视网膜母细胞瘤基因产物磷酸化水平与细胞生长状态的关系

随着无血清培养细胞时间的延长，红胞合成Ｒｂ蛋白量和磷酸化水平逐渐降低，当细胞生长停止时，Ｒｂ蛋白处于低磷外化状态．正丁酸钠可诱导ＨＬ６０终端分化为单核－巨噬细胞；视黄酸、二甲基亚砜使ＨＬ６０分化为粒细胞．尽管分化途径不同．但是终端分化的细胞都只能合成低磷酸化的Ｒｂ蛋白．结果表明当细胞处于生长停滞状态，细胞都只能合成低磷酸化的Ｒｂ蛋白．     

研究肿瘤侵袭行为的理想模型——裸鼠视网膜

食管癌细胞在体外用SD大鼠视网膜为其侵袭靶子,经扫描电镜、透视电镜观察,显示了肿瘤细胞借助其丝状伪足粘附于内界膜上,进一步向下侵袭视网膜深层。对照组用巨噬细胞、纤维母细胞和直径9.28μm的胶粒分别种植在视网膜上均不见上述改变。此外,又将6株人肺癌细胞分别注射于裸鼠眼玻璃体房内,在注射后第15天、30天取出眼球,制片经光镜观察,结果发现在体外实验表现出高移动性、高粘连性的肺巨细胞癌在体内对视网膜侵袭力最强,为6株肺癌之冠;相反,体外实验表现低移动性、低粘连性的一株肺癌腺在体内对视网膜的侵袭力亦最低。体内、体外实验结果基本一致。证明视网膜既可以用于体内又可以用于体外实验,它是用来作为研究肿瘤侵袭行为理想的实验模型。     

G1期细胞周期相关蛋白对POLD1基因启动子活性的调控

POLD1基因编码DNA聚合酶δ的催化亚基.然而作为最重要的复制蛋白,目前并不清楚其表达的细胞周期调控机制.研究中运用细胞周期同步化及荧光素酶报告基因测定了POLD1启动子在细胞周期不同时相的活性,结果显示启动子活性随着细胞周期进程而变化,在早S期最高.为进一步确定调控POLD1表达的细胞周期相关因子,应用不同质粒转染MCF7细胞,分别筛选得到稳定细胞系.荧光素酶实验表明增强p53或p21的表达,抑制CyclinE或CDK2的表达都能抑制POLD1启动子活性;而抑制CDK4或Cyclin D1的表达对启动子活性没有明显影响.瞬时共转染实验进一步验证Cyclin E或CDK2受到抑制后能够降低POLD1启动子活性.研究初步探讨了POLD1基因表达的细胞周期调控通路,进一步了解细胞周期因子对DNA复制体调控的复杂机制.     

重组PDOR基因的表达与纯化及部分酶学性质

将dhaT在E.coli BL21(DE3)pLysS中进行表达,并对含有His6标记的1,3-丙二醇氧化还原酶(PDOR)进行纯化.重组PDOR反应的最适pH值为10.0,最适温度为55℃,其以1,3-丙二醇和NAD+为底物的表观米氏常数Km值分别是15.5,0.23 mmol*L-1.实验表明,Ca2+, Mg2+和Cu2+对酶活性有抑制作用,而Fe2+, Na+, NH+4和Mn2+对酶活性有促进作用;1,3-丙二醇是PDOR适合的氧化底物.     

麻雀视网膜的组织学研究

1、麻雀(passev,montanus)视网膜结构可分为十层.视网膜中有大量的视杆,视锥细胞,视锥细胞可分为单锥(SC)和双维(DC)两大类.视细胞密度在中失区较高,在周边区较低,视杆与视维数之比约为1.66:1,视细胞与神经节细胞数之比约为1.66:1.2、神经节细胞密度可分为4级.在视网膜中央区神经节细胞的密度较高.细胞的直经较小,细胞排列规则,离中央区越远,神经节细胞密度越低,细胞的直经越大,排列不规则.     

5种细胞周期调控基因在小鼠生殖细胞发育过程中的表达研究

 以成熟(10周龄以上)的昆明种正常小鼠的精巢和卵巢为材料,利用地高辛标记的基因探针进行组织切片上的DNA-mRNA分子原位杂交,研究了PCNA,cdc2,cyclin D1,p2 1和 p16 5种细胞周期调控基因在生殖细胞发育过程中的表达.结果表明:PCNA基因在睾丸组织的精原细胞和精母细胞中有强杂交信号,而在雌性生殖细胞及滤泡细胞的发育过程都没有杂交信号;cyclin D1,cdc2,p2 1,p16基因在生殖细胞的发育过程中都没有,表明这些基因并没有参与小鼠生殖细胞的生长和分化调控.这些事实表明在生殖细胞发育过程中,控制细胞增殖和增殖抑制的基因与培养细胞有不同的机制,它们可能采用了不同的调控系统.     

人tumstatin基因的克隆、表达和抗体制备

应用PCR技术从人胎肺cDNA文库中扩增tumstatin基因编码序列，克隆至pET-3c载体构建非融合表达的重组质粒pET-3c-tum，并在大肠杆菌E．coli B121（DE3）中获得高效表达。表达蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离、切胶回收后免疫新西兰大白兔，获得ELISA效价高达1：1000的特异性兔抗人tumstatin抗血清。     

胃癌下调新基因GDDR表达特性及功能研究

明确胃癌下调新基因GDDR的亚细胞定位、分泌特性及生物学功能研究.与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达明确GDDR表达产物亚细胞定位;GES细胞系转染上清检测分泌蛋白表达;胃癌7901细胞系稳定转染GDDR,观察其生物学作用.发现GDDR表达产物定位于胞浆,是一分泌蛋白.四甲基偶氮唑盐比色法(MTT assay)检测描绘生长曲线及流式细胞计数仪(FACS)细胞周期检测表明,GDDR对胃癌7901细胞增值显著抑制(96 h(1.233±0.017) vs (0.618±0.015), t =2.447, P =2.63×10-9),并且可以引起细胞的周期阻滞.说明胃癌下调新基因GDDR产物为胞浆分布,具有分泌特性,能通过阻滞细胞周期显著抑制胃癌细胞生长,可能为新的候选抑癌基因.     

离心洗脱法在Rb蛋白与细胞分化关系研究中的应用

离心洗脱技术可分离到ＨＬ６０细胞周期中同步的Ｇ０／Ｇ１期细胞，被视黄酸诱导的Ｇ０／Ｇ１细胞可以进行一个正常的细胞周期，Ｒｂ蛋白磷酸化平随细胞周期而变化，但不能进入第二个细胞周期，细胞开始分化，Ｒｂ蛋白磷化水平的降低，是由于ＲＡ首先诱导细胞分化，使细胞生长停止，分化的细胞失去磷酸化蛋白能力的结果。     

抑癌基因p16的研究进展

p16是近年来确定的多肿瘤抑制基因，它对细胞周期的负调控作用尤为重要，其突变或缺失会导致对细胞分裂调控的丧失和紊乱，导致细胞的异常增殖，最终形成肿瘤。该基因在各种肿瘤中的作用，目前正越来越引起人们的重视。     

p53基因在小鼠胚胎发育过程中的表达

以E9日龄至E14日龄昆明种正常小鼠胚胎为材料,利用质粒扩增的、地高辛标记的基因探针在组织切片上进行DNA-mRNA 分子原位杂交,研究了p53基因在小鼠胚胎发育过程中的表达.结果表明, p53基因不参与E9和E10日胚胎发育中的器官原基形成,参与器官的进一步分化成熟过程.这些器官主要有眼、脑、心、肺、脊柱和面颌骨,肝组织的发育与其无关; p53基因一方面参与胚胎发育中的细胞周期调控,另一方面也参与了某些与细胞周期无关的过程;不同的器官有不同的细胞周期调控机制.     

P16基因在小鼠胚胎发育过程中的表达

以E9 d龄至E14 d龄昆明种正常小鼠胚胎为材料，利用质粒扩增的、地高辛标记的基因探针在组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交，研究了p16基因在小鼠胚胎发育过程中的表达.结果表明：p16基因不参与E9和E10 d胚胎发育中的器官原基形成，参与器官的进一步分化成熟过程，这些器官主要有眼、脑、心、肺、脊柱和面颌骨，肝组织的发育与其无关；不同的器官有不同的细胞周期调控机制.     

p21基因在小鼠胚胎发育过程中的表达

以E9日龄至E14日龄昆明种正常小鼠胚胎为材料,利用质粒扩增的、地高辛标记的基因探针在组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交,研究了p21基因在小鼠胚胎发育过程中的表达.结果表明:p21基因从E10日开始参与小鼠胚胎发育,其表达特异性随着胚胎发育进程逐渐增强,与它在细胞周期中的负调控作用相一致.p21基因表达强度较稳定,与其mRNA稳定有关.     

MDV中meq基因对CEF细胞chTERT,chTR表达影响的研究

利用TaqMan探针技术,采用实时荧光相对定量RT-PCR方法检测了MDV中meq基因对鸡胚成纤维细胞(CEF)的端粒酶催化亚单位基因(chTERT)、端粒酶RNA亚基(chTR)表达水平的影响,并用TRAP法测定了端粒酶活性,用流式细胞仪检测了细胞周期的变化.实验结果表明,转染48 h后chTERT表达水平为转染后72 h的16倍,chTR表达水平在转染前后基本不变;转染48 h后CEF细胞的相对端粒酶活性是转染72 h后的12倍;在转染后72 h S期细胞的百分比较未转染细胞显著增加.     

人类新基因CHID1的克隆与功能初步研究

使用生物信息学手段,从人公共蛋白质数据库的蛋白质序列中筛选到新的分泌蛋白基因CHID1(Chitinase domain containing 1),该基因定位于人11号染色体短臂15区5带(11p15.5),cDNA长1 182 bp,其编码蛋白共有393个氨基酸。转染COS-7细胞后Western blot实验显示:在细胞培养液中没有检测到CHID1蛋白。对CHID1基因在mRNA水平上进行组织分布考察发现:它在肺、肾、肝、心、胸腺中都有表达,肝中最高。细胞生长曲线揭示,Lovo-CHID1稳定细胞株有生长抑制的现象,而细胞周期分析发现细胞株在G1期发生阻滞。这表明CHID1有可能是个潜在的抑癌基因。     

哺乳动物精子发生过程的基因表达

雄性生殖细胞的发育要相继发生有丝分裂、减数分裂和后减数分裂，许多生殖细胞特异的转录本在此过程产生。它们的表达是受发育调节的和有阶段特异的，雄性生殖细胞基因表达的调节是以内、外部相互作用进行的，一个对于生殖细胞高度保守的“内部的”遗传程序决定了构成生殖细胞发育基础的事件的发生顺序，在减数分裂和其它的生殖细胞特有的过程中，内部程序决定了哪一个基因被利用以及何时使它们被表达，内部水平的调节又依赖于“外部的”影响。