阔叶榧总DNA的提取及其RAPD反应条件的研究

在阔叶榧新鲜针叶DNA提取过程中，应用pH值较低，无机盐浓度较高的提取缓冲液可沉淀蛋白质，其中加入2％的β-颈基乙醇可有效地防止次生代谢物质使DNA变色。提取出的DNA样品产率在83．7－197．5ng/mg.f.，DNA质量和纯度较高，260nm/280nm光密度比值在1．8－1．9之间。所得DNA可直接用于限制性内切酶酶切，并可用于随机引物PCR扩增，在优化RAPD各种反应条件研究中，确定 了阔叶榧最佳RAPD反应体系为：15μL反应体系中含有50mmol/L KCl．10mmol/L Tris-HCl(pH9.0）．0．1％Triton-100、3nmolμL MgCl2、0.6nmol/μLdNTPs、6μg/μL BSA、1U Taq酶、60ng引物、50－100ng左右的阔叶榧DNA。     

间甲酚紫-DNA体系共振光散射法测定DNA

建立了溴代十六烷基吡啶（CPB）存在下，用间甲酚紫（CP）为探针测定核酸的新方法，在HMTA－HCl缓冲溶液（pH=4.5）中，DNA的加入使CP－CPB体系的共振光散射（RLS）增强，此RLS信号与DNA浓度成正比,fsDNA和ctDNA的线性范围分别为0．1－20μg/mL和0．1－50μg/mL，检出限分别为10ng/mL和26ng/mL。     

小剂量60Coγ线照射诱导体外培养小鼠骨髓细胞凋亡研究

目的：研究小剂量^60Coγ线照射对体外培养小鼠骨髓细胞的影响。方法：以1ng/ml rh GM-CSF和5ng/ml rh IL-3作为造血生长因子，维持骨髓细胞存活，然后用小剂量^60Coγ线照射，动态观察骨髓细胞凋亡情况，同时设立未照射小鼠骨髓细胞作对照。结果：实验观察到照射后6h，透射电镜显示细胞皱缩，细胞膜空泡化，核固缩，呈典型的细胞凋亡特征；DNA裂解百分率照后6h各时点逐渐升高，第20h达高峰，之后逐渐下降，照后6－26h，实验组与对照组DNA裂解率有显著性差异（P＜0．01）；DNA琼脂糖疑胶电泳呈特征性梯状图谱，片段大小为180bp或其倍数。结论：小剂量^60Coγ射线可诱导体外培养骨髓细胞凋亡。     

Si基底上DNA分子的自组装

利用自组装方法将DNA分子吸附于Si基底表面, 并通过原子力显微镜（AFM）观察不同质量浓度的DNA溶液在Si基底表面进行自组装后的结构： 当DNA溶液的质量浓度较低时, Si基底表面会吸附单个、 拉伸、 环状的分子; 当DNA溶液的质量浓度为60~160 ng/μL时, 在Si基底表面会形成网状结构; 当DNA溶液的质量浓度超过200 ng/μL时, 仅形成DNA薄膜. 实验结果表明, 可以利用该方法制作基于Si材料的DNA分子器件.     

糯米酒发酵过程中微生物基因组提取方法比较

为了更加快速地获得糯米酒发酵过程中高质量的微生物基因组DNA,本实验通过测定基因组DNA浓度和进行聚合酶链式反应(PCR),利用溶菌酶-SDS-蛋白酶-K(A法),改良CTAB(B法)和改良CTAB-溶菌酶(C法)三种实验方法获得微生物基因组DNA,通过比较三种方法发现,C法提取效率最高,获得的基因组DNA浓度为1 573.97±711.51ng/μL;B法获得的基因组浓度为1 436.03±128.0ng/μL;A法效率最低,获得基因组浓度为411.67±133.29ng/μL.以基因组DNA为模板进行PCR,将扩增产物在0.6%琼脂糖凝胶中进行电泳检验.结果显示C法获得的条带最清楚明亮,表明DNA浓度最高、结构完整.基因组DNA浓度和PCR产物琼脂糖凝胶电泳条带的亮度表明,提取糯米酒发酵过程中微生物基因组DNA的最优方法为改良CTAB-溶菌酶法(C法).     

用AFM对质粒DNA在云母表面的自组装研究

通过原子力显微镜(AFM)对在云母表面上自然挥干的不同质量浓度的质粒DNA分子进行扫描，原子力显微镜图像显示：当质量浓度为0．1μg／mL时，DNA分子呈现出线性结构，随着质量浓度加大至1μg／mL，DNA分子相互缠绕为网状结构，质量浓度为10μg/mL时，呈现出具有典型的聚合形态，当质量浓度进一步加大到100μg／mL，则呈现出明显的树状脉络结构．通过原子力显微镜对质粒DNA分子的形态表征，可以看出质粒DNA分子具有典型的自组装的特性．     

尿样中草酸根的离子色谱分析研究

建立了离子色谱分析测定尿样中草酸根的方法，该方法具有灵敏度高，选择性好，简捷等优点，草酸根在流速为1．5ml/min，浓度为1mmol/L的Na2CO3溶液淋洗液中通过Dionex AS4A-SC分离柱后得到很好的检测，检测限为0．003μg/ml，峰高，峰面积的变异系数分别为0．15％和0．91％，线性范围在2－100μg/ml，峰面积的线性回归系数为0．9996，回收率为102．0％左右，用该法对人体尿样进行分析测定时取得了满意的结果。     

用非同位素标记的pAV 401探针进行分子杂交鉴定马铃薯纺锤块茎类病毒

用Eoehringer Mannheim Biochemica的pAV401探针,以分子杂交的方法鉴定了马铃薯和番茄中的马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTV)。试验表明当用探针浓度为200ng/ml, β-半乳糖苷酶为100 mU/ml,即酶结合物稀释至1:100时,可以测定出提纯PSTV—RNA最低浓度为390pg/斑点,感染PSTV的马铃薯和番茄叶片汁液最高稀释浓度为1:128。样品提取方法试验表明,以酚法教果为最佳。健康马铃薯汁液对提纯PSTV—RNA鉴定效果无明显影响。样品汁液在稀释前予先变性对提高杂交效果无明显作用。本文对Boehringer pAV401探针检测PSTV的灵敏度,所用探针浓度以及显色系统进行了讨论和评价。     

对甲氧基苯甲醛为荧光探针测定DNA含量

基于DNA与对甲氧基苯甲醛的荧光猝灭效应,以甲氧基苯甲醛作为荧光探针建立了一种简便快速测定DNA的荧光分析方法.考察了pH、荧光探针浓度、温度、放置时间等条件对荧光探针及DNA测定的影响.该方法测定DNA含量的线性范围为51~1 000 ng/mL,检出限为30 ng/mL,10次测量500 ng/mL DNA的相对标准偏差为2.0%,可用于合成样品的测定.     

UPLC-MS/MS测定中药制剂及保健品中茶碱的含量

为建立准确、灵敏的UPLC-MS/MS方法直接测定止咳平喘类中药制剂及保健食品中非法添加的茶碱的含量,采用Agilent ZORBAX-SB-C18柱为分析柱,以甲醇-0.1%甲酸铵(30:70)为流动相,检测波长270nm,扫描方式采用全扫描一级质谱、全扫描二级质谱以及MRM模式定量,质量数范围100~300。结果显示UPLC-MS/MS方法测定茶碱的检出限为scan模式下50ng/ml、MRM模式下0.05ng/ml;茶碱的定量限为MRM模式下0.1ng/ml,在0.1ng/ml~2.0ng/ml范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9975)。该方法建立的系统能够灵敏、准确地测定止咳平喘类中药制剂及保健食品中茶碱含量。     

一种基于Propidium Monoazide与PCR结合的选择性检测细菌活细胞的方法

建立了一种PMA与PCR结合的细菌活细胞检测的方法,可有效抑制微生物死细胞DNA的PCR扩增,从而排除死细胞对微生物活细胞检测的影响．结果表明,PMA浓度大于3 μg/ml时可抑制死细胞DNA的PCR扩增,PMA浓度高达50 μg/ml时仍不影响活细胞DNA的PCR扩增;并且得出曝光时间大于3 min可使PMA与死细胞DNA分子共价交联,抑制其PCR扩增;浊度影响PMA交联的结果表明浊度小于10 NTU时,PMA仍能有效地抑制死细胞DNA的PCR扩增,而当浊度大于100 NTU时,PMA失去效果．     

水体中有机氯的SPME-GC/MS法检测

通过对水体中有机氯杀虫剂在不同SPME条件的优化实验,建立了有机氯的自动SPME-GC/MS检验方法,方法检测浓度为0.6～100 pg/ml,在ng/ml级线性相关系数r大于0.99,是有机氯快速有效的分析方法.     

实验性脂肪肝鸡血液激素和脂类含量变化的研究

鸡的脂肪肝很少研究,有关内分泌变化的尤其少见,本实验选用产蛋鸡研究其在脂肪肝形成过程中激素的变化规律与脂类代谢的关系。用比色法测定了脂总脂和胆固醇含量用放射免疫法测定了雌二醇、睾酮、二碘甲原氨酸(T_3)和甲状腺素(T_4)。 实验结束作病理解剖学检查,发现可用加喂KI和高能低蛋白饲料得到了复制,具有典型的脂肪肝症状。 血脂和胆固醇含量各周之间差异显著,呈明显上升趋势,第42天实验结束时达到峰值分别为21841.26mg/100ml和114.69mg/100ml。 血清雌二醇含量明显上升,睾酮含量呈下降趋势,实验开始时分别为89.31pg/ml和5.1ng/100ml,第28天时分别为516.45pg/ml和1.8ng/100ml;睾酮含量在各周之间没有试显著差异,呈下降趋势。 血清T_3在各周之间也有显著差异,由于喂饲大量KI,有一个较大上升波动,第28天后急剧下降为0.21ng/100ml,与血脂含量呈极显著的负相关。血清T_4含量在第28天前各周波动不显著,第35天达到峰值,第42天时下降为1.76ng/ml。在个体测定中,T_4含量有一个明显上升趋势,这也与喂饲KI有关。     

应用酶联免疫吸附试验鉴定PVY和PVY~N的研究

用酶联免疫吸附试验测定了提纯的PVY和PVYN及其侵染的马铃薯叶片汁液、块茎休眠芽和幼芽。结果表明,用辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体,采用双抗体夹心法,固定包被抗体浓度20μg/ml,选用酶标记抗体的工作浓度为l:75—90,能测出PVY抗原的最低浓度为40ng/ml,PVYN为10ng/ml。感染PVY和PVYN的马铃薯叶片汁液的最高稀释度均为1/128;马铃薯块茎打破休眠后生出的幼芽的最高的稀释度为1/16,而马铃薯休眠芽中的两种Y病毒株系均不能测出。     

甲壳胺微载体培养Vero细胞实验

采用以甲壳胺为基质合成的CX－1型微载体，进行Vero细胞悬浮培养实验，结果表明，在1mg/ml甲壳胺微载体浓度下，使用RPMI1640培养基，添加10％新生牛血清，37℃培养3h，传代Vero细胞能够快速贴附于微载体上，悬浮培养24h时，细胞浓度达到2.26×10^5个／ml；培养72h时，细胞浓度达到6.89×10^5个／ml；培养120h时，细胞浓度达到7.12×10^5个／ml。电镜观察表明细胞在微载体上长势良好。说明甲壳胺微载体适合Vero细胞高密度悬浮培养。     

一阶导数-同步荧光分析法同时测定痕量的苯酚和对苯二酚

提出苯酚和对苯二酚的一阶导教-同步荧光测定法,并应用于印刷厂制版车间的污水和环境水样的测定。在柠檬酸二钠-盐酸介质中(pH=3.0)以△λ=20nm进行同步扫描时,可以避免拉曼散射的影响,苯酚和对苯二酚的一阶导数-同步荧光光谱的峰位置分别为290nm/302nm和312/326nm,峰高与浓度呈线性关系,线性范围均为0～80ng/ml,相关系数均为0.999,同时测定时检测限分别为0.65ng/ml和0.97ng/ml。     

壳聚糖载药微球的研制

采用乳化交联法制备壳聚糖载5－氟尿嘧啶微球、研究了乳化剂，有机分散介质、交联反应时间、戊二醛用量、壳聚糖浓度和5－氟尿嘧啶浓度对微球性能的影响，结果表明：当以苯甲酸乙酯为有机分散介质，Span-80用量2ml，交联反应90min，戊二醛用量2ml，壳聚糖浓度1％，5－氟尿嘧啶浓度1％时，所制壳聚糖微球粒径10－50μm，载药率为19．7％，包药率52．3％，为黄褐色致密球体。     

静止拟微分电位溶出法测定水体中重金属离子

本文介绍了静止拟微分电位溶出法分别对天然水、矿泉水、受污染水体中重金属离子镉、铅的测定。文中讨论了分析条件,采用了0.2mol/L HAc-NH_4Ac缓冲液作支持电解质,1×10~(-4)mol/L Hg~(2+)作氧化剂的体系。用本方法Cd~(2+)离子的最低检测限为0.08ng/mL,在0.3ng/ml-10ng/ml的浓度范围内Cd~(2+)、Pb~(2+)离子与峰高均呈现良好的线性关系。在1ng/ml的Cd~(2+)和1ng/ml的Pb~_(2+)浓度下,连续测定11次,其相对标准偏差分别为3.8％和4.9％。方法的回收率在108％到99％之间。     

静止拟微分电位溶出法测定水体中重金属离子

本文介绍了静止拟微分电位溶出法分别对天然水、矿泉水、受污染水体中重金属离子镉、铅的测定。文中讨论了分析条件,采用了0.2mol/LHAc-NH_4Ac缓冲液作支持电解质,1×10~(-4)mol/LHg~(2+)作氧化剂的体系。用本方法Cd~(2+)离子的最低检测限为0.08ng/mL,在0.3ng/ml-10ng/ml的浓度范围内Cd~(2+)、pb~(2+)离子与峰高均呈现良好的线性关系。在1ng/ml的Cd~(2+)和1ng/ml的Pb~(2+)浓度下,连续测定11次,其相对标准偏差分别为3.8％和4.9％。方法的回收率在108％到99％之间。     

海桐ISSR-PCR反应体系的建立与优化

利用ISSR技术对海桐的遗传多样性进行研究,对影响PCR扩增效果的一些因素诸如退火温度、Mg2 浓度、4×dNTP浓度、牛血清白蛋白浓度、模板DNA用量、引物用量以及Taq DNA聚合酶用量等指标进行优化,建立了可用于海桐ISSR分析最适宜的反应体系:10μL PCR反应体积中,1×Taq酶配套缓冲液(10mmol/L Tris.HCl,pH值9.0,50 mmol/L KCl,0.1%Triton X-100),2.5 mmol/L MgCl2,0.2 mmol/L 4×dNTP,2.0 mg/mL牛血清白蛋白,10 ng模板DNA,6 pmol引物,0.3 U Taq DNA聚合酶.引物UBC807的最适退火温度为50.7℃.