蛹虫草液体培养联产胞外多糖与菌丝虫草素的实验研究

通过对蛹虫草(Cordyceps militaris)液体发酵产胞外多糖和菌丝虫草素的初步实验研究,获得了蛹虫草液体发酵联产胞外多糖和菌丝虫草素的适宜参数.研究结果表明,蛹虫草液体发酵联产胞外多糖和菌丝虫草素的较适宜的氮源是豆粕粉和6%~8%玉米浆粉;较适宜的碳源是玉米面;维生素B1添加量以10 mg/100 m L、微量元素锰添加量以0.01%Mn SO4为宜、培养基初始p H值以5.5为宜;培养温度22~24℃,接种量1%,培养基装量50 m L和5~7 d的培养时间有利于胞外多糖和菌丝虫草素的产生.     

蛹虫草废弃培养残基中虫草素的提取工艺研究

优化并比较了微波辅助和超声波辅助提取蛹虫草培养残基中虫草素的工艺方法.采用L 9(34)正交试验设计,考察了料液比(g:mL)、乙醇含量(%)、微波功率(微波法)或提取温度(超声波法)、提取时间等4个因素对虫草素提取率的影响.结果表明:微波提取以25倍料液比、40%乙醇、240 W下微波提取1.5 min,提取2次为最佳工艺,该条件下浸膏得率为28.33%,虫草素含量为0.378 mg/g;超声波提取在45 kHz功率下,以25倍料液比、40%乙醇、60℃下超声提取30 min,提取2次为最佳工艺,该条件下浸膏得率为38.24%,虫草素含量为0.362 mg/g.比较了超声波提取2次、微波提取2次、微波—超声波联合提取以及超声—微波联合提取等方式对虫草素的提取效率,最终确定微波提取2次为最佳工艺,该工艺适用于蛹虫草培养残基中虫草素的快速高效提取.     

蛹虫草虫草素和虫草多糖综合提取工艺的研究

蛹虫草（Cordyceps militaris）在我国本草文献中已有记载。近年来的研究更进一步证实了蛹虫草与冬虫夏草C.sinensis有相同或相似的化学成分和药理作用,是可供开发的新产品,并可以之作为冬虫夏草的替代品。现代科学论证蛹虫草不仅具有特殊的营养价值,而且有明显的药用价值。其中尤以虫草素、虫草多糖等多种生物活性物质的药用价值最为显著。虫草素是一种具有抗菌活性的核苷类物质,对核多聚腺苷酸聚合酶有很强的抑制作用。在DNA转录 mRNA过程中使mRNA成熟障碍,抑制癌细胞的生长。并有降血糖的作用。虫草多糖是一种高度分枝的半乳甘露聚糖,它能促进淋巴细胞转化,提高血清1gG的抗体含量和机体的免疫功能,增强机体自身抗癌抑癌的能力。因此分离纯化虫草素和虫草多糖,对此类抗癌药物的开发具有很大社会价值和意义。本次研究以蛹虫草粉末为原料,研究了蛹虫草中虫草素和虫草多糖的综合提取工艺技术,探讨了采用超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法4种提取方法,选择虫草素和虫草多糖的最优提取办法。并通过用正交试验方法研究考察了水热回流法中提取温度、提取次数、提取时间、料液比4个因素对虫草素和虫草多糖综合提取效率的影响。建立了从蛹虫草中综合提取虫草素和虫草多糖的最佳工艺。采用正交试验对蛹虫草中虫草素和虫草多糖综合提取工艺进行了研究,为进一步开发利用提供有价值的参考数据,也将会对今后产品开发研究具有重要的意义。     

北虫草培养残基中虫草素的提取纯化及抗肿瘤活性

以北虫草固体培养残基为实验材料,比较闪式提取、超声波提取和超高压提取培养残基中虫草素的效果,用陶瓷膜过滤提取液,获得虫草素粗提液,利用高速逆流色谱分离制备虫草素,通过LC-MS/MS对产物结构进行鉴定,并验证了虫草素对小鼠S180肉瘤的抑制作用。结果显示,超高压提取培养基中虫草素较好,高速逆流色谱分离纯化条件是以V(乙酸乙酯)∶V(正丁醇)∶V(水)=2∶3∶5的两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,流速3.0mL/min,主机转速900r/min,分离温度28℃,以此分离条件经一步洗脱,高速逆流色谱收集馏分,其中峰Ⅲ产物经HPLC检测纯度达97.6%,结构经LC-MS/MS鉴定为虫草素。从100g北虫草培养残基中可制备得虫草素181.90mg,并对其活性验证发现剂量为100mg/kg时小鼠S180肉瘤瘤重抑制率为64.48%。     

古尼虫草生理活性物质的检测与分析

测定了处于各个不同生长期的古尼虫草中虫草多糖、虫草氨基酸、虫草素三种活性物质的含量 .结果表明 :虫草多糖含量最高可达 2 8.2 mg/ g,氨基酸含量达 2 8.62 m g/ 10 0 mg干菌丝 ,虫草素含量达 13 5 0μg/ g.     

响应面分析法优化蛹虫草菌糠多糖提取工艺的研究

以蛹虫草(Cordyceps militaris)菌糠为材料,进行菌糠多糖提取条件的优化研究。单因素实验表明,提取温度、水料比及提取时间均不同程度地影响多糖提取率。根据Box-Behnken中心组合实验设计原理对提取温度、水料比、提取时间进行三因素三水平试验设计,采用响应面软件Design-Expert进行处理,获得蛹虫草菌糠多糖提取最佳的优化条件。即提取温度100 ℃,水料比50∶1,提取时间3 h 优化条件下多糖提取率达5.45 %, 多糖提取预测值为5.88 mg·mL^-1。建立的模型拟合度较好,可用来对蛹虫草多糖提取工艺的分析和预测。     

虫草头孢菌CS-866菌株发酵条件的研究

对虫草头孢菌CS-866菌株的菌丝体发酵条件进行了研究,其适宜的培养基消前pH为5.0~7.0,培养温度为26~28℃,接种量为3%~5%,最佳种龄为3 d,发酵周期4 d,培养基消前加0.3%毛豆油消沫,发酵过程中对通气量的要求较高.虫草头孢菌丝体所含氨基酸与天然冬虫夏草相近,红外吸收光谱也表明两者所含的各类化学成分极为相似.     

虫草素和虫草素/双层氢氧化物纳米复合物对HeLa细胞生长抑制

为解决虫草素在体内被腺苷脱氢酶(ADA)快速降解的问题,制备虫草素/LDH复合物,研究其在体内外对虫草素的缓释以及对HeLa细胞的生长抑制作用.结果表明:当虫草素/LDH复合物中虫草素质量浓度为30,60,90μg·mL-1时,复合物对HeLa细胞的生长抑制率分别为52.4%、61.3%、79.6%,与虫草素对照组比较,P<0.01.显微镜观察发现,当虫草素质量浓度60μg·mL-1时,虫草素/LDH复合物使大部分HeLa细胞死亡;虫草素的对照组HeLa细胞死亡较少,但细胞内部明显出现空泡.虫草素/LDH复合物体外释放表明,虫草素插入LDH双层结构之后,使虫草素释放速度明显被降低.对SD大鼠腹腔给药后,虫草素/LDH复合物血药最高质量浓度为82.1μg·mL-1,在药后1.5h出现,虫草素对照组的血药最高质量浓度为75.3μg·mL-1,在给药后1h出现.     

搅拌式光生物反应器培养紫球藻的条件优化

研究在光生物反应器中搅拌速度、通气量、光照强度和装液量对紫球藻生长的影响.实验结果表明:在摇床培养过程中,紫球藻的生物量和胞外多糖随着三角瓶装液量的减少而增加.通过正交试验对搅拌式光生物反应器的三个培养条件通气量、搅拌转速和光照强度进行优化,获得搅拌式光生物反应器培养紫球藻的最佳条件为通气量120L/h、搅拌转速200r/min和光照强度5000lx,在该条件下紫球藻的生物量为2.548g/L、胞外多糖557.2mg/L.正交试验分析表明,三个培养条件中通气量对藻生物量和胞外多糖含量的影响最明显.通过采用DPS软件对正交实验结果进行二次多项式模型分析和拟合,以生物量和胞外多糖为指标建立回归模型,得到相应的优化条件和预测值.     

高产D-甘露醇虫草菌种分离纯化的研究

本试验系用生物工程技术分离纯化虫草菌种的研究。先用组织分离法从野生虫草整体组织上分离出虫草菌种 ,再用平板稀释法将菌种纯化 ,获得一株高产D -甘露醇 (虫草酸 )的优良菌种。该菌种被鉴定为蝙蝠蛾拟青霉。使用该菌种经一级种子培养和发酵培养 ,获得含D -甘露醇 9 9% (野生虫草约 7% )、总氮 5 1% (野生虫草约 4% )的虫草菌丝体。原种斜面培养基组成 (% ) :琼脂 2、葡萄糖 2、蛋白胨 0 2、磷酸二氢钾 0 1、硫酸镁 0 0 3、麦麸 5。种子培养基组成 (% ) ;葡萄糖 2、蛋白胨 0 5、磷酸二氢钾 0 1、硫酸镁 0 0 3、麦麸 5。原种培养温度 2 3- 2 4℃、培养时间 4- 5天 ;平均稀释纯化所用稀释菌液为 10 -1、 10 -2 、 10 -3 、 10 -4 、 10 -5、 10 -6,挑菌培养温度分别为 2 3- 2 4℃、 2 8℃、 37℃。种子培养条件 :一级种子培养 :摇床转速 180r/min ,培养温度 2 4- 2 5℃ ,时间 2 - 3天 ;二级种子培养 ;摇床转速 90r/min ,培养温度 2 4- 2 5℃ ,时间 2天。发酵培养条件 ;接种量 5 - 10 % ,温度 2 4- 2 6℃ ,搅拌速度 15 0 - 180r/min ,通气培养 ,时间 5 - 6天 ,PH4 5 ,残糖量降至 0 3%。     

冬虫夏草与虫草菌丝有效成分分析比较

对冬虫夏草及其无性型（ＴｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍｓｉｎｅｎｓｅＣ．Ｌ．Ｌｉ．）的虫草多糖。红外光谱、甘露糖、氨基酸、微量元素等作了分析和比较。发现二者成分比较近似,通过急性毒性实验Ａｍｅｓ实验,微核实验表明虫草菌丝安全无毒。     

冬虫夏草的研究进展

冬虫夏草是我国特产名贵中药,由于自然和人为的原因,其资源和产量均在下降．本文在查阅大量文献资料的基础上,从冬虫夏草的生态及资源状况、冬虫夏草寄主昆虫、冬虫夏草菌、冬虫夏草的有效成分、冬虫夏草的药理作用和冬虫夏草的人工培养等六个方面总结了近年来有关冬虫夏草的研究进展,并讨论了今后的研究方向．     

蛹虫草液体的深层发酵

以菌丝体质量浓度(干重)和发酵液中甘露醇浓度为指标,研究温度、初始pH值、培养时间等因素对蛹虫草液体培养的影响,得到蛹虫草摇瓶液体培养的最佳温度为25.0℃,初始pH值为6.10,培养时间为5 d;蛹虫草液体发酵最适培养基的组成为:20 g/L蔗糖+5 g/L蛋白胨+1 g/L MgSO4.7H2O。在此基础上进行小型分批式发酵罐实验,研究有利于蛹虫草生长及活性物质生成的pH控制策略。研究结果表明,pH分段控制的液体深层发酵对蛹虫草生长最为有利,菌丝体质量浓度为17.31 g/L,甘露醇质量浓度达43.47 g/L。     

蚕蛹虫草菌丝生物学特性的研究

对蛹虫草菌丝体进行液体摇瓶培养，以菌丝体干重为指标，从碳源、氮源、pH、温度等方面探讨了蛹虫草菌丝的生物学特性．结果表明，蛹虫草菌丝的生长可以利用多种碳源和氮源，在以红糖为碳源、奶粉为氮源的液体培养基中生长最佳，且碳源／氮源合适的比例为2．0—2．5／1．0，适宜pH为5．0—6．5，最适pH为6．0，适宜生长温度范围为15—30℃，最适温度为25℃．     

冬虫夏草无性型的分子鉴别

采用分子生物学手段,以ｒＤＮＡＩＴＳ区为分子指标,对冬虫夏草Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓｓｉｎｅｎｓｉｓ的有性和无性阶段进行比较分析,从分子水平证明冬虫夏草的无性阶段是中国被子毛孢Ｈｉｒｓｕｔｅｌａｓｉｎｅｎｓｉｓ．     

蛹虫草子实体的人工培养研究

通过对蛹虫草子实体的人工培养研究发现：固体营养物以小米和高粱米的混合物是最佳的。人工培养基的最佳碳、氮源为可溶性淀粉和蛋白胨，最佳pH范围是5～6；VB1、2，4-D和无机元素K^ 、Mg^2 、Ca^2 对子实体的生长有促进作用。最佳培养条件是湿度80％。光照6001x(24L：0D)，15℃培养10d后转到25℃下培养．蚕蛹培养子实体的条件是10℃下培养到蚕蛹僵硬后转到25℃下培养，湿度80％．     

蛹虫草纤溶酶酶学性质的初步研究

对蛹虫草纤溶酶的酶学性质进行了研究,结果表明,其纤溶活性随温度(≤45℃)的升高和保温时间的延长,逐渐下降,当温度超过50℃时,则随温度的升高和保温时间的延长急剧下降;蛹虫草纤溶酶的最适pH为7.0,在碱性条件下纤溶活性相对稳定;金属离子Ca2+和Fe2+对蛹虫草纤溶酶的活性有显著激活作用;抑制剂中PMSF对蛹虫草纤溶酶活性的抑制作用较小,而Aprotinin、EDAT和EGTA对其纤溶活性均有较显著的抑制作用,说明蛹虫草纤溶酶可能不同于之前报道的纳豆激酶(丝氨酸蛋白酶),而是一种全新的蛋白酶,但对这一点还需要进一步的研究验证.     

亚香棒虫草药用价值初探

用产于山西省的亚香棒虫草为研究材料,通过对原寄生昆虫种类的鉴定和亚香棒虫草体内氨基酸组成和含量分析,主要微量元素及含量测定与冬虫夏草进行对比,结果发现三种亚香棒虫草的１８种氨基酸的总含量均高于冬虫夏草,其平均值分别高于冬虫夏草０．１１３ｍｇ／ｇ、０．１９８ｍｇ／ｇ、０．１１８ｍｇ／ｇ。微量元素的数值相近似,因此其药用价值是可以肯定的,这表明亚香棒虫草作为冬虫夏草的代用品是有着良好的前景     

冬虫夏草的研究现状

文中根据有关资料，对冬虫夏草的生态分布、生物学特性、药理作用以及人工栽培技术等进行了阐述。