Pfu酶基因的克隆、表达、纯化及长距离PCR的研究

用ＰＣＲ方法从Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ的总ＮＤＡ扩增出了含有Ｐｆｕ ＤＮＡ ｐｏｌＡ基因的２．３ｋｂ片段,并将该基因克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体。用ＮｃｏＩ和ＸｈｏＩ对重组质粒ｐＴ－ｐｆｕ进行了酶切。并将ｐｆｕ ｐｏｌＡ基因捶 入表达载体ｐＥＴ－３ｄ－Ｘ。     

两类指数稳定性的等价性

Ｘ为Ｂａｎａｃｈ空间,其范数为‖·‖,Ｔ(ｔ)为Ｘ上Ｃ0半群,其无穷小生成元为Ａ:Ｄ(Ａ)|→Ｘ.Ｔ(ｔ)称为指数稳定,若有Ｍ,σ>0使得‖Ｔ(ｔ)ｘ‖≤Ｍｅ-σｔ‖ｘ‖,ｘ∈Ｘ.(1)Ｔ(ｔ)称为能量指数稳定,若有Ｍ,σ>0使得‖Ｔ(ｔ)ｘ‖Ｄ(Ａ)≤Ｍｅ-σｔ‖ｘ‖Ｄ(Ａ),ｘ∈Ｄ(Ａ),(2)这里‖·‖Ｄ(Ａ)是Ａ的图象范数[1].实际应用提出这样的问题(见文献[2]):这两个概念是否等价?文献[2]证明了当Ｔ(ｔ)是Ｈｉｌｂｅｒｔ空间上压缩Ｃ0半群且Ａ有界可逆时,两类指数稳定性是等价的.本文证明了:定理　若有Ｍ1,σ>0使得‖Ｔ(ｔ)ｘ‖≤Ｍ1ｅ-σｔ‖ｘ‖,ｘ…     

水稻减数分裂相关基因OsDMC1的克隆

酵母ＤＭＣ１基因是一个在减数分裂前期 Ｉ表达的减数分裂特异基因,其产物是减数分裂同源染色体配对所必需的．根据在酵母Ｄｍｃ１与拟南芥ＡｔＤｍｃ１中保守的氨基酸ｍｏｔｉｆｓ合成的简并性引物,以ｃＤＮＡ作模板,通过套式ＰＣＲ（ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）和ＲＡＣＥｓ克隆了水稻中酵母ＤＭＣ１的同源基因 ＯｓＤＭＣ１．ＯｓＤＭＣ１全长的 ｃＤＮＡ是 １３４８ ｂｐ,编码 ３４４个氨基酸组成的多肽（ＯｓＤｍｃ１）． ＯｓＤｍｃ１与 Ｄｍｃ１和ＡｔＤｍｃ１的氨基酸序列一致性分别是５１．８％和８１．７％．ＯｓＤＭＣ１在生殖器官中表达量较高,在根中有少量表达,而在叶和幼芽中不表达． Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果表明水稻基因组中有两个拷贝的 ＯｓＤＭＣ１．     

豌豆热激蛋白Hpc60对酶的高温保护功能及其机理

利用免疫亲和层析方法纯化得到的豌豆胞质热激蛋白６０－Ｈｐｃ６０（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｇ－ｎａｔｅ）,在离体条件下可以防止虫荧光毒酶发生高温聚集,显著地抵制高温对ＬＤＨ和ＡＰＸ的失活作用,Ｈｐｃ６０保护功能的实现不同程度地依赖Ｍｇ＾２＋和ＡＴＰ的存在,ｐＨ值也影响Ｈｐｃ６０的功能。     

Banach空间中线性系统的稳定性

无穷维空间中线性系统的稳定性是许多作者关注的问题.Ｇｉｂｓｏｎ在文献[1]中证明了如下结果:设Ｔ(ｔ)是Ｈｉｌｂｅｒｔ空间Ｘ由Ａ生成的渐近稳定的Ｃ0压缩半群,而Ｂ为Ｘ上紧线性算子.如果Ａ Ｂ生成的Ｃ0半群Ｓ(ｔ)是指数稳定的,则Ｔ(ｔ)必定也是指数稳定的.因此,Ｈｉｌｂｅｔ空间中一个非指数稳定的Ｃ0半群不可能通过紧反馈达到指数稳定.Ｔｒｉｇｇｉａｎｉ在文献[2]中把Ｇｉｂｓｏｎ的结果推广到具有“逼近性质”的Ｂａｎａｃｈ空间Ｘ.本文用非常简单的方法证明了Ｇｉｂｓｏｎ的结果在任何Ｂａｎａｃｈ空间中都成立,并且给出了Ｃ0半群的…     

小鼠胸腺上皮细胞株MTEC1表达的化学趋化因子的类型分析

以自行设计的引物用ＲＴ－ＰＣＲ方法从小鼠胸腺上皮细胞株ＭＴＥＣ１的总ＲＮＡ中扩增出了ＳＤＦ－１α,ＩＰ－同和Ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎ等６种化学趋化因子的ｃＤＮＡ片段,对扩增片段进行了酸测序鉴定,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析结果显示;ＳＤＦ－１ｍＲＮＡ在ＭＴＥＣ１细胞株中存在两种不同的剪切形式,ＭＴＥＣ１的浓缩培养上清对小鼠胸腺ＣＤ＾４－ＣＤ＾８Ｔ细胞具有中等强度的趋化活性,符合ＳＤＦ－１的生物学功能。     

植物病原细菌中活性氧的释放和调节

一些植物病原细菌,包括Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ．ｏｒｙｚａｅ及其毒性基因突变体Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ,Ｅｒｕｎｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｓｕｂｓｐ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ等自身具有产生Ｏ２＾－、Ｈ２Ｏ２等活性氧的功能,且受到Ｃａ＾２＋,氧浓度及ＮＡＤＰＨ的调节,热敏感分析表明,病原菌中产生活性氧的成分可能是特殊的蛋白或酶类,并     

人类肽-甲硫氨酸亚砜还原酶的cDNA克隆、组织表达谱特征及染色体定位

蛋白质结构中某些氨基酸的氧化和还原是生物体内对蛋白功能的一种调控方式．甲硫氨酸（Ｍｅｔ）被氧化则变为甲硫氨酸亚砜（Ｍｅｔ（Ｏ））,它可导致所在蛋白质的生物学活性降低或丧失,但肽－甲硫氨酸亚砚还原酶（Ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ, ｍｓｒＡ）则可使甲硫氨酸亚砜还原为甲硫氨酸,使其所在蛋白质重新恢复活性．为了研究人体中Ｍｅｔ氧化还原的机制,以牛ｍｓｒＡ ｃＤＮＡ序列为信息探针,筛选人ＥＳＴ数据库,依据若干同源ＥＳＴ的信息从人ｃＤＮＡ分子库中克隆到一个长１２５５ｈｐ的人ＭＳＲＡ ｃＤＮＡ．该ＣＤＮＡ包含一个长７０５ ｂｐ的可读框,它编码了 ２３５个氨基酸残基．同源性比较表明,该基因与牛和大肠杆菌的ｍｓｒＡ基因的氨基酸一致性分别为８８％和６１％．表达谱分析发现,该基因在人体大多数组织中均有一条长约１．６ｋｂ的转录本,并在肾中呈高表达．应用辐射杂种细胞株定位系统（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｈｙｂｒｉｄ ｍａｐｐｉｎｇ ｐａｎｅｌ, ＲＨ ｍａｐｐｉｎｇ）将该基因精确定位在人染色体８ｐ２２～２３区带的ＤＳＳ５１８和Ｄ８５５５０位标之间,由于此前已有Ｋｅｒａｔｏｌｙｔｉｃｗｉｎｔｅｒｅｒｙｔｈ     

小麦黄花叶病毒72ku蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清制备

采用逆转录－ＰＣＲ方法,扩增获得小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）ＲＮＡ２上的７２ｋｕ蛋白基因,将其克隆到ｐＥＴ３０ａ（＋）上,构建了该基因的原核表达载体ｐＥＴＰ７２。ＳＤＳ－ＲＡＧＥ分析结果显示,经ＩＰＴＧ诱导,７２ｋｕ蛋白基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中得到高效表达。以含表达产物的凝胶作为抗原,免疫家兔,首次制备了小麦黄花叶病毒ＲＮＡ２７２ｋｕ蛋白特异性抗血清。     

VK3诱导的植物细胞凋亡及其机理

ＶＫ３可诱导烟草细胞的凋亡,表现为：染化体凝集,凋亡小体形成,ＤＮＡ末端断裂、降解形成梯状电泳,此过程伴随特异核酸酶的激活,其活性依赖于Ｃａ＾２＋,Ｍｇ＾２＋,可被Ｚｎ＾２＋和ＥＤＴＡ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ）抑制。ＤＮＡ降解可被ＤＥＶＤ（Ａｃ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－ａｌｄｅｈｙｄｅ）抑制。核纤层蛋白降解为３５ｋｕ片段,ＤＥＶＤ,ＰＭＳＦ（Ｐｈｅｎｙｌｍｅｔ     

维甲酸对人腹主动脉平滑肌细胞增殖的影响

通过免疫组织化学和电子显微镜的方法鉴定了原代培养的人腹主动脉平滑肌细胞且研究全反式维甲酸对其增殖的影响,发现ａｔＲＡ使ＳＭＣ的增殖速度变慢,经ａｔＲＡ处理的细胞中ｃｙｃｌｉｎＤ１,ＣＤＫ４的表达分别降低了３９％和３８％,ｃ－ｍｙｃ基因的表达的平降低了４３．６％,而平滑肌牧场划的ａ－ａｃｔｉｎ的表达不受影响。说明ａｔＲＡ可能通过降低细胞中ｃ－ｍｙｃ,ＣＤＫ４,ｃｙｃｌｉｎＤ１的基因表达水平而抑制ＳＭ     

P15INK4b/MTS2对人肝癌细胞增殖的影响及其机理的初步分析

利用自行构建的稳定高表达Ｐ１５ＩＮＫ４Ｂ的人肝癌细胞,研究了抑癌基因Ｐ１５在细胞增殖中的作用．首先将抑癌基因 Ｐ１５的 ｃＤＮＡ构建到高效真核表达的质粒载体 ｐＸＪ４１－ｎｅｏ中的 ＥｃｏＲＩ／ＸｈｏＩ位点,构建成 Ｐ１５真核表达质粒 ｐＸＪＰ１５．通过脂质体法将 ｐＸＪＰ１５质粒转染人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１,进一步用 Ｇ－４１８筛选,获得了稳定高表达Ｐ１５的人肝癌细胞模型ＳＨＴ及相应的表达空载体的对照细胞模型ＳＶＸＪ．通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ,Ｗｅｓｔｅｒｎ分子杂交分析,表明ＳＨＴ细胞中Ｐ１５基因表达和蛋白水平都明显高于对照组细胞,证实成功地建立了Ｐ１５高表达的人肝癌细胞模型,与对照组相比,Ｐ１５高表达的ＳＨＴ１细胞的增殖受到抑制,流式细胞光度术和ＭＩ值测定表明Ｐ１５阻抑细胞由Ｇ１期向Ｓ期和由Ｇ２期向Ｍ期的转换．Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹分析结果表明,癌基因ｃ－ｍｙｃ,ｃ－ｆｏｓ的蛋白水平表达下降可能是Ｐ１５抑制细胞增殖的分子机理之一。     

多倍体山羊草物种中高分子量麦谷蛋白亚基的组成与其编码基？…

山羊草属（Ａｅｇｉｌｏｐｓ）是小麦属（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ）的近缘属之一，山羊草属物种的种子中含有与普通小麦高分子量麦谷蛋白亚基（ＨＭＷ ｇｌｕｔｅｎｉｎ ｓｕｂｕｎｉｔ）结构相似的贮藏蛋白，通称为山羊草高分子量麦谷蛋白亚基。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了４种多倍体山羊草物种所含高分子量麦谷蛋白亚基的组成，之后又通过比较各种ＰＣＲ扩增方法，以偏凸山羊草（Ａｅ。ｖｅｎｔｒｉｃｏｓａ）为材料建立了从多倍体山羊     

具有AAV载体包装功能的重组HSV的产生

腺病毒伴随病毒（ＡＡＶ）载体有望成为理想的基因治疗载体,常规的共转染法难以大规模制备重组ＡＡＶ（ｒＡＡＶ）,本研究生产了一种具有ｒＡＡＶ包装功能的重组单纯疱疹病毒（ｒＨＳＶ）,为ｒＡＡＶ的大规模制备提供了新的思路。采用一套含有１型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）全基因组的粘粒系统（Ｄａｖｉｓｏｎ ＡＪ ｅｔ ａｌ,１９９３）,该系统含有５个粘粒,依次称为ｃｏｓ４８,ｃｏｓ２８,ｃｏｓ６,ｃｏｓ１４和ｃｓ     

MoO3/α-Fe2O3体系表面相互作用的研究

通过机械混全焙烧法制备了ＭｏＯ３／α－Ｆｅ２Ｏ３样品,采用了ＸＲＤ,ＸＰＳ,ＬＲＳ,ＴＧ－ＤＴＡ以及Ｍｏｅｓｓｂａｅｒ谱研究了ＭｏＯ３与α－Ｆｅ２Ｏ３之间的相互作用,ＸＲＤ和ＸＰＳ证实,在适当的温度下焙烧的样品,ＭｏＯ３在α－Ｆｅ２Ｏ３表面上的分散容量为０．８ｍｍｏｌＭｏＯ３／１００ｍ＾２α－Ｆｅ２Ｏ３,ＬＲＳ和ＦＴ－ＩＲ结果表明,在低含量的样品中,Ｍｏ＾６＋主要讲入α－Ｆｅ２Ｏ３的表面四面体位;     

一种新的小鼠被毛突变基因定位

分别尝试用ＲＡＰＤ（随机扩增多态ＤＮＡ）法和重组率测定法对所发现的被毛突变进行基因定位。结果为所选用的１００个１０ｂｐＲＡＰＤ引物中,８７个获得了扩增产物,由于所获得的产物与小鼠表现间缺乏相关性,利用ＲＡＰＤ法未能交闰到染色体上。以分布于小鼠１１条染色休下的Ｉｄｈ１,Ｃａｒ２,Ｍｕｐ１,Ｐｇｍ１,Ｈｂｂ,Ｅｓ１０,Ｅｓ１,Ｍｏｄ１,Ｇｄｃ１,Ｃｅ２,Ｅｓ３等生化基因位点为遗传标记,对分别对与ＣＡＢ     

评《微分方程分支理论》

由韩茂安、朱德明两位博士撰写的《微分方程分支理论》是一部优秀的学术著作．从基础理论研究的角度看,微分动力系统的一个重要方向是刻画结构稳定性．平面动力系统结构稳定性的概念最早由Ａ．Ａ．ＡＨｐｏＨＯＢ和．Ｃ．Ⅱ ＯＨＴＰＨ在１９３７年提出,并在解析系统的情况下给出结构稳定的必要充分条件,５０年代Ｈ．ＤｅＢａｇｇｉｓ减弱了条件并完成证明,１９６２年Ｍ．Ｍ．Ｐｅｉｘｏｔｏ又将其推广到二维流形上去． 设Ｘ,Ｚ是拓扑空间,开集ＵＸ,是某一参数空间内的一个开集,而ｆ：Ｕｘ→是一个给定的连续函数,令Ｓ＝｛（Ｘ,）…     

异三聚体G蛋白在细胞外钙调素调控rbcS基因表达中的作用

以转基因烟草悬浮培养细胞为材料,对异三聚体Ｇ蛋白在胞外钙调素（ＣａＭ）促进ｒｂｃＳ基因表达跨膜信号转导中的作用进行了研究．细菌毒素实验表明,Ｇ蛋白激活剂ＣＴＸ可以促进转基因烟草ｒｂｃＳ基因表达,而其抑制剂ＰＴＸ则抑制ｒｂｃＳ基因表达;同时证实ＣＴＸ可以恢复被ＣａＭ抗血清抑制的ｒｂｃＳ基因表达,而ＰＴＸ可以抑制外源ＣａＭ促进的ｒｂｃＳ基因表达,通过提纯包埋有ＧＴＰａｓｅ活性测定荧光底物的正向型质膜囊     

龙虾D-甘油醛-3-磷酸脱氢酶与辅酶类似物结合的晶体学

与辅酶不同,辅酶类似物ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｅ和ＳＮＡＤ与Ｄ－甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）的结合不表现协同性．用共晶方法和座滴汽相扩散技术培养出中国南海龙虾（Ｐａｌｉｎｕｒｕｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）ＧＡＰＤＨ与ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｅ和ＳＮＡＤ复合物的晶体．Ｘ射线衍射数据分析表明它们的空间群均为Ｃ２,并具有类似晶胞参数,分别为 α＝ １５．２８０ ｎｍ, ｂ＝ １０．０３５ ｎｍ, ｃ＝ １２．８３１ ｎｍ, β＝１１０．２８°和α＝１５．３４１ ｎｍ,ｂ＝１０．０５１ ｎｍ,ｃ＝１２．８４４ｎｍ,β＝１１０．４８°．估算不对称单位合１个分子即４个亚基．与ＧＡＰＤＨ全酶和酶蛋白晶体比较,属于不同晶型．这个结果提示着辅酶类似物的结合产生了比较大的酶构象变化,而且这个构象变化不同于辅酶结合引起的构象变化．旋转函数计算结果表明,这两种辅酶类似物复合物的四聚体也具有明显的２２２分子对称性．它们的结构分析并与全酶和酶蛋白比较将为了解酶的协同性机理提供一些有益的线索．     

人和鼠GRY-RBP cDNA的克隆

通过筛选人胎儿脑ｃＤＮＡ文库,克隆了编码一个新的ＲＮＡ结合蛋白的人ｃＤＮＡ,命名为ＧＲＹ－ＲＢＰ,人ＧＲＹ－ＲＢＰ ｃＤＮＡ的长度为２９３２ｂｐ,编码一个具６２３个氨基酸,分子量为６９．６ｋｕ的ＲＮＡ结合蛋白。ＧＲＹ－ＲＢＰ蛋白含有３个ＲＮＡ识别基序（ＲＮＡ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆｓ,ＲＲＭｓ）和一个富含甘氨酸（Ｇ）、精氨酸（Ｒ）、酷氨酸（Ｙ）的羧基端,经数据库比较发现该蛋白与许多ＲＲ