Vero细胞培养过程中球转球接种工艺的可行性研究II.静态球转球过程

研究了静态球转球接种Ｖｅｒｏ 细胞培养过程中的细胞生长特性,提出了细胞球转球的机理,通过与消化接种的比较,证明在静态球转球接种的细胞培养过程中,细胞在新球与老球表面的生长和细胞的生理状态很不平衡,因而认为不适合于大规模细胞培养过程,并对消化接种在大规模操作中的可行性进行了讨论     

细胞培养用琼脂微球的制备与初步应用

用4%的琼脂溶液作为水相,环己烷为油相,司盘-80为乳化剂,采用乳化分散法制备了琼脂微球,再通过化学交联法固化.用DEAE-HCl修饰了微球表面的电荷密度,并通过正交试验优化了改性工艺,最终制得细胞培养用琼脂微球.通过对比研究了Cytodex1微载体与琼脂微球的表征及细胞培养效果.结果显示,最优改性工艺为:加入微球2倍体积4.5 mol/L的Na OH溶液,再加入微球2倍体积2.5 mol/L的DEAE-HCl溶液,在搅拌状态下加热至60℃,密闭反应4 h.最终制得琼脂微球表面电荷密度为4.00 mmol/100 g,与Cytodex1微载体的4.05 mmol/100g几乎相当.静置培养时,四种细胞在两种微球上的贴壁率和伸展性各有优劣.悬浮培养BHK-21细胞时,Cytodex1微载体表面出现一定程度的"空球"现象,而琼脂微球表面细胞较均匀地伸展.培养至120 h时,两种微球表面的细胞均达到4.5×107cells.继续培养,Cytodex1表面的细胞数开始下降,而琼脂微球表面仍增殖至168 h时才开始下降.综上所述,自制琼脂微球具备作为细胞培养用材料的条件.     

Vero细胞的微载体培养——放大过程中的接种工艺

概述了用微载体系统培养贴壁细胞放大过程中的接种方法,研究了球转球的工艺条件,并建立了球转球的动力学模型。用此方法成功地在国产５０Ｌ生物反应器中培养Ｖｅｒｏ细胞,细胞密度达１．１×１０＾７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ。     

陶瓷球成球过程的建模与仿真

为反映陶瓷球实际成球过程,提出了一种成球轨迹和材料去除相结合的成球过程仿真方法.基于球体几何运动学分析,仿真出同心圆V形槽概率成球法中球面加工轨迹的分布.基于赫兹接触和普雷斯顿方程,建立了球-盘接触力学模型,得出了接触点材料去除量的表达式,然后结合球面划分,计算出球形误差值.对同心圆V形槽概率成球过程分别进行了仿真和实验,实验结果与仿真结果的变化趋势一致,且实验值与仿真值的最大误差为16.7%,验证了该仿真方法的有效性.     

球孢白僵菌对棉铃虫细胞防御反应的影响

研究了球孢白僵菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａｂａｓｓｉａｎａ）对棉铃虫（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓｚｅａ）细胞防御反应的作用发现五龄棉铃虫幼虫对球孢白僵有强烈的细胞防御能力，表明为吞噬作用和细胞集结作用，但伴随基结球孢白僵菌的细胞防御反应过程，棉铃虫的全血细胞，粒血细胞和浆血细胞的数量均下降，有吞噬能力的血细胞数量和比例也急剧减少，而球孢白僵菌却具有克服棉铃虫细胞吞噬和细胞集结的能力，能在虫体血腔中萌发和生长繁殖     

球孢白僵菌几丁质酶的定位研究

采用酶解球孢白僵菌菌丝细胞壁以获得原生质体,用超声破碎器破碎细胞,并用差速离心等方法,对此丝状病原真菌细胞中几丁质酶的定位进行了研究.采用球孢白僵菌 Eu-120株,分别用几丁质酶、蜗牛酶和纤维素酶,以不同比例混合进行脱壁处理.通过测定培养物上清液及原生质体溶解物的几丁质酶活性,发现此培养物上清液中的酶活性占其总酶活性的81.46%,而原生质体溶解物中酶活性极少.研究表明,球孢白僵菌几丁质酶主要存在于细胞的周质空间,并在菌生长过程中通过细胞壁分泌至细胞外.     

表面形貌各异的明胶微球制备及其对细胞增殖的影响

用改良的乳化冷凝法制备了大粒径明胶微球,微球平均直径约250μm.用三种不同的方法对制备的明胶微球进行后处理,得到表面形貌不同的明胶微球.用形貌各异的明胶微球作为微裁体培养成纤维细胞,结果表明细胞粘附率不同.成纤维细胞在明胶微栽体上生长情况良好,有明显的增殖现象.其中,经冷冻干燥处理得到的明胶微球具有孔道结构,适合成纤维细胞的黏附和生长,作为细胞微裁体使用效果良好.     

神经球内神经干/祖细胞活性与代谢研究

为定量研究静态无血清悬浮培养的神经球内神经干/祖细胞的活性及代谢情况,取孕14 d的小鼠胚胎,从海马脑组织分离出神经干/祖细胞,培养过程中跟踪测定神经球直径的分布变化,利用CCK-8法测定活细胞数,同时对培养上清进行葡萄糖、乳酸、谷氨酰胺和氨的定量测定,并对相关细胞代谢动力学参数进行计算和分析.结果表明在培养过程中,神经球内细胞活性及细胞代谢均随着球直径的增加而减弱.在神经球平均直径为100 μm左右,培养基中葡萄糖、谷氨酰胺浓度分别为36.38 mmol/L和1.33 mmol/L时,球心细胞生长开始受到抑制;而当神经球直径主体分布于100～150 μm,培养基中葡萄糖浓度为31.11 mmol/L、谷氨酰胺浓度为1.15 mmol/L时,神经球内部细胞死亡数开始大于增殖数,同时细胞代谢降低到很低水平.表明随着神经球直径的增加而造成的传质困难对于其内部细胞的活性和代谢有重要影响.     

葡聚糖微球在生物医药领域中的应用

葡聚糖微球自开发以来,已广泛地应用于组织工程、细胞培养、蛋白分离纯化等方面.其既可以作为药物的控释载体,又可以作为种子细胞扩增培养的载体.目前,在生物制药领域下游分离纯化技术越来越受到关注的背景下,作为柱层析凝胶和分离层析介质的葡聚糖微球也越来越受到科学家的青睐.文章对葡聚糖微球自研究以来的重大历史性突破及当代科学前沿的应用成果加以总结和介绍,着重介绍了葡聚糖微球在医药、疫苗开发、凝胶层析三个方面的应用现状.     

罗伦隐球酵母对柑橘采后酸腐病的抑制效果

研究了从梨果表面筛选分离到的罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)菌株对贮藏柑橘酸腐病菌(Geotrichum citri-aurantii)的抑制作用.实验结果表明:在25℃,病原菌接种量一致的条件下,罗伦隐球酵母的生物防治效果与其接种浓度和其与病原菌接种间隔时间有关.当接种病原菌的量为1×106mL-1时,1×106mL-1拮抗酵母能有效地抑制酸腐病害的发生,拮抗酵母的接种浓度越高,其抑制效果越显著;罗伦隐球酵母同时或先于病原菌接种,可显著抑制酸腐病害的发生.柑橘果实接种罗伦隐球酵母24 h后,多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)活性升高,整个实验过程中均高于对照.采用不同的处理液处理柑橘果实,发现罗伦隐球酵母悬浮液和培养原液对酸腐病菌有较好的抑制效果,培养滤液和热杀死液也有抑制效果.研究结果表明罗伦隐球酵母菌株对柑橘酸腐病害有很好的防治潜力,其抑制机理可能与营养和空间竞争及分泌抗菌物质有关.     

微量元素对球等鞭金藻生长的影响

利用分批培养实验研究了锰、铜、锌、钼、钴5种微量元素对球等鞭金藻生长的影响.通过单因子实验确定了锰、铜、锌、钼、钴对球等鞭金藻生长的必需性和促进其生长的有益浓度范围,然后通过正交实验确定了锰、铜、锌、钼、钴促进球等鞭金藻生长的最佳浓度,依次为:0.08,0.07,0.0007,0.003,0.1 mmol.m-3.与常用M f/2配方比较,本研究中Cu浓度基本相同;Mn、Mo浓度比f/2配方低1个数量级;Zn浓度低约2个数量级;Co浓度高1个数量级.将它们用于球等鞭金藻的培养,可使细胞密度比f/2配方提高14.3%.     

共析钢温变形过程的组织球化与超细化

利用热模拟压缩变形、SEM和热磁法实验,研究了共析钢在600~700℃变形过程的组织演变规律,探讨了变形及随后保温过程对珠光体球化、组织超细化和渗碳体溶解、再析出的影响.实验表明:共析钢温变形过程中发生珠光体片层溶断,渗碳体逐渐球化,以及伴随铁素体动态回复再结晶的同时细小弥散渗碳体颗粒在基体析出的过程.提高温度有利于上述复合过程的进行.形变组织经过保温后,亚微米级别的等轴铁素体晶粒和渗碳体颗粒弥散分布的复相组织的均匀性程度有所提高.温变形过程中渗碳体溶解和在铁素体内再析出的事实得到证实.     

接种密度对Vero细胞在微载体表面生长的影响

研究了接种密度对Ｖｅｒｏ细胞在微载体表面生长行为的影响,发现培养过程中所获得的细胞最高密度随接种密度的增加而有所提高,当细胞的表面接种密度高于１．０×１０＾５ｃｅｌｌｓ／ｍｇＭＣ时,因贴壁后细胞扩展受到限制而不利于进入对数生长期。就整个Ｖｅｒｏ细胞培养过程,适宜的表面接种密度为３×１０＾－４－７×１０＾４ｃｅｌｌｓ／ｍｇＭＣ,此时可以获得较高的比生长速率和细胞增殖倍数。     

青霉素发酵过程菌丝成球的工程特性研究

研究了产黄青霉菌(P.chrysogenum)876菌株发酵过程中菌丝成球现象。菌丝成球后,由于在菌球内外形成一个氧浓度分布梯度,菌丝临界氧由25%提高至40%,从而对反应器供氧提出了更高的要求。一旦反应器供氧不足,菌体碳、氮源代谢能力减弱,不利于青霉素合成。这种代谢与工程因素的交互影响,为发酵过程优化控制提出了一个值得探讨的,既有理论学术价值又有实际意义的研究课题。     

微囊化转CEA基因细胞诱导小鼠抗肿瘤免疫的研究

为发展癌胚抗原(CEA)阳性肿瘤的治疗性疫苗,应用基因工程和静电液滴技术制备出微囊化转CEA基因细胞,经腹腔免疫实验小鼠,再分别应用CEA基因转染的H 2 2 细胞小鼠皮下及腹腔接种,观察微囊化转CEA基因细胞对小鼠肿瘤的抑制作用及其诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤CEA 阳性肿瘤细胞的能力,并用流式细胞术检测了小鼠肿瘤细胞的生长周期和各实验组脾脏T淋巴细胞亚群的分布情况. 结果显示,微囊化转CEA 基因细胞可以有效抑制CEA阳性肿瘤的生长,诱导小鼠CTL对CEA阳性肿瘤细胞的特异性杀伤 ,并能改善荷瘤小鼠的免疫功能,延长腹水瘤小鼠的生存期.     

球料比对机械合金化合成MoSi_2过程的影响

以5∶1、10∶1、20∶1、30∶1四种不同球科比采用机械合金化方法合成了MoSi_2粉末，通过X射线衍射仪和SEM研究并讨论了球料比对MoSi_2机械合金化过程的影响，指出装球量略小于球罐容积的2/3为宜。     

某海上油田清管球收球筒工艺流程优化改造

在分析海底管道清管球接收器结构原理的基础上,结合现场设备拆除和检查情况分析了某海上油田注水海管通球作业过程中清管球在收球筒出液口堵塞的根本原因。现场工作人员根据查明的原因提出了优化收球筒出液口拦球格栅的设想,设计并实施了清管球收球筒工艺流程改造方案,解决了收球筒出液口卡球的问题,确保了通球作业期间海管的稳定运行,从根本上保证了海底管道输运流体的安全。该实践方案具有通用性特点,可供类似工程项目借鉴。     

选区激光熔化成型过程的球化现象研究

为获得高致密及高精度金属零件,弱化甚至消除选区激光熔化快速成型过程的球化现象十分必要。本文从理论上分析金属熔池球化演变机制以及弱化球化的方法,发现熔池的气液界面有使熔池发生球化的倾向;如对上一层基础有一定的重熔量,则熔池分为熔化粉末所形成的上部熔池以及熔化基础形成的下部熔池,下部熔池不会发生球化,且对上部熔池的球化趋势起阻碍作用;上部熔池的液固界面为熔液因重力下坠与基板界面形成的液固界面,视熔液与基板的润湿性的好或坏,对熔池球化具有促进或阻碍作用。因此,保证对上一层具有足够的重熔量可有效弱化球化现象。采用铜基合金粉末进行的单道熔池成型以及多层块状金属实体成型实验也验证了上述分析。     

滚动球铰链的研究

为了消除现有球铰链过大的滑动摩擦力对设备的有害影响 ,设计了一种滚动球铰链结构 .利用多个小万向轮组合在一起 ,代替滑动球铰的球窝以提供对球头的支撑和约束 ,使球铰链的球头在转动过程中没有滑动 .另外 ,还对滚动球铰链的误差进行了分析     

SeMet/ CS纳米复合微球的制备、缓释性能及抑制肿瘤活性

研究SeMet硒化物的可控缓释系统.以CS为壁材、SeMet为药物模型,采用乳化交联法制备SeMet/CS纳米复合微球,以单因素实验和正交试验优化制备工艺,结合原子荧光光谱、IR、热重分析及SEM对产物的形貌、结构及性能进行评价和表征,并对其体外缓释和抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞生长等性能进行研究.结果表明:最优工艺条件(0.1%的投药量、2%的交联剂用量、50℃交联10min)制备的SeMet/CS微球,形貌优良,包封率和载药量分别为31.94%和0.54%,体外缓释硒的性能良好,对MCF-7细胞的生长抑制率随微球缓释时间增加而增加.SeMet/CS缓释硒复合微球有效避免了硒的突释效应,实现了硒剂量的把控,可作为硒化药物或硒补充剂应用于医疗、食品和精细化工等相关行业.