大肠杆菌L—谷氨酸脱羧酶酶促特性的研究

本文主要研究大肠杆菌505L-谷氨酸脱羧酶脱羧作用的最适浓度、pH、温度、耐热性、底物浓度以及它对天冬氨酸等十二种氨基酸是否具有脱羧性能,从而发现目前L-谷氨酸发酵生产中测定存在的问题。     

稀土与L—组氨酸L—谷氨酸三元配合物的pH电位法研究

报道了在模拟生理条件（37℃,c=0．15mol.L^-1NaCl）下用精密pH电位法对15种稀土元素与L－组氨酸及L－谷氨酸溶液体系三元配合物稳定常数的测定结果,实验数据处理用程序Miniquad-82A完成,玻璃电极的选择及校正用Magec程序完成,结果表明在该三元体系中普遍存在3种类型的酸式配合物（1111,1112及1113型）,且第一类型配合物的稳定常数相差较小。     

大肠杆菌谷氨酸脱羧酶的纯化及其性质的研究

大肠杆菌菌体经机械研磨,硫酸铵分级,sephadex G-100层析,再用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳进行纯化,得到电泳均一的 L-谷氨酸脱羧酶纯品.酶作用的最适pH 为4.4,在 pH3.6～5.8稳定;最适温度50℃,50℃以下稳定;于60℃保温30min,酶活力保留65%.此酶作用于 L-谷氨酸的 K_m 值为1.39×10~(-2)mol/L,金属离子 Zn~(2+),Cu~(2+),Mg~(2+),Fe~(2+)分别不同程度的抑制此酶,EDTA 无抑制作用.该酶在280nm 处有最大光吸收,与蛋白质在280nm 处有最大光吸收值的普遍性质相一致.     

谷氨酸生物传感器的研制

采用海藻酸钙凝胶包埋法及海藻酸钙凝胶包埋与戊二醛化学交联相结合的固定化方法，制备了固定化谷氨酸脱羧酶膜，与ＣＯ２气敏电极偶联制成谷氨酸生物传感器。经测试，对谷氨酸的线性响应范围为（１．０×１０（－２）～２．０×１０（－４））ｍｏｌ／Ｌ，斜率为５５．７ｍＶ，检测下限为２．３×１０（－４）ｍｏｌ／Ｌ，稳态响应时间为（９～１５）ｍｉｎ。用包埋与交联相结合制得的传感器，其稳定性优于仅用包埋法制得的传感器。     

固定化谷氨酸脱羧酶转化γ-氨基丁酸的研究

研究卡拉胶制备固定化谷氨酸脱羧酶及转化γ-氨基丁酸(GABA)的最适条件.以本实验室研发的诱导剂对构建的表达谷氨酸脱羧酶(GAD)的基因工程菌进行诱导,并利用卡拉胶对获得的粗酶液进行包埋制备固定化酶,对影响GAD固定化效果和GABA产量的因素进行研究.最佳固定化条件为卡拉胶浓度1.5%,氯化钾浓度3%,硬化时间2 h;转化GABA的最适条件为反应最适pH为3.8～4.3,最适温度为37℃～43℃,将制得的固定化谷氨酸脱羧酶(IGAD)重复使用7次后,催化活力仍保持在最初值的75%;IGAD在最适底物浓度60 mmol/L下反应时间2 h后谷氨酸转化率达99%,利用IGAD进行连续催化反应,最终GABA摩尔转化率为70.98%,晶体得率为91.90%,晶体纯度94.73%.该法具有较好的操作稳定性和较高的底物转化率,为连续化制备γ-氨基丁酸提供参考.     

碳源对假单胞菌NX-1产生L-天冬氨酸β-脱羧酶的影响

比较了假单胞菌NX－1在各种糖类物质、有机酸和氨基酸培养基上生长和合成L－天冬氨酸β-脱羧酶（ADL）的情况，结果表明用不同的碳源培养基，NX－1的生长和产酶表现出明显的差异。NX－1能利用糖类物质生长，但ADL合成受阻遏。三羧酸循环中间体是ADL合成的良好的碳源，谷氨酸是ADL酶合成最好的诱导剂，其诱导合成的ADL是富马酸为碳源时的2倍，对L－谷氨酸（L－Glu）刺激ADL酶生成的机理进行初步分析，认为L－Glu通过自身（而不是由L－Glu衍生出的任何代谢物）和ADL合成的有关基因作用强烈诱导ADL合成。     

芜青中谷氨酸脱羧酶（Gad）酶性质的时空差异

该文对芜青中谷氨酸脱羧酶(Gad)粗酶的提取和优化、酶活力最适反应条件、时空分布差异及光照影响等进行对比分析,同时利用超高效液相色谱法技术(UPLC)分析测定反应产物γ-氨基丁酸(Gaba)的含量.实验结果表明,提取Gad粗酶时加入纤维素酶能提高约70%酶活力.在最适条件对比实验中,对芜青芽苗、块根、茎生长点、茎及顶端分生组织分别进行测定,其中芽苗与顶端分生组织中的酶活力较高.光照对萌发中芽苗的Gad酶活力有较大影响,避光条件下酶活力下降约75%.结果表明,芜青芽苗Gad酶活力好且易于获取,转化谷氨酸反应生成γ-氨基丁酸的转化率高.     

磁场对大肠杆菌及胞内谷氨酸脱羧酶的影响

研制了大肠杆菌电极 ,采用部分干燥法处理大肠杆菌膜 ,使电极寿命达到了 38d 用此电极研究分别磁化底物及大肠杆菌膜对其胞内谷氨酸脱羧酶 (GAD)活性的影响 ,发现在不同磁场强度、不同作用时间下 ,磁化底物其影响不一致 ,活性最高可达 4 5 2 % ,且有滞后和恢复效应 ;磁物菌体膜未见膜活性显著变化 磁场处理菌液 ,未见明显灭菌作用 ,也未见对其生长有显著影响     

Nw—硝基—L—精氨酸和谷氨酸单氨钠对高血压大鼠心率、血压及脑卒中的影响

目的:观察长期使用Nω-硝基-L-精氨酸(L-NNA)和谷氨酸单氨钠(MSG)后高血压大鼠心率、血压的变化,以及脑卒中发生的情况。方法:每日给SD大鼠腹腔注射L-NNA和MSG,于7、30和70d测心率、血压,观察脑卒中情况。结果:(1)高血压对照组心率30、70d较正常对照组增快(P<0 05);注射L-NNA组较正常对照组增快,但仅在30、70d高于高血压对照组(P<0 05);注射MSG组心率30、70d较高血压对照组和注射L-NNA组减慢,但未恢复至正常对照组水平(P<0 05)。(2)高血压对照组各时期的血压均较正常对照组明显增高(P<0 05);注射L-NNA组的血压在7d较高血压对照组升高不明显,但30、70d增高显著(P<0 05);注射MSG组的血压较高血压对照组和注射L-NNA组明显下降,但仍未恢复至正常水平。(3)高血压对照组在70d均出现程度不等的脑卒中症状,有20%由于脑卒中死亡。注射L-NNA组从30d开始即出现不同程度的脑卒中症状,有33%由于脑卒中死亡。注射MSG组在实验的全程中均未出现脑卒中症状。结论:NO生成减少不仅影响大鼠心率,还参与高血压发生、发展,并可能与高血压晚期发生脑卒中有关。     

慢性心衰大鼠下丘脑室旁核谷氨酸脱羧酶对交感神经活动的影响

本文证实慢性心衰大鼠下丘脑室旁核(PVN)谷氨酸脱羧酶对交感神经活动的影响。冠脉结扎法诱导大鼠慢性心衰,在PVN微量注射谷氨酸脱羧酶抑制剂烯丙基甘氨酸,观察动脉血压、心率和肾交感神经活动的变化,结果显示假手术组和心衰组大鼠心率、血压和肾交感神经放电均有升高(P<0.05),但心衰组升高幅度与假手术组相比显著减小(P<0.05)。Western blot实验法观察PVN内谷氨酸脱羧酶蛋白表达量变化,结果显示与假手术组比,心衰组大鼠PVN内谷氨酸脱羧酶67(GAD67)表达下调(P<0.05),但谷氨酸脱羧酶65(GAD65)表达无明显变化(P>0.05)。结果提示心衰大鼠PVN的谷氨酸脱羧酶变化对交感神经的作用发生钝化,其机制可能与PVN内谷氨酸脱羧酶67表达量下调有关。     

慢性心衰大鼠下丘脑室旁核谷氨酸脱羧酶对交感神经活动的影响

本文证实慢性心衰大鼠下丘脑室旁核(PVN)谷氨酸脱羧酶对交感神经活动的影响.冠脉结扎法诱导大鼠慢性心衰,在PVN微量注射谷氨酸脱羧酶抑制剂烯丙基甘氨酸,观察动脉血压、心率和肾交感神经活动的变化,结果显示假手术组和心衰组大鼠心率、血压和肾交感神经放电均有升高(P＜0.05),但心衰组升高幅度与假手术组相比显著减小(P＜0.05).Westemblot实验法观察PVN内谷氨酸脱羧酶蛋白表达量变化,结果显示与假手术组比,心衰组大鼠PVN内谷氨酸脱羧酶67(GAD67)表达下调(P＜0.05),但谷氨酸脱羧酶65 (GAD65)表达无明显变化(P＞0.05).结果提示心衰大鼠PVN的谷氨酸脱羧酶变化对交感神经的作用发生钝化,其机制可能与PVN内谷氨酸脱羧酶67表达量下调有关.     

L—fuzzy同态下的L—fuzzy子环上的L—fuzzy理想

证明了Luzzy子环上的L－fuzzy理想在L-fuzzy同态映射下的象和逆象角是L-fuzzy子环上的L-fuzzy理想。     

L—fuzzy环与L—fuzzy理想的分解定理

给出了Ｌ－ｆｕｚｚｙ环与Ｌ－ｆｕｚｚｙ理想的几个等价刻划与几个分解定理。     

环（L—苯丙—L—脯）的合成

从Ｌ－苯丙氨酸和Ｌ－脯氨酸出发，分别保护两种氨基酸的Ｎ端和Ｃ端，将Ｎ端保护的Ｌ－苯丙氨酸与Ｃ保护的Ｌ－脯氨酸 经ＤＣＣ缩合，得直链二肽，再经Ｐｄ／Ｃ催化氢化，甲醉中回流，得环（Ｌ－本丙－Ｌ－脯），结构经ＨＲＥＩＭＳ、ＤＥＰＴ ＮＭＲ等汉谱证实。     

α-乙酰乳酸脱羧酶的提取条件与应用研究

从ＢＤ－５菌株中提取α－乙酰乳酸脱羧酶，为提高酶的得率，探讨了破壁方法、除杂蛋白、硫酸铵沉淀提取粗酶等的条件，以及提取过程中酶的损失情况和菌体存放时间对酶活力的影响等。结果表明：该菌株的菌体用超声波破壁、５０％饱和度硫酸铵除杂蛋白，８０％饱和度硫酸铵提取粗酶效果较好，菌体存放时间过长，酶活力明显降低。将用该菌株提取的酶应用于啤酒发酵中，证明有明显的降低双乙酰的效果。     

L—Fuzzy子环的L—Fuzzy理想

给出了Ｌ－Ｆｕｚｚｙ子环的Ｌ－Ｆｕｚｚｙ理想的定义及刻划,并证明了双诱导映射下,Ｌ－Ｆｕｚｚｙ子环的Ｌ－Ｆｕｚｚｙ理想仍是Ｌ－Ｆｕｚｚｙ子环的Ｌ－Ｆｕｚｚｙ理想。     

α—乙酰乳酸脱羧酶产生菌的筛选

为降低啤酒生产中双乙酰的含量,从不同土壤中分离出１２４株芽孢杆菌,经过用不同发酵培养基和啤酒中双乙酰降低试验,反复筛选,得到一株初产α－乙酰乳酸脱羟酶活性较高的地衣芽孢杆菌Ｈ６（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ Ｈ６）。认为该菌株所产酶对啤酒生产有应用价值。     

从猪毛人发中提取L—胱氨酸和L—精氨酸

L—胱氨酸和L—精氨酸是从动物毛发中提取出来的一种重要的生化物质,具有广泛的用途。L—精氨酸是专用于治疗肝硬化及因血氨升高而引起的肝昏迷药物;L—胱氨酸不仅可用于治疗肝炎及膀胱炎,而且是生产脱发再生药物的重要原料,同时又可广泛应用于化工、食品行业中。