且与吗啡人工抗原具有高特异性反应,可用于吗啡免疫学检测方法的研究.     

猕猴、食蟹猴群中STLV-1病毒感染状况的研究

目的　摸清STLV I感染现状 ,从而有效地降低STLV 1在猕猴、食蟹猴群中的感染率。方法　采用STLV 1ELISA法对猕猴、食蟹猴血清进行抗体检测。结果　本中心送美国BioReliance公司的 2 4 5 5只出口猴血清 ,10 3份血清呈STLV Ⅰ抗体阳性 ,19份血清呈STLV I抗体可疑 ,其余血清均为STLV 1抗体阴性。结论　猕猴、食蟹猴群中STLV 1的平均感染率为 4 97% ,其中猕猴STLV 1感染率为 2 7% ,食蟹猴STLV 1感染率为 5 4 % ,是猕猴STLV 1感染率的 2倍 ;随着年龄的增长 ,猕猴 (食蟹猴 )STLV 1的感染率也随之升高