大蒜素抑制肺癌细胞增殖的研究

本文研究大蒜素对人肺癌细胞A549增殖的抑制作用,采用噻唑蓝(MTT)法,观察大蒜素对人肺癌A549细胞的剂量毒性情况,并用流式细胞仪(FCM)观察大蒜素处理后A549细胞周期分布的变化。     

IL-10修饰的树突状细胞的体外生物学效应研究

探讨lL-10修饰的树突状细胞（DC）对T细胞增殖和细胞毒性T细胞（CTL）胞毒活性的影响。采用乳酸脱氢酶法和ELISA法，分别测定细胞毒活性及T细胞凋亡。结果表明，IL-10对同种细胞刺激的增殖反应和特异性CTI．细胞毒活性有明显的抑制作用，修饰的DC诱导淋巴细胞增殖反应明显降低，而未修饰的DC诱导淋巴细胞增殖反应较强；IL-10和修饰的DC可诱导淋巴细胞凋亡．可见，稳定表达IL-10的DC，对T细胞增殖和对胞毒活性有明显的抑制作用，并可诱导T细胞凋亡。     

维康醇诱导A549人肺癌细胞凋亡作用研究

为探讨维康醇诱导人肺癌A549细胞凋亡的机制,本研究采用噻唑蓝(MTT)法检测维康醇对人肺癌A549细胞细胞增殖的影响,用Hoechst 33258染色法观察药物处理后细胞形态的变化,用吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光染色法观察细胞凋亡形态,Annexin V-FITC/PI染色检测A549细胞凋亡率,Caspase-9/3试剂盒检测半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性。结果表明:维康醇能显著抑制A549细胞的恶性增殖,并呈剂量依赖性(P<0.0或P<0.01),细胞致死率也不断上升(P<0.05或P<0.01),经维康醇处理后的A549细胞出现明显的形态改变,细胞表现出染色体边集、核浓缩、核碎裂等典型凋亡形态学特征。细胞凋亡率随维康醇浓度的增加而升高。同时,Caspase-9、Caspase-3活性也在逐渐升高(P<0.05或P<0.01)。由此可知,维康醇能够通过抑制A549细胞的恶性增殖,最终诱导细胞的凋亡,其机制可能是通过活化Caspase-9并进一步激活Caspase-3,从而诱导A549细胞凋亡。推测维康醇诱导A549细胞凋亡是通过线粒体调控的内源通路所介导,这个过程依赖于Caspase-3、Caspase-9的激活。     

IL-2联合银耳多糖激活的脾细胞对体外肿瘤细胞杀伤作用的研究

目的研究淋巴因子IL-2联合银耳多糖(Tremella Polysaccharide TP)共同激活的小鼠脾细胞对肿瘤细胞的体外杀伤作用.方法用甲基-3氢胸腺嘧啶核苷标记肿瘤细胞H22,B16,p815,将标记的靶细胞悬液调至1×105/mL,分别以效靶比40∶1,20∶1和10∶1加入效应细胞,混匀后置37℃5%CO2培养箱内培养2h,2h后用γ-闪烁记数仪对上述细胞悬液进行检测.结果 2种效应细胞对B16杀伤作用最强,H22次之,p815最弱,TP-LAK细胞的作用较之LAK细胞更强(P<0.05),且效靶比越高,杀伤作用越强.结论 IL-2激活脾LAK细胞是有效的抗肿瘤细胞,IL-2与银耳多糖在活化脾细胞提高抗肿瘤方面具有协同作用.     

ING4及IL-24双基因共表达腺病毒载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用研究

目的用人肿瘤生长抑制因子(mING4)及人白介素24(IL-24)基因构建腺病毒双基因共表达载体(Ad-ING4-IL-24),并设Ad-ING4和Ad-IL-24单基因对照,研究双基因共表达载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用.方法首先将已构建成功的Ad-ING4-IL-24,Ad-ING4及Ad-IL-24腺病毒感染QBI-293A细胞,经多轮扩增后获得高滴度的病毒子,测病毒效价后分别以100 MOI剂量感染MG-63细胞,用荧光显微镜、RT-PCR法检测ING-4及IL-24在MG-63细胞中的转录和表达;MTT法检测ING-4及IL-24基因表达对MG-63细胞的生长抑制效应;半定量RT-PCR法检测ING4及IL-24基因表达对MG-63细胞中的Bcl-2,Bax,Caspase3,p21,CD34等相关基因表达的影响.结果获得了高滴度的重组腺病毒Ad-ING4-IL-24,Ad-ING4,Ad-IL-24和Ad-GFP;治疗后MG-63细胞中ING-4及IL-24双基因表达对MG-63细胞增殖有明显抑制作用,ING-4及IL-24基因表达可通过上调细胞中Bax,Caspase3,p21和下调Bcl-2,CD34基因表达诱导细胞凋亡.在病毒子剂量为100 MOI时,Ad-ING4-IL-24对MG-63人骨肉瘤细胞抑制作用比对Ad-ING4和Ad-IL-24抑制效果更为显著.结论腺病毒介导的ING4或/和IL-24基因可明显抑制MG-63人骨肉瘤细胞的生长,且Ad-ING4-IL-24双基因比Ad-ING4和Ad-IL-24单基因的抑制效果更为显著,该现象可能是通过改变Bcl-2,Bax,Caspase3,p21,CD34基因表达水平来发挥抗肿瘤作用的.     

胡桃醌含药血清体外抗肿瘤实验研究

研究胡桃醌(Juglone)含药血清对人肺癌A549细胞的生长抑制作用及对细胞周期的影响. 以血清药理学原理为基础,通过MTT法检测胡桃醌对A549细胞的生长抑制作用,并筛选最佳药物浓度;利用流式细胞仪分析胡桃醌对A549细胞周期的影响,并用Western blot验证. 实验结果表明,胡桃醌的半衰期T_1/2=136 min,MTT法显示其对体外培养的人肺癌A549细胞具有明显抑制作用,比较12,24,48 h细胞存活率得出10%高剂量组(0.107 μg/mL)胡桃醌血清抑制作用较好,同时,胡桃醌可通过凋亡途径阻滞细胞于S期,增加caspase-3的表达. 胡桃醌对A549细胞可能具有生长抑制作用,将细胞阻滞在S期,诱导细胞凋亡,上调caspase-3表达量.      

柴胡皂甙D对肺癌A-549细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

为探讨柴胡皂甙D对肺癌细胞株A549的增殖抑制和促凋亡的作用及其机理,应用MTT比色法检测不同浓度柴胡皂甙D对A549胞的增殖抑制,采用TUNEL法观察细胞凋亡,RT-PCR法检测用药前后bcl-2和C-myc基因mRNA表达水平,Western blot检测用药前后Fas蛋白的表达.研究发现:柴胡皂甙D对A549细胞增殖抑制作用成剂量正相关,对促使A549细胞凋亡有显著作用,用药48 h后bcl-2和C-myc基因mRNA水平明显降低,Fas蛋白表达增强,认为柴胡皂甙D对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用及诱导凋亡的作用,可能通过bcl-2和C-myc基因表达下调,Fas蛋白表达上调实现.     

石榴鞣花酸提取物对人肺癌细胞A549凋亡的诱导

为了探讨石榴鞣花酸提取物(EAEFP)诱导人肺癌细胞凋亡的作用及其可能的作用途径,以A549肺癌细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法评估EAEFP对A549肺癌细胞的抑制效果。通过4′,6-二脒基-2苯基吲哚(DAPI)染色法观察EAEFP对A549肺癌细胞形态的作用。利用流式细胞仪测定EAEFP对A549肺癌细胞分裂周期和细胞凋亡的影响。研究结果表明:石榴鞣花酸提取物能显著抑制A549肺癌细胞的生长。随着石榴鞣花酸提取物质量浓度的增加,A549肺癌细胞形态发生明显变化,细胞周期被阻滞在G1期,细胞凋亡率显著增加。石榴鞣花酸提取物能抑制A549肺癌细胞增殖,通过阻滞细胞周期从而诱导细胞凋亡。     

羟基喜树碱诱导肺癌细胞凋亡的实验研究

通过设计不同浓度的羟基喜树碱（HCPT）处理体外培养的肺癌细胞,采用形态学与生化特征的观察及流式细胞仪进行检测.实验结果显示：羟基喜树碱（HCPT）能诱导肺癌细胞发生凋亡,且这种凋亡的作用与HCPT的浓度和作用时间有关.     

小鼠分娩前后子宫IL17A及24p3表达变化的研究

选择雌性BALB/c小鼠作为动物模型,分别在未孕期、怀孕中期、分娩当天、分娩后一天和分娩五天5个不同时期剖取子宫和肝脏.RT-PCR检测不同时期IL-17A及24p3 mRNA在小鼠子宫及肝脏内的表达,HE组织染色检查淋巴细胞浸润程度.结果发现小鼠分娩前后IL-17A和24p3 mRNA在子宫内的表达呈正相关,两者可能参与了分娩前后子宫局部免疫炎症反应的调节.     

大蒜素对人肺腺癌细胞SLC-89增殖的影响

目的:观察大蒜素对人肺腺癌细胞SLC-89增殖的影响。方法:不同浓度的大蒜素与SLC-89细胞共培养72 h,运用MTT法测定大蒜素的IC50。将IC50、IC50/2、IC50/4剂量的大蒜素与SLC-89细胞共培养72 h后,运用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法分别测定细胞端粒酶活性,运用流式细胞技术测定细胞PCNA的表达率。加入等量生理盐水共培养作为对照组。结果:大蒜素能抑制SLC-89细胞的增殖,其IC50为79.8μg/mL,IC50和IC50/2剂量的大蒜素能显著抑制SLC-89细胞端粒酶的活性,IC50、IC50/2、IC50/4剂量的大蒜素都能显著抑制SLC-89细胞PCNA的表达。结论:大蒜素能抑制SLC-89细胞的增殖,其PCNA的表达比端粒酶活性更容易受到下调。     

强力霉素对人非小细胞肺癌A549细胞的增殖抑制及促凋亡作用

为研究强力霉素体外对人非小细胞肺癌A549细胞的增殖及凋亡的影响。应用MTT比色法研究不同浓度强力霉素(2.5,5,10,20,50mg/L)对A549细胞增殖的影响。荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳、AnnexinV-PI双标法等多项方法,研究强力霉素对A549细胞的促凋亡作用;采用免疫组化的方法,观察药物作用后bcl-2和bax的表达。强力霉素作用后,A549细胞的吸光度值降低,并出现凋亡特有的细胞核改变DNA梯状条带,早期凋亡的细胞数增加,伴有bcl-2的下调,bax上调。这表明强力霉素可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡,其诱导凋亡的作用可能与其调节bcl-2/bax的表达有关。     

候选药物TW918对K-Ras突变型人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用

探讨候选药物TW918对K-Ras突变型人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用.以MTT法检测TW918对A549细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测A549细胞周期和凋亡的变化;Western blotting 检测相关蛋白的表达.结果表明:候选药物TW918可以以时间和剂量依赖性地抑制A549细胞的增殖,且作用72 h时抑制效果比吉非替尼高9.93倍;引起细胞周期阻滞于G1期,并诱导细胞发生凋亡;降低A549细胞中p-EGFR的表达,并抑制其下游PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活.TW918对K-Ra     

磁化水对A549肺癌细胞生长的影响

为了考察水经磁场作用后分子结构的改变及其生物功能，将三蒸水在不同磁场强度下进行磁化，通过电导率的变化来表征水分子结构的改变，并分析了其作用机理．然后将磁化水应用于A549肺癌细胞的体外培养，观察A549肺癌细胞的生长情况，用MTT比色法绘制细胞生长曲线。实验表明，磁场改变了三蒸水的活性，使得磁化水培养的细胞数量明显增加．证明磁场作用可改变水分子簇中的分子个数，从而使水在生物体中的作用发生变化。     

Phospholipid flippase associates with cisplatin resistance in plasma membrane of lung adenocarcinoma A549 cells

The fusion of the liposomes containing N-(7-nitro-2, 1, 3-benzoxadiazol-4-yl)-i ,2-hexadecanoylSn-glycero-3-1abeled phosphatidylethanolamine (NBD-PE) with A549 and A549/DDP cells was performed, and the activity of the phospholipid flippase in the plasma membrane of the cells was measured by fluorescence intensity change of NBDPE in the outer membrane. When A549 or A549/DDP cells containing N BD-PE were incubated at 37 C for 0, 30, 60 and 90 min, the fluorescence intensities in the outer membrane of the cells were 0%, 1.4%, 2.9% and 7.8% for A59cells, and 0%, 10.5 %, 15. 5 % and 18.3 % for A549/DDP cells respectively, demonstrating that the phospholipid flippase was distributed in the plasma membrane of As49 cells, but its activity in the drug-resistant A549/DDP cells was much higher than that in the A549 cells. When the A549/DDP cells were incubated with a multidrug resistance reverse agent, verapamil, for 60 min at 37C, the results showed that the NBD-PE in outer membrane decreased by 25.0% compared with the control's. Furthermore, when A549/DDP cells were incubated with 25 μmol/L cisplatin, which is a specific anticancer drug, the flippase activity decreased by 31.6%, and it further decreased with the increase of cisplatin concentration, suggesting that phospholipid flippase in the membrane might be related to the cisplatin-resistance of human lung adenocarcinoma cancer cells.     

人胚肺二倍体细胞株KMB17在培养过程中的自然凋亡

用延长培养周期方法诱导人二倍体胚肺细胞株ＫＭＢ１７自然凋亡,经光学显微镜、荧光显微镜、细胞流式仪、电子显微镜,证明ＫＭＢ１７细胞出现典型的凋亡特征：细胞圆缩、细胞核浓缩破裂、核染色质凝缩后分布于核膜边缘呈新月状和典型的凋亡峰．研究表明人胚肺二倍体细胞（ＫＭＢ１７）在培养过程中易出现自然凋亡．提示可望通过提高细胞对环境压力的耐受能力,预防或延缓细胞培养过程中的自然凋亡,提高操作单元细胞产品的生产效率．     

牡蛎低分子活性物质对人肺腺癌A549细胞的生物学效应

以新鲜牡蛎为材料，经特酸抽提和分子筛凝胶层析，获得牡蛎低分子活性物质，SDS－PAGE凝胶电泳分析鉴定为该组分为主要由8种蛋白组成，应用该物质处理人肺腺癌A549细胞，实验结果显示，经0．1mg/mL牡蛎低分子活性物质处理的人肺腺癌A549细胞，细胞生长抑制率达62．2％，细胞分裂指数下降28．95％。光镜观察显示经牡蛎低分子活性物质 处理的细胞形态发生明显改变。结果表明，牡蛎低分子活性物质能有效的抑制肺癌细胞的增殖。