甘蓝型油菜快速再生的研究

本文研究了器官、培养基、温度、硝酸银和植物激素等因素对甘蓝型油菜器官分化的影响，摸索出油菜再生的理想条件，并且从油菜苗期真叶、子叶、下胚轴、根和带子叶叶柄成功地再生出油菜植株。     

甘蓝型油菜BnBRI1基因的克隆及表达分析

以拟南芥油菜素内酯受体BRI1基因序列设计同源简并引物,利用同源克隆技术,克隆了甘蓝型油菜中编码油菜素内酯受体基因全长cDNA序列,命名为BnBRI1(GenBank:JX871217),该基因开放阅读框(ORF)大小为3591bp,与拟南芥中BRI1基因(GenBank:NM_120100)相似性为94.21%,编码1196个氨基酸,与拟南芥中BRI编码的氨基酸相似性为89.23%.采用实时定量PCR分析表明,BnBRI1基因在根、茎、叶中都有表达,但表达量存在显著差异.在两叶一心期和花期的根中表达量最高,四叶一心期和抽薹期的叶中表达量最高.     

蓖麻子叶外植体离体再生研究

利用蓖麻子叶作为外植体,建立了一种有效的离体再生体系.从成熟蓖麻种子中剥离的子叶接种在MS基本培养基并添加1.5mg/L 6-BA或10.0mg/L ZT中诱导不定芽的再生的频率最高,分别为64.4%和60.0%.健壮的不定芽在MS+1.5mg/L IBA的培养基中根分化率最高,达46.7%.     

一个与油菜黄化相关的未知功能基因克隆及表达

以构建的油菜幼叶黄化突变体Cr3529消减文库中一个未知功能的差异表达基因片段为基础,应用RACE-PCR技术,扩增并克隆到两个cDNA全序列,分别命名为BnCr4和Bn-Cr4-1.测序结果显示,BnCr4编码区序列大小为1395 bp,编码465个氨基酸,而BnCr4-1编码区序列长1311 bp,编码437个氨基酸.BLAST结果表明它们与拟南芥中的一个未知功能基因的cDNA同源性分别为87%和80%.功能预测显示它们含有与蛋白质的修饰作用有关的多个活性位点,如磷酸化、糖基化、酰胺化以及磷酸泛酰巯基乙胺结合位点,可能是一种新的与cAMP介导的蛋白质磷酸化与去磷酸化作用有关的蛋白.Northen杂交结果显示该基因在Cr3529子叶期和幼叶期的表达高于野生型油菜,显示该基因的表达与突变性状紧密相关.最后,原核表达了BnCr4,得到了与预计分子量相同的融合蛋白.     

甘蓝型油菜BnDHAR基因的克隆及表达分析

在甘蓝型油菜矮化突变体与其高秆亲本构建的消减杂交文库中,得到一长约230bp与编码脱氢抗坏血酸还原酶的DHAR基因核苷酸序列相似的DNA片段.采用同源克隆技术,在甘蓝型油菜中获得该基因的全长cDNA序列,命名为BnDHAR.BnDHAR与已公布的甘蓝型油菜基因组中的该基因核苷酸序列完全一致.对BnDHAR基因不同发育时期组织的表达分析的结果显示,BnDHAR基因在高秆油菜苗期的叶中表达量最高,是矮化突变体的5倍,在根、茎中表达极低,具有组织特异性.非生物胁迫显著影响BnDHAR表达,高温胁迫使其表达升高,盐胁迫处理9h时达最高,而干旱胁迫时表达量在处理12h时才达最高.     

辣椒子叶和下胚轴离体培养再生

8个辣椒品种的子叶和下胚轴接种在附加不同激素的MS培养基上，经过芽诱导、芽伸长、生根、移栽入盆四个阶段，得到完整的再生植株。实验结果显示：6—8d的苗龄最佳，子叶的分化率高于下胚轴，培养基中添加AgNO3明显促进外植体的分化，GA3是芽伸长的关键因子，IBA的生根效果要好于无激素MS培养基．通过这一过程，建立起一个基于最佳激素组合的高效植株再生体系．     

外源基因在转基因油菜后代中的表达及遗传学分析

以转基因油菜后代（Ｒ１和Ｒ２代）株系为材料，系统地研究了苏云金杆菌杀虫蛋白基因ＣｒｙⅠＡ和选择标记基因ｎｐｔⅡ导入油菜后的遗传规律，表达强度和抗虫效应。结果表明：Ｒ１代卡那霉素抗性为３：１分离方式，在Ｒ２代卡那霉素抗性植株中，有三分之一为ｎｐｔⅡ基因纯合型（Ｔ：Ｔ）另三分二为复合型（Ｔ：Ｏ），其遗传方式符合孟德尔单因子显性遗传；转化植株可耐受１５０ｍｇ／Ｌ那卡霉素的选择压力，约一半的转化植株具有杀     

黄瓜子叶节离体再生体系的建立

以MS为基本培养基,以黄瓜子叶节为外植体,设置了不同激素浓度,直接诱导出不定芽,建立了黄瓜的离体再生体系.结果表明,最佳芽诱导培养基为MS+BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L+ABA 1.0 mg/L+AgNO3 2.0 mg/L,平均每外植体可诱导出2.9个芽;最佳芽伸长培养基为MS+KT 0.5 mg/L;1/2 MS最适于黄瓜的生根.     

Al3+对油菜幼苗生长影响的研究

研究了不同的基本培养基和不同的Al3+ 浓度对油菜幼苗根的长度和全株重量的影响 .不同的Al3 + 浓度对根的绝对长度影响极显著 ,对根的相对长度、幼苗全株绝对重量和相对重量影响不显著 ;在AlCl3溶液中添加CaCl2 对根的相对长度影响极为显著 ,对根的绝对长度、全株绝对重量和相对重量影响不显著 ;在AlCl3 溶液中添加 1 2MS大量元素和微量元素对根的绝对长度、相对长度、全株绝对重量和相对重量影响极为显著 ;不同的基本培养基和不同的Al3+ 浓度间的交互作用不显著 .     

甘蓝型油菜独脚金内酯相关基因的克隆与表达分析

独脚金内酯(strigolactones,SLs)是一类新鉴定的植物激素,参与抑制茎分枝.采用同源克隆技术自甘蓝型油菜中得到了三个SLs相关基因,分别命名为BnMAX4,BnMAX1和BnD14,其CDS各长1707,1593,804bp,推测编码的蛋白质功能分别为β-类胡萝卜素加氧酶,细胞色素P450,α/β水解酶.RT-qPCR表达分析显示在野生型甘蓝型油菜二叶及四叶一心期的各组织器官中,BnMAX4主要在二叶一心期的根中表达;BnMAX1无明显表达优势组织;BnD14在二叶一心期的叶中高表达.旱胁迫及盐胁迫处理时BnMAX4的表达趋势为骤降;BnMAX1旱胁迫处理时表达量降低,盐胁迫处理时先下降后上升,9h后又下降;BnD14旱胁迫处理时在3h与12h各有两个表达高点,盐胁迫处理时在3h表达量最高.     

锰胁迫对甘蓝型油菜Brassica napus L.种子活力和幼苗抗氧化系统的影响

用不同质量分数的锰溶液(0.2%,0.4%,0.8%和1.2%Mn2+)处理甘蓝型胜利油菜Brassica napuscv.Shengli,研究锰对其种子活力、幼苗细胞膜透性、脂质过氧化及抗氧化剂的影响.结果表明:锰胁迫降低了种子活力、幼苗抗坏血酸(Vc)质量分数、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性,破坏了细胞膜的完整性,并使丙二醛(MDA)质量分数、脯氨酸(Pro)质量分数和过氧化物酶(POD)活性增加.     

甘蓝型油菜矮化突变体的茎秆发育转录组分析

甘蓝型油菜矮化突变体"NDF-1"是从高秆油菜"3529"理化诱变群体中分离的矮化突变体,它的株高只有高秆亲本的1/3,是一个优良的甘蓝型油菜矮化资源.本文应用RNA-Seq测序技术分析了"NDF-1"茎开始伸长的抽薹期和花期转录组,为深入了解油菜茎秆发育机理提供基因组层面的参考.抽薹期和花期的测序数据通过筛选得到了4.55亿条质量合格的clean reads.经过对高质量序列的组装注释,筛选得到"NDF-1"和"3529"间的2147条差异表达基因(DEGs).选择其中的20个差异表达基因进行了荧光定量PCR验证.通过GO和KEGG分析,发现"NDF-1"的矮化与赤霉素、生长素和油菜素内酯相关,细胞伸长异常和细胞壁的不正常形成也影响"NDF-1"的茎秆发育.从差异基因中筛选出与植物矮化性状相关的基因,为利用矮化基因改善性状和矮化机理的研究和提供了更多信息.     

激素对甘蓝型油菜(Brassica napus L)矮化突变体幼苗生长及内源GA3含量的影响

以甘蓝型油菜矮化突变体“DDF-1”为材料,研究了赤霉素（GA3）、生长素（IAA）和油菜素内酯（BR）3种激素对突变体幼苗的影响,并用石蜡切片观察其细胞形态,用酶联免疫吸附技术(ELISA) 检测下胚轴内源激素GA3含量.结果表明,外加一定浓度的GA3（7 mg/L）对矮化突变体“DDF-1”的下胚轴伸长作用显著,但不能使之恢复到野生型的长度;萌发早期,BR有明显的促进伸长作用,萌发后期效果不明显;突变体对IAA敏感性较弱.三种激素交互作用对矮秆下胚轴伸长的影响也不显著.施加外源GA3的矮化突变体“DD     

表达雪花莲外源凝集素基因的油菜转基因植株的获得

利用农杆菌素LBA4404（pCAMBIA3300RG)转化优良甘蓝型油菜恢复系W723的下胚轴节段.pCAM-BIA3300RG含有Rssl启动子引导的雪花莲外源凝集素基因（gna）和CaMV-35S启动子引导的除草剂抗性基因（bar）。经过两轮除草剂（2.5mg/L bialaphos）筛选（两周/轮）,除草剂抗性再生芽被传入生根培养基中生根,对根系旺盛生长的植株中所含gna基因进行PCR分析,PCR分析证实了这些植株确为转基因植株,利用Western印迹法对随机选择的5株含gna基因的转基因植株的分析发现,其中4株表达了gna基因。目前正对这些表达gna基因的转基因植株进行后代遗传分离分析。     

甘蓝型油菜（Brassica napus L.）叶片形态的非孟德尔式遗传研究

本文研究表明，甘蓝型油菜（B.napusL.)叶片形态偏离正常的孟德尔式遗传，正反交F2与回交B2世代之间性状分离结果呈现出显著差异，而且这种分离差异在高世代衍生家系间以及不同交配系统中和不同年度间表面一致。作者提出了“质核互作对异源基因配子的优先选择”假说以解释这种异常遗传行为。文中还详细讨论了其他一些假说的不适合性，以及前人在叶形遗传研究中可能存在的局限性。     

甜瓜种苗克隆

以古拉巴、蜜翠、伊丽莎白,西莫洛托４个引进杂交种甜瓜和七宝甜瓜,小麦瓜,青皮绿肉、亭林雪瓜本地品种为材料,用其子叶为外植体进行培养,获得无性繁殖系,结果表明,杂交种的芽诱导率高于本地品种;在１４种激素配比组合中ＭＳ＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌ培养基丛生芽诱导率最高,达７２％－７６％;ＭＳ＋６－ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌ培养基最利于芽伸长;生根培养基为ＭＳ＋ＩＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋ｎａａ０．５ｍｇ／Ｌ,平均每粒种子可获得的８棵再生植株。     

甘蓝型杂交油菜"蜀杂9号"种子纯度的RAPD鉴定

通过50个随机引物对“蜀杂9号”亲本进行RAPD扩增,选出了两个能在父、母本间产生多态性扩增的随机引物S18和S31,在杂种F,代中验证了它们的特异性和稳定性,证明随机引物S18和S31能分别在F1代中稳定扩增出父本和母本的特异标记片段S18750与S31550．对该引物的RAPD-PCR的反应体系优化后,对“蜀杂9号”父、母本和杂种F1代的单株进行了随机检测,结果表明这两个RAPD标记配合使用能稳定可靠地鉴定甘蓝型杂交油菜“蜀杂9号”种子的纯度．     

甘蓝型油菜FAE1基因启动子的克隆和瞬时表达载体的构建及功能分析

油菜脂肪酸延长酶基因FAE1是广泛存在于植物中并定位于内质网上的一种能催化脂肪酸碳链延长的酮脂酰CoA合成酶,根据GenBank上已知的植物FAE1基因启动子序列设计引物,以从甘蓝型油菜(Braccica napus.L)叶片中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增,获得了1 328 bp的片段.回收该片段,并连接到pMD18-T载体测序.序列在NCBI进行blast比对,同源性为99.78%,说明该片段与植物中已知的FAE1基因的启动子序列有极高的相似性.将该片段替换掉改造后的pBI221上面的35S启动子从而构建了原生质体瞬时表达载体.然后通过PEG介导的方式将含有FAE1启动子驱动的荧光素酶报告基因(LUC)表达载体导入油菜原生质体中,研究报告基因表达量,证明出脱落酸(ABA)影响了报告基因的表达,随着ABA浓度的不断增加,LUC的表达量呈现逐步下降的趋势.