苏云金芽孢杆菌LSZ9408伴孢晶体的形态特征研究

本文通过对虫体复壮前后BtLSZ9408菌株伴孢晶体的形态结构观察、杀虫毒力测定，发现BtLZS9408伴孢晶体以菱形结构为主（比例〉85％），其余为正方形结构（比例占3％）、不规则结构（比例〈12％）；虫体复壮后菌株伴孢晶体中菱形结构比例提高、不规则结构比例下降，菱形晶体平均轴长增大，杀虫毒力显著提高。     

球形芽孢杆菌产毒条件的研究

球形芽孢杆菌(Baci Llus Sphaericus)在蚊幼孳生地能自然繁殖,我们从盐城郊区的污水塘中分离获得BS—1012,通过对库蚊、伊蚊及按蚊的生物学测定而知,其毒性高于标准株BS—1593,通过血清学试验证明其血清型为H_(5a5b)。本文主要研究氮源,碳源,无机盐,pH,温度、培养方法对BS—1012生长发育及产毒能力的影响。寻找最适合其生长发育的培养基,便于生产及大面积推广应用。     

利用HPLC测定二硫苏糖醇(DTT)对苏云金芽孢杆菌伴胞晶体降解的影响

利用 HPLC测定二硫苏糖醇 (DTT)对苏云金芽孢杆菌伴胞晶体降解的影响。结果表明 ,放置时间对DTT溶液的变化影响显著 ,随着 DTT放置时间的延长 ,2个峰的保留时间都随之延长。利用不同浓度的 DTT降解 Bacillusthuringiensis,伴胞晶体时 ,其检测结果都出现保留时间小于 1 5.0 0 min的 4个主峰 ,与 DTT单独添加在 Na2 CO3 - HCl缓冲液 1 h后检测的保留时间大于 2 5.0 0 min的 2个峰明显不同 ,也比伴胞晶体单独添加到 Na2 CO3 - HCl缓冲液 1 h后检测的结果多了 1个新峰 ,并且峰高显著增加 ,这表明 DTT对晶体起到降解作用。峰 1和峰 4的保留时间与 Na2 CO3 - HCl缓冲液所测到的色谱特征峰相近 ,峰 2和峰 3为 Na2 CO3 -HCl缓冲液不具有的。在用不同浓度的 DTT在 37℃下降解 B.t.伴胞晶体 1 h后 ,立即用 HPLC进行检测的结果表明峰 2高于峰 3,峰 2的高度与 DTT的浓度成正相关 ;放置 2 4 h后所有处理中峰 2的高度都下降 ,峰 3的高度都高于峰 2 ,峰 2 (Y1 )和峰 3(Y2 )的峰高都与 DTT的浓度 (x)成指数增长 ,Y1 =1 9.1 33e0 .0 1 4 8x (R2 =0 .970 8)和 Y2 =2 9.0 62 e0 .0 1 68x(R2 =0 .9589) ;上述结论表明在 DTT的作用下 ,伴胞晶体不断地被降解 ,使得峰3不断增高 ,DTT的消耗 ,使得峰 2下降 ;随着 DTT浓度的增大 ,     

外源基因在球形芽孢杆菌中的转化

为了扩大芽孢杆菌属的受体系统范围，对球形芽孢杆菌进行了质粒消除，并用含有溶葡球菌酶基因的质粒ｐＥ１９４ｃｏｐ６－１转化，结果表明，该酶基因在球形芽孢杆菌中获得了稳定，高效表达。     

一株产伴孢晶体的霉状芽孢杆菌的研究

自济南郊区菜园土中,分离到一株产伴孢晶体的霉状芽孢杆菌。对其进行了形态、培养特征、生理生化反应、血清学反应以及 DNA 的 G+C 含量和 DNA-DNA 杂交率的试验测定。该菌有芽孢,其 DNA 中 G+C 含量为33. 9摩尔%(Tm)。由于该菌产典型的伴孢晶体,初步分析可将其归于苏芸金杆菌类(Baci-llus thuringiensis),并作为一种新亚种,命名为苏芸金杆菌霉状亚种(Baci-llus thuringiensis subsp.mycoides)。     

对烟草粉螟高毒力Bt菌的伴孢晶体研究

采用液体双向分离法提纯对烟草粉螟高毒力苏云金杆菌B t33,B t53,B tHB伴孢晶体,其纯度分别达99.93%,99.9%,99.8%.扫描电镜和透射电镜观察发现,不同菌株的晶体形状和数量组成各不相同.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAFE)发现3个菌株的电泳图谱不同,烟草粉螟二龄幼虫室内生物毒力测定,9天后B t33,B t53菌株100,300倍防治效果超过80%,B tHB菌株100,300,600倍对烟草粉螟二龄幼虫防治效果超过80%.     

球形芽孢杆菌Bs-8093对抗生素的抗性

考察了球形芽孢杆菌Bs-8093对氯霉素、氨苄青霉素、红霉素、卡那霉素、利福平、四环素、链霉素、庆大霉素、麦迪霉素、核糖霉素和叠氮钠的自然抗性，结果表明球形芽孢杆菌Bs-8093菌株对高浓度的链霉索、叠氮钠和低浓度的氯霉索有抗性，对其它考查的抗生索都敏感。     

球形芽孢杆菌BS—1012产毒部位的研究

本文对球形芽孢杆菌 Bacillus Sphaericus BS—1012菌株的产毒部位进行了研究。结果表明:BS—1012菌株的伴孢晶体和芽孢对蚊幼虫具较高的毒力。营养体对蚊幼虫也有毒力,毒力强度低于芽孢和伴孢晶体。本文发现营养体在裂殖生长过程中能够产生并分泌到胞外的外毒素,这对于大规模生产时选用合适的剂型具有理论指导意义。     

芽孢杆菌代谢过程中孢外酶的活性测定

用分光光度法测定了芽孢杆菌代谢过程中孢外酶的活性，得出酶活力随时间变化的曲线，并计算了活力增长常数，３７℃时ｋ＇为０．０１３４／ｍｉｎ，此结果与前人用ＬＫＢ－２２７７生物活性仪测出的热谱曲线，生长速率常数ｋ＋分相近。     

苏云金杆菌固体发酵工艺研究

苏云金杆菌(Bacillus Thuringiensis简称B.t)是农业生产中最广泛应用的微生物杀虫农药.为了在降低生产成本、减少废水排放的同时,提高生产菌发酵水平和毒力效价,对本实验室选育的菌株B.t NH-1的固体发酵工艺条件的优化进行了进一步研究,确定了适合于B.tNH-1生长、产生芽孢的最佳条件.研究结果固体发酵水平基本稳定在2.37×1010个/g,粉剂烘干后,测其毒力效价,可以稳定在17000 IU/mg以上,,超过国内文献报道固体发酵的最高水平.     

一株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的分离与鉴定

利用醋酸盐对苏云金芽孢杆菌芽孢萌发的选择性抑制特性，采用选择性培养基从土壤中分离苏云金芽孢杆菌，对分离菌株的个体形态，生理生化特点进行了分类研究，确定该菌株即为苏云金杆菌，采用改进的培养基培养伴胞晶体，证明该培养基可在48h内产生大量的伴胞晶体。     

Bt培养基配比及伴孢晶体纯化条件的优化

苏云金芽孢杆菌[Bt(HD-1)]发酵中培养基的配方影响发酵水平,还决定发酵产物杀虫毒力的效果.本实验在基础参数试验基础上,采用均匀设计法对Bt发酵中培养基组分、杀虫晶体蛋白纯化条件进行优化,并直接采用发酵中伴孢晶体量作为最终评价指标.结果表明:Bt培养基成分对发酵的主要影响因素依次为:MgSO4、蛋白胨、可溶性淀粉,最佳用量为(g/L):1.3、2.6、4.5;晶体蛋白双液相纯化的主要影响因素依次为:K2HPO4/KH2PO4质量比、PEG浓度、沉淀量、离心速度,最佳条件为:3:1、110 g/L、1 g、1 440 r/min,其中离心速度若选500 r/min,可能对晶体纯度提高更有利,但低速对回收率有负影响.     

苏云金杆菌对主要大曲害虫的毒杀效果研究

苏云金杆菌是一种广泛应用的生物农药,苏云金杆菌在形成芽孢的同时,产生具有毒杀性的伴孢晶体.研究表明:利用液体发酵方法培养苏云金杆菌,最佳的发酵周期为2天;最佳毒杀剂量为日照条件下2.0×109个芽孢/克,非日照条件下3.2×109个芽孢/克;最佳毒杀温度为30℃,其毒杀效果在日照条件下为46%,非日照条件下为86%.     

成孢延迟蛋白基因对枯草芽孢杆菌生物量和发酵酶活力的影响

探讨同种相噬对枯草芽孢杆菌内源酶发酵活力的影响.应用同源重组敲除的方法,构建了枯草芽孢杆菌168菌株的编码成孢延迟蛋白毒素前体的基因sdp C的knock-in突变株,比较了突变株和出发菌株的生物量、芽孢数和α-淀粉酶发酵活力.与出发菌株相比,突变株的生物量、芽孢数和α-淀粉酶发酵活力均显著提高,产酶高峰期酶活力提高23%.本研究结果显示,sdp基因突变不仅能够提高枯草芽孢杆菌的生物量,还能够提高其内源酶的发酵活力.     

氢氧化钠对苏云金芽孢杆菌芽孢及其萌发的影响

【目的】了解碱对细菌芽孢及萌发的影响及机制,进一步认识芽孢的抗性,为寻找更好的杀灭芽孢的方法提供理论参考。【方法】应用单细胞拉曼光谱采集经NaOH处理后的单个苏云金芽孢杆菌(Bt)芽孢的拉曼光谱,并应用微分干涉差显微镜成像术分析其萌发动态。【结果】1.0mol/L NaOH处理30min、45min和60min后,Bt芽孢的存活率分别为25.0%、3.6%和1.8%左右;芽孢吡啶二羧酸(DPA)和蛋白质的特征峰有微弱的降低,蛋白质二级结构α螺旋特征峰(1 280/1 652cm~(–1))的位置和信号强度与对照没有明显的差异。在10mmol/L丙氨酸下,单个芽胞开始大量释放CaDPA的时间(Tlag)、快速释放CaDPA所需的时间(ΔT_(release))和芽胞皮层水解所需的时间(ΔT_(lys))分别是对照的3.5~5倍、12~13倍和1.5~2倍;在月桂胺触发下,T_(lag)值和ΔT_(release)值分别是对照的4倍和11倍左右。外源CaDPA无法触发处理30 min后的芽孢的萌发,而对照则萌发极快。【结论】NaOH处理没有破坏Bt芽孢的内膜,也没有引起成孢内CaDPA泄漏,但令与芽孢萌发相关的蛋白质受损,受损最严重的是皮层水解酶,对芽胞萌发产生严重的影响。     

苏芸金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌基因组DNA同源性及多态性的研究

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增到６１个标准株、生产用菌株及２４个蜡状芽孢杆菌参比菌株的全ＤＮＡ指纹图,通过计算多态性扩增片段的大小,利用ＮＴＳＹＳ软件进行聚类分析,蜡状芽孢杆菌菌株并未形成独立于苏芸金芽孢杆菌的聚群,这是此近缘种ＤＮＡ分子水平高度同源的新证据．６１个苏芸金芽孢杆菌的聚类结果表明：其ＤＮＡ指纹图与Ｈ－血清型有一定相关性．与引物０９５５－０３相比,引物０９４０－１２对苏芸金芽孢杆菌不同亚种及蜡状芽孢杆菌菌株具有更高的鉴别价值,大多数特异株ＤＮＡ全指纹图有菌株特异性,证实ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术是苏芸金芽孢杆菌及蜡状芽孢杆菌种下分类和鉴定的简便快速有效的方法