非胰岛素依赖型糖尿病与胰岛素基因改变的实验研究

用分子生物学的实验方法对非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）进行胰岛素基因检测。从ＮＩＤＤＭ患者外周血的白细胞中提取ＤＮＡ，以胰岛素基因５′－末端上游的某一ＤＮＡ序列为引物，对特定的靶序列进行体外扩增，即ＴａｑＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰＣＲ），将其扩增产物进行电泳分离，在紫外分析仪下观察结果并与正常人对照，发现１６例ＮＩＤＤＭ患者胰岛素基因有所改变，提示此型糖尿病患者的胰岛素基因改变可能与ＮＩＤＤＭ的发生有关。进一步说明遗传因素在此型糖尿病中的作用。     

小熊猫脑源性神经营养因子（BDNF）基因的克隆与序列分析

参照人的ＢＤＮＦ基因序列设计了一对引物，利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从小熊猫基因组ＤＮＡ中扩增和克隆到ＢＤＮＦ基因。序列分析表明，小熊猫和人的ＢＤＮＦ基因核苷酸序列同源性为９３％，而与大熊猫ＢＤＮＦ基因的核苷酸序列同源性高达９８％。在推导的多肽序列中，除在前导肽区有两个氨基酸的差异外，小熊猫ＢＤＮＦ的成熟区与人和其他报道的哺乳动物ＢＤＮＦ成熟区的氨基酸序列完全一致，显示了极高的保守性。     

人胰岛素原乳腺表达载体的构建

通过ＰＣＲ方法扩增了人胰岛素（ＨＩ）基因１．３４ｋｂ的ＤＮＡ片段并克隆于ｐＵＣ１８的ＳｍａⅠ位点内。经ＤＮＡ序列分析表明，该片段为ＨＩ基因的氨基酸编码区及３＇端调控区序列。同时，应用ＰＣＲ方法对牛α－乳白蛋白（ＢαＬＡ）基因进行了扩增，得到了０．８４ｋｂＤＮＡ扩增片段。将其克隆于去除了ＥｃｏＲＩ位点的ｐＵＣ１８ＳｍａＩ位点内，经内切酶分析和ＤＮＡ测序证明该片段是ＢαＬＡ基因５＇调控区序列。ＥｃｏＲ     

斜纹夜蛾核多角体病毒egt基因的克隆和部分序列分析

用ＡｃＭＮＰＶｅｇｔ基因中的保守区部分片段为探针,通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交确定ＳｌＭＮ－ＰＶｅｇｔ基因的位置在ＰｓｔⅠ４９７０ｂｐ和ＸｂａⅠ２６００ｂｐ的片段上．采用双链ＤＮＡ序列分析方法测序,在２６００ｂｐ片段上的ＥｃｏＲⅠ位点两侧得到５９４ｂｐＤＮＡ碱基序列,用计算机ＤＮＡＳＩＳ和ＰＲＯＳＩＳ软件,将５９４ｂｐＤＮＡ碱基序列所推测的氨基酸序列与ＡｃＭＮＰＶ和ＳｌｉＭＮＰＶ的ｅｇｔ基因氨基酸序列进行同源比较,其同源性分别为４５％和８６．５％．     

人骨髓单核细胞表面分化抗原CD14基因的扩增,克隆和…

根据人骨髓单核细胞表面分化抗原ＣＤ１４基因的核苷酸序列，设计ｈＣＤ１４基因５＇端和和３＇端的两个引物。以人血中提取的基因组总ＤＮＡ为模板，利用聚合酶链式反应技术特异性扩增该基因１４５ｂｐ的编码序列。     

香石竹斑驳病毒（CarMVsh）外壳蛋白基因克隆及原核表达

香石竹斑驳病毒上海分离株是从上海地区栽培的香石竹上分离并鉴定的,以提纯的病毒为材料,ＳＤＳ－酚法纯化的基因组ＲＮＡ作为模板,ＲＴ－ＰＣＲ合成并扩增外壳蛋白基因ｃＤＮＡ,ｃＤＮＡ克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ,转化为Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９。阳笥克隆ｐＴＣａＣＰ经序列分析,证明带有全长ＣＰ基因。     

牛α—s1酪蛋白基因3‘端DNA的PCR扩增,克隆及鉴定

本研究以牛血总ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ技术扩增牛α－ｓ１酪蛋白基因的５＇端３．６ｋｂＤＮＡ片段和３＇端１．５ｋｂＤＮＡ片段的调控区序列，得到了相应的特异性扩增片段．用Ｋｌｅｎｏｗ处理后，将两个扩增片段分别与经Ｓｍａｌ酶切的ｐＵＣ１８质粒载体用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转化大肠杆菌ＪＭ１０９．在含有Ｘ－ｇａｌ，ＩＰＴＧ和Ａｍｐ的选择培养基上培养．从白色菌落中提取质粒ＤＮＡ，进行限制酶切鉴定．结果得到一个插入有１．３ｋｂＤＮＡ片段的阳性克隆．对其进行部分序列分析表明，该片段为５＇端缺失约１７０ｂｐ的牛α－ｓ１酪蛋白基因３＇端及下游区序列．     

人骨髓单核细胞表面分化抗原CD14基因的扩增、克隆和鉴定

根据人骨髓单核细胞表面分化抗原ＣＤ１４（ｈＣＤ１４）基因的核苷酸序列，设计ｈＣＤ１４基因５＇端和３＇端的两个引物．以人血中提取的基因组总ＤＮＡ为模板，利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术特异性扩增该基因１２４５加的编码序列．扩增产物经Ｘｂａｌ、ＫｐｎⅠ双酶切后，克隆到ｐＵＣ１８质粒ＸｂａＩ－ＫｐｎＩ位点间，随后转化大肠杆菌ＪＭ１０９．用ＰＣＲ方法筛选出重组菌落．经酶切和序列分析方法检测后，证明获得了含ｈＣＤ１４基因的重组克隆ｐＨＣＤ１４．巳测出的插入片段５＇端部分中包含着人ＣＤ１４基因４８８ｂｐ的序列，与巳报道的相应ＤＮＡ序列相比具有９９％的同源性．     

三种不同方法检测鸡马立克氏病毒的效果比较

研究比较了核酸斑点杂交技术、多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增和病毒分离技术在检测ＭＤＶ中的效果和相关性，试验结果表明：以ＰＣＲ扩增Ｉ型ＭＤＶ１３２ｂｐ重复序列或以此序列标记的Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ探针进行Ｄｏｔ－ＤＮＡ分子杂交检测ＭＤＶ，均具有较好的效果，灵敏度比常规病毒分离高近万倍，其特异性较强，并能快速鉴别ＭＤＶⅠ型毒，使诊断时间缩短了许多。     

新型抗菌肽基因设计、合成及其在酵母中的表达(Ⅰ)——杂合抗菌肽基因的设计与合成

以化学合成并证实抗菌活性和抗菌谱都高于天然抗菌肽的杂合肽ＣｅｃｒｏｐｉｎＡ１－１１Ｄ１２－３７的氨基酸序列为基础,选用酵母高频使用密码子设计了一种新型抗菌肽基因,基因合成采用二次ＰＣＲ（聚合酶链式扩增）方法．设计和合成的基因全长１４０个碱基对,包括氨基酸编码序列、起始密码子、终止密码子和两端限制性内切酶ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ、ＳａｌＩ识别顺序,合成的基因克隆于ＰＣＲＴＭ２．１载体上．经ＤＮＡ序列分析证实,合成基因碱基序列与设计序列完全一致．     

人类新基因MATH2的克隆及其功能初步分析

通过测序和采用生物信息学分析方法，从人胎脑ｃＤＡＮ库内得到了一条长２．１７５ｋｂ的ｃＤＮＡ序列，其开放读框编码含３３７个氨基酸的蛋白。推论该蛋白与鼠ＭＡＴＨ２蛋白有９８％的同源性，帮将新基因定名为人ＭＡＴＨ２基因。推论该基因定位于人染色体７ｐ１４－１５。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示该基因只在人脑内特异表达，在１．７ｋｂ和２．４ｋｂ处出现特异性条带。人ＭＡＴＨ２蛋白可能与鼠ＭＡＴＨ２蛋白具有相似的     

中国人群DMD基因含外显子片段的限制性带型和RFLPs研究（Ⅰ）：Bgl…

采用ＤＭＤ基因的全长ｃＤＮＡ（１４ｋｂ）为杂交探针，分析了中国人群ＤＭＤ基因含外显子片（ｅｘｏｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｆｒａｇｍｅｎｔ）的ＢｇｌⅡ限制性片段和ＲＦＬＰｓ。新揭示出四个ＢｇｌⅡ片段，ＤＭＤ基因全长范围内含外显子的ＢｇｌⅡ限制性片段总数至少为５９个，这为制作ＤＭＤ基因的ＢｇｌⅡ部分限制图奠定了重要基础；另分析了四个ＢｇｌⅡＲＦＬＰｓ在中国人群中的等位频率，在ｃＤＮＡ２ｂ－３，ｃＤＮＡ     

抑癌基因FHIT的克隆和序列分析

用ＰＣＲ方法，从人脑ｃＤＮＡ库中克隆ＦＨＩＴ基因，扩增得到５５３ｂｐ片段克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ载体，测定了其ＤＮＡ序列。该序列包括ＦＨＩＴ ｃＤＮＡ编码区全部４４４ｂｐ，以及５‘端５２ｂｐ和３’端５７ｂｐ非编码区序列。编程区有二处位点发生突变，第９２位密码子中的Ｃ突变成Ｇ，是同义突变，不导致氨基酸改变；     

水稻热激蛋白基因（HSP70）的PCR法快速分析

通过比较几个已知ＨＳＰ７０的ｃＤＮＡ顺序，用ＰＣＧＥＮＥ软件中的ＰＣＲＰＬＡＮ程序设计出一对简并引物，然后从水稻（广陆矮４号）总ＤＮＡ中扩增出ＨＳＰ７０的基因片段并将其克隆到ｐＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ载体中。在完成了对克隆的序列测定之后，用ＰＣＧＥＮＥ中有关程序对其进行同源分析，并对其他已知的ＨＳＰ７０作了一些分类及分子进化方面的探讨。     

日本脑炎病毒（JEV）内蒙古分离株M73—1E基因的5′端？…

根据国外报道的ＪＥＶ（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）基因组全序列,针对ＪＥＶ Ｅ基因５′端设计合成一对特异引物,以日本脑炎病毒内蒙古分离株Ｍ７３－１ＲＮＡ为模板,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增,获得３６６ｂｐ的ＪＥＶ Ｅ基因ｃＤＮＡ片段。将此片段重组于质粒ｐＵＣ１９中,并转化大肠杆菌ＤＨ５α,经ＰＣＲ扩增,酶切及序列分析,结果表明ＪＥＶ Ｍ７３－１ ５′端１２６个核苷酸序列与ＪＥＶ日     

中国河南西峡晚白垩世恐龙蛋化石基因分离序列分析

从河南省西峡晚白垩世一枚恐龙蛋白石内腔絮状内含物及外壳提取ＤＮＡ样品，并用一段特异引物与６碱基随机引物进行ＰＣＲ扩增、基因克隆和序列分析。结果表明这对引物从蛋腔絮状内含物样品中扩增到一段１５０ｂｐ的ＤＮＡ片，推测氨基酸序列与ＥＭＢＬ库中书籍蛋白质氨基酸序列进行了序列同源性分析，结果表明所克隆到的这段基因与非洲爪蟾表皮钙粘着蛋白前体及脑细胞粘着蛋白、牛及人胎盘胞钙粘着蛋白在氨基酸水平有显著的序列同源     

盐藻磷酸甘油脱氢酶基因cDNA文库的构建

采用Ｌａｍｂｄａ ｇｔ１０载体构建了盐藻ｃＤＮＡ文库，文库大小为１０＾６／ｍＬ插入片段平均长度大于１ｋｂ。根据果蝇，兔，鼠编码其３－磷酸甘油脱氢酶基因的辅酶ＮＡＤ的结合功能区保守序列设计一对引物，大小分别为２１ｂｐ和１８ｂｐ。ＰＣＲ扩增得到与果蝇相同的２９０ｂｐ特异扩增片段，以该片段为探针，采用缺口平移系统标记原位杂交，从盐藻ｃＤＮＡ文库中获得３６个３－磷酸甘油脱氢酶基因的阳性克隆。     

人18周胎儿脑cDNA文库的构建及鉴定

许多脑基因的特异性表达对人脑的发育，分化有着重要的作用，为了研究这些基因的结构和功能，构建了一个人１８周胎儿脑ＣＤＮＡ文库，抽提总ｍＲＮＡ后，经过一系列的酶促反应合成ｃＤＮＡ，分有分离柱除去小片段后克隆到λｇｔ１０载体中，转染宿主菌Ｃ６００ｊｆｌ后文库包装效率为４．６×１０＾６ｐｆｕ／μｇ，ｃＤＮＡ平均郫在于１．２ｋｂｐ已知序列设计引物，从ｃＤＮＡ文库中扩增出神经生长因子（ＮＧＦ）的生长编码基因     

马立克氏病病毒疫苗CV1988株囊膜糖蛋白gI基因的序列分析

根据马立克氏病病毒（ＭＤＶ）国际标准株ＧＡ株的基因序列设计合成了可扩增ｇＩ基因（１０６０ｂｐ）的引物，用ＰＣＲ技术，以ＣＶ１９８８基因组为模板，扩增得到了预期大小的ＰＣＲ产物，将此ＰＣＲ产物和ｐＵＣ１８经同样的限制性内切酶ＫｐｎＩ和ＢａｍＨＩ处理后，连接、转化、鉴定，得到了含有ｇＩ基因的质粒。将此质粒进行序列分析，比较了它与其他强毒和超强毒株的同源性，用ＤＮＡａｓｔａｎ软件对其编码的氨基酸的疏水性     

SlNPV PK基因的部分序列分析

ＳｌＮＰＶ基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ－Ｘｂａ片段上含有部分的ＰＫ基因，ＳｌＮＰＶＰＫ的氨基酸序列与ＨａＮＰＶ，ＨｚＮＰＶＳｐｌｉＮＰＶ，ＡｆＮＰＶ，ＡｃＮＩＶ，ＬｄＮＰＶＰＫ氨基酸序列的同源性分别为４５％，４４％，８９％，３７％，３８％和３７％，其上含有蛋白激酶的特征序列ＩＶＨＡＮＤＶＫＬＥＮＶＬ。