不同品系黑腹果蝇细胞系的建立（Ⅱ）——黑条体突变型（BSR）细胞？…

为了广泛选择外源真核基因高频扩增及高效表达的载体和黑体系统，利用改良的Ｍ３（ＢＦ）培养基从黑腹果蝇黑条体的胚胎中建立了一株细胞系命名为ＢＳＲ－９８０４，原代培养４０ｄ形成单层细胞，以１：２分种率７ｄ传代一次，连续传代４０代次，细胞倍增时间为１８ｈ，细胞系以２倍染色体为主，未发现结构异常的染色体，２％胎牛血清为维持细胞生存的最小需要量，细胞系可在４℃普通冰箱中保存复苏。     

人小肠癌腹水转移细胞的无血清建系培养

人小肠癌腹水转移细胞系ＨＩＣ的无血清培养亚系经过３ａ的传代培养建立成功，命名为ＨＩＣＳＦ。该细胞仍保留其母系ＨＩＣ一些属性：亚三倍体组型，众数５３条；增殖活跃，倍增时间１６ｈ；异体动物移植致瘤，具有活跃的血管生成行为和较高的转移行为。由于培养条件的变化，该细胞也获得了一些新的特征，ＨＩＣＳＦ细胞属弱贴附细胞，形态多变。贴附细胞主要靠树枝状突起贴附于培养介质，突起内微管、微丝相对较多，细胞骨架总体上呈无序排列。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明ＨＩＣＳＦ细胞分泌多种蛋白质进入培养上清中，培养上清的层析分离表明，至少存在分子质量分别为９０，７０，４５和１０ｋｕ４种促生长活性因子，同时也存在分子质量分别为６０和３０ｋｕ２种生长抑制活性因子。这些生长因子共同调控着ＨＩＣＳＦ细胞的自主生长。     

不同品系黑腹果蝇细胞系的建立(Ⅱ)——黑条体突变型(BSR)细胞系的建立和生物学特征

为了广泛选择外源真核基因高频扩增及高效表达的载体和受体系统，利用改良的Ｍ３（ＢＦ）培养基从黑腹果蝇（ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＭｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）黑条体（Ｂｌａｃｋｓｔｒｅａｋｂｏｄｙ·ＢＳＲ）的胚胎中建立了一株细胞系命名为ＢＳＲ９８０４．原代培养４０ｄ形成单层细胞，以１∶２分种率７ｄ传代一次，连续传代４０代次，细胞倍增时间为１８ｈ，细胞系以２倍染色体为主，未发现结构异常的染色体，２％胎牛血清为维持细胞生存的最小需要量，细胞系可在４℃普通冰箱中保存复苏．     

菜蛾科小菜蛾(Plutella xylostella)细胞系的建立

第一株小菜蛾(Plutella xylostella)蛹发展起来的细胞系已经建成并命名为BCIRL-PX2-HNU3.BCIRL-PX2-HNU3是由20个剪碎的全蛹经过消化处理,培养在TC-199-MK 培养基中建立起来的.原代培养只历时48天就开始了第一次转代,由于细胞增殖快而稳定、此后即按1∶2的分裂比值,每周转代三次,待转代100次后,改按1∶10的比值转代,每周一次,至目前为止,该细胞已传至115代.BC1RL-PX2-HNU3细胞仅疏松贴附瓶壁,容易从瓶壁脱落.转代时,不需用消化酶.细胞的形状多种多样,但以园形和卵园形为主.28℃时,96小时细胞群体倍增时间为30小时±2.06.1×10~5/毫升细胞培养8天后,最大密度可达1.3×10~6细胞/毫升.该细胞系细胞的染色体粗短,多为多倍体,具有鳞翅目昆虫染色体的典型性状.用磷酸葡萄糖异构酶作等电聚焦,该细胞系与一些其他细胞系有明显差异.试验表明:BC1RL-PX2-HNU3细胞系对苜蓿尺蠖(Autographa californica)的核型多角体病毒以及中国棉铃虫(Heliothis armigera)病毒VHA—273敏感,并能复制出多角体.另外,用小菜蛾颗粒体病毒感染该细胞系,6天后,电镜切片证实培养的细胞胞质内出现了颗粒体病毒的蒴伏体,但在随后的多次试验中,未能重复.     

棉铃虫(Heliothis armigera)的细胞培养

用Grace(1962)培养基,辅之以10—20%小牛血清,对棉铃虫蛹及成虫的生殖腺细胞,胚眙细胞,幼虫的血细胞,脂肪体及体壁细胞进行培养,并对其生长进行比较,发现在上述的培养中,以初羽化成虫的即巢细胞生长最好,维持的时间也最长,生长良好的卵巢细胞一般在12小时内即可贴附瓶壁,一周内可以长成单层。培养的细胞多兼有成纤维状或园形两种,亦有以上皮样细胞或园形细胞为主的。经过换液,有的培养中出现了成片较小的纺棰形细胞.抽样作分裂相的检查观察,证实了大量细胞处于分裂活动期。细胞在培养中有的存活超过了4个月,其中最长的已达19个月。原代培养的细胞能存活这样长的时间,实属罕见。唯未见这些细胞有什么变化,也看不到有增殖的迹象.全部培养都没有以昆虫血淋巴作培养基的辅助物.     

蓖麻蚕蛹卵巢细胞株的建立及其对核型多角体病毒敏感性…

用蓖麻蚕雌蛹卵巢组织进行离体细胞培养，建立了细胞株，命名为ＷＶＢ－Ｐｃｒ－０２，在建株过程中，原代培养一个月左右，就开始传代。细胞生长稳定，分裂比值为１：２，每４－５ｄ传代一次。细胞主要为贴壁的圆形细胞，其次是梭形细胞。细胞群体倍增时间为６０－６４ｈ。观察细胞染色体，其二倍体蚕的染色体为５６条，建株后染色体数为１００－１１０条，与其他蚕细胞类似。     

黄条行军虫(Spodoptera ornithogalle)二个传代细胞系的建立

BCIRL-SO3-HNU1和BCIRL-SO4-HNU2是由黄条行军虫成虫的卵巢管培养发展起来的二个新细胞系。它们各由一头刚羽化的雌蛾卵巢管。经过剪碎、胰蛋白酶处理、然后将细胞冲散、加入5毫升TC-199-MK培养基,培养在Falcon TC-25cm塑料瓶中。这二个培养在建系过程中,最显著的特点是:它们不仅在原代培养阶段增殖非常迅速,传代后的最初阶段的增殖也极快。SO3由原代培养开始至第一次传代,历时仅28天。SO4历时仅29天。它们除在第4代前传代间隔为3—5天外,第4代以后,都一直以1:2的分裂值每周传代三次。第100代以后才改按1:10的分裂值每周传代一次。SO3和SO4的细胞均疏松贴附瓶壁。传代时,不需经过酶的处理,轻轻振摇瓶壁或直接用培养基冲洗。细胞即可分散脱离瓶壁。它们的细胞大都呈园形,也有部分呈纺缍形或长形。从整体看,SO4细胞略大于SO3,细胞群体倍增时间,SO3在28℃下,120小时内为47±3.2小时.SO4在28℃下,72小时内为54±5.07小时。细胞的最高密度,SO3可达1.36×10~6细胞/毫升,SO4可达1.28×10~6细胞/毫升。按常规作细胞染色体的观察,其染色体粗短,数目与其他鳞翅目昆虫类似,变异大,大多难以计数。初步试验表明:这二个细胞系对黄条行军虫的核多角体病毒以及中国棉铃虫的两株多粒包埋核型多角体病毒均不敏感。     

杜仲细胞的悬浮培养

杜仲外植体在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ的培养基上可诱导出生长速度快、离散性好、适合于悬浮培养的愈伤组织；愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的液体培养基上进行振荡培养，经３～４次继代，即可建立起悬浮细胞系；悬浮细胞的形状为长形、椭圆形、圆形和“月牙”形。     

嗜凤梨果蝇(Drosophila ananassae)细胞系的建立及其生物学特性初步观察

为建立真核基因表达受体系统,以嗜凤梨果蝇胚胎为材料,采用常规方法获取发育4～8h的果蝇胚胎细胞,以改良M3(BF)培养液体外培养,经40d左右的原代培养后行传代培养,以后每隔7d传代一次,传至10代时按照细胞系建立标准检测细胞系的一系列生物学特性.结果显示:细胞维持体外生长将近1年,传至60代.细胞在接种的0～96h内呈指数生长,临界增殖浓度为1.0×106个(细胞) mL.部分细胞染色体呈现异倍化.经液氮冻存的细胞复苏后活性达90%以上.该细胞系是一株成功的细胞系,命名为HY-ANA.     

椭圆背角无齿蚌血细胞的活体观察

用相差显微镜对椭圆背角无齿蚌血细胞进行了滴片的短时观察和培养瓶中的较长期的活体观察,发现其血细胞在体内和刚取出时全为圆球体,而在体外较短时期内,绝大部分细胞要伸出伪足和棘突,紧贴玻璃表面,相互连成网状,只有少数细胞一直保持球形,不与瓶壁贴附。     

草珊瑚单细胞克隆的平板培养

在草珊瑚细胞克隆的平板培养中，很多因素能影响其植板率。ＫＴ，２，４—Ｄ及ＮＡＡ能提高草珊瑚细胞克隆的植板率，这三种激素对细胞生长的最佳搭配是ＫＴ０．４ｍｇ／１，２，４－Ｄ０．８ｍｇ／ｌ，ＮＡＡ０．２ｍｇ／ｌ；草珊瑚细胞悬浮继代数不同，其植板率相差甚远，用悬浮培养第２代的细胞做材料最好；最适细胞克隆生长的培养基ｐＨ值为５．８；细胞植板密度低于每毫升５００个细胞时，几乎没有克隆形成。     

草珊瑚细胞悬浮培养之研究

报道了草珊瑚（Ｓａｒｃａｎｄｒａｇｌａｂｒａ）细胞悬浮培养的某些特性。细胞悬浮培养的摇床转速对草珊瑚细胞生长至关重要、培养物在１００ｒ／ｍｉｎ速度下振荡培养几乎难以存活，最佳的摇床转速为４０ｒ／ｍｉｎ（２３．５ｈ／ｄ＋８０ｒ／ｍｉｎ（０．５ｈ／ｄ），其生长可增加５倍左右。细胞悬浮培养的接种量以２．０ｇＦＷ／瓶合适，其培养物的月产率１３．２２ｇＦＷ／瓶（或１８．７３ｇＤＷ／１）。细胞生长的时间进程是，接种０－５ｄ，细胞增殖十分缓慢，１０－２０ｄ迅速生长，２０ｄ后基本停止生长。培养基的ｐＨ迅速下降时是细胞增殖缓慢的时期，当培养基ｐＨ值开始升高时，细胞增殖也显著加快。黄酮苷类物质的合成在０－２０ｄ迅速增加，２０ｄ左右达到高峰。     

不同造林密度对尾叶桉生长及产量的影响

在广西象州石龙镇，用随机区组试验设计探讨不同造林密度（８３３株／ｈｍ＾２、１１１１株／ｈｍ＾２、１２５０株／ｈｍ＾２、１４２９株／ｈｍ＾２、１６６６株／ｈｍ＾２、２０００株／ｈｍ＾２、２５００株／ｈｍ＾２）对４．５年生尾叶桉生长及产量的影响。结果表明：在供试密度中，密度对胸径生长的影响达极显著水平，胸径生长量随密度的增大而减小；密度对树高生长的影响不显著；立木单株材积在１１１１株／ｈｍ＾２￣２５０     

棉铃虫细胞系SFE—HA—8212的克隆化及对HaSNPV受纳性提高的…

用细胞临界生长密度法对棉铃虫蛹卵巢细胞系ＳＦＥ－ＨＡ－８２１２进行克隆化，获得８株克隆细胞系。各株克隆细胞系各自的形态较为均一，但相互间在形态，生长特性，对病受毒纳性等方面有很大差别，其中一株Ｃ８细胞对棉铃虫单粒包埋型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）的受纳性明显高于ＳＦＥ－ＨＡ－８２１２细胞，形成角体的细胞比率，多角体的产量，游离病毒粒子的产量及多角体蛋白的产量均有提高，是研究和应用ＨａＳＮＰＶ的有效系     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用弓形虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,取脾细胞,与Ｓｐ２／０ 细胞融合,获得３ 株能稳定分泌抗弓形虫单克隆抗体的细胞。细胞培养上清液和腹水中的单克隆抗体效价分别为１∶１６ ～２５６ 和１０ － ６ ～１０ － ７ 。单抗类型均为ＩｇＭ。杂交瘤细胞经液氮冻存１２ 个月后,复苏生长良好,分泌活性稳定。在ＭｃＡｂ－ Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ 实验中,所能测出可溶性抗原的最小浓度为１０ ｎｇ／ ｍＬ     

棉铃虫细胞系SFE—HA—8212的克隆化及对HaSNPV受纳性提高的克隆系的建立

用细胞临界生长密度法对棉铃虫蛹卵巢细胞系ＳＦＥ—ＨＡ—８２１２进行克隆化，获得８株克隆细胞系．各株克隆细胞系各自的形态较为均一，但相互间在形态、生长特性、对病毒受纳性等方面有很大差别，其中一株ＣＳ细胞对棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）的受纳性明显高于ＳＦＥ—ＨＡ—８２１２细胞，形成多角体的细胞比率、多角体的产量、游离病毒粒子的产量及多角体蛋白的产量均有提高，是研究和应用ＨａＳＮＰＶ的有效系统．     

积累聚β－羟基丁酸的菌种选育及发酵条件

苜蓿根瘤菌ＡＳ１．１５９经亚硝基胍和Ｃｏ￣（６０）γ射线诱变，获得一株高积累聚β－羟基丁酸（ＰＨ８）突变株Ｊ５１７７，积累的ＰＨＢ可达细胞干重的３０％，约为原出发菌株的１０倍。采用分批补料发酵法，积累的ＰＨＢ可达细胞干重的７１％。菌体生长最适Ｃ／Ｎ比值为２．５，菌体积累ＰＨＢ最适Ｃ／Ｎ比值为１５；ＣａＳＯ＿４，Ｎａ＿２ＭｏＯ＿４对菌体积累ＰＨＢ有促进作用。     

人肝癌细胞骨架网络系统的初步研究

利用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００及其联合（ＮＨ４）２ＳＯ４的抽提技术与ＣｏｏｍａｓｉｅｂｌｕｅＲ２５０染色、免疫酶标技术相结合，体外实验比较研究人肝癌细胞系（ＨｅｐＧ２）细胞骨架网络的分布构像及其中间纤维蛋白构型。结果：人肝癌细胞系（ＨｅｐＧ２）显示其细胞骨架网络的分布构像及其中间纤维对Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、Ｋｅｒａｔｉｎ两种抗体均呈现阳性反应。结论：恶性肿瘤细胞的中间纤维蛋白构型可能具有异质性的蛋白分子共表达，这对仅以ＴｒｉｔｏｎＸ－１００加（ＮＨ４）２ＳＯ４的抽提技术进行恶性肿瘤细胞中间纤维蛋白构型分析，是一个必需考虑的问题。     

葡萄耐盐细胞系的超策结构研究

运用透射电子显策镜技术研究葡萄耐盐细胞系和对照系的细胞超微结构。结果表明两类细胞系均由排列紧密的分生细胞团组成。但是，与对照系相比，耐盐细胞有几个显的超微结构变化：液泡较大；质体内积累淀粉粒，形成杯形变形质体；脂滴、高尔基体和平行于胞壁堆积的内质网明显增多，出现包绕着高密度核糖体的环形内质网，细胞壁内突生长，表面凹凸不平，胞间连丝丰富。这些结构改变可能与葡萄细胞的耐盐能力密切相关。     

2,4—D诱导结瘤对青稞生长的影响

在２，４－Ｄ诱导下，接种豇豆根瘤菌，能诱导青稞根部结瘤，在其根瘤中有一定数量的接种根瘤菌；同时，２，４－Ｄ诱导结瘤的青稞植株的株高、株重均比对照高，而根长、叶片数、绿叶数比对照低，其根系生长受到严重抑制．