大叶饲料槐高频再生体系建立及试管苗工厂化生产

通过叶片外植体愈伤组织诱导和直接不定芽再生途径,建立了大叶饲料槐的高频再生系统,采用正交试验筛选出愈伤组织最适诱导培养基为;MS附加0．5mg／L 6-BA和1．0mg／L NAA;愈伤组织分化最适培养基为：MS附加2．0mg／L 6-BA和0．2mg／L NAA。叶片外植体直接分化最适培养基为：MS附加2．0mg／L 6-BA和0．1mg／L NAA;试管苗在1／2MS附加0．2mg／L IBA、0．1mg／L NAA和2g／L AC的培养基上生根率高达100％,移栽成活率达90％,从而实现了大叶饲料槐的工厂化生产．     

8种基因型的高羊茅的组织培养与植株再生

以8个品种的高羊茅下胚轴为外植体，分别在诱导培养基D1、D3、D5和D9上培养，除D1培养基上的愈伤组织的出愈率为51．3％外，其他诱导培养基上的出愈率均为100％．其中在D5培养基上继代3个月左右，获得了胚性愈伤组织，此胚性愈伤组织在F1分化培养基上的分化率达到70％～80％．在较长时间的继代培养中，D3培养基可以保持愈伤组织的高分化率．     

铁线莲‘朱卡’组织培养技术及再生体系的建立

【目的】以铁线莲‘朱卡’(Clematis ‘Julka’)的带芽茎段为起始材料,通过组织培养方法建立再生体系。【方法】利用腋芽诱导—不定芽增殖—生根和愈伤组织诱导—增殖—分化—生根两种途径,建立该品种的组织培养再生体系,形成铁线莲‘朱卡’完整植株。【结果】铁线莲‘朱卡’组织培养最适宜灭菌条件为质量分数10%次氯酸钠溶液灭菌12min;带芽茎段诱导腋芽最适培养基为MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,不定芽增殖最适培养基为MS+IBA 0.20 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+GA₃ 0.2 mg/L;带芽茎段诱导愈伤组织最适培养基为MS+NAA 0.05 mg/L+6-BA 2.0 mg/L,愈伤组织增殖最适培养基为MS+NAA 0.20 mg/L +6-BA 2.0 mg/L,愈伤组织分化最适培养基为MS+NAA 0.03 mg/L+6-BA 3.0 mg/L;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.3 mg/L。【结论】首次用两种器官发生方法建立了稳定高效的铁线莲‘朱卡’再生体系。直接形成不定芽时增殖倍数可达5.52。诱导愈伤组织途径的器官发生中,愈伤组织分化率可达76.7%,分化不定芽平均数超过3。两种途径诱导生根率都在90%以上。     

百脉根植株高频再生体系的建立

以百脉根的下胚轴为外植体材料,探究不同激素种类和不同浓度对百脉根愈伤组织的诱导、分化增殖及生根的影响.结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基为:MS+2,4—D 2.0 mg/L+KT 2.0 mg/L+3%蔗糖+0.7%琼脂;诱导愈伤组织分化最佳培养基为:MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+3%蔗糖+0.7%琼脂;诱导不定芽生根的最佳生根培养基为:MS+NAA 0.01 mg/L+2%蔗糖+0.7%琼脂,生根率达100%;实验建立了一个高频的百脉根再生体系,为百脉根基因工程操作奠定了基础.     

簸箕柳组培再生体系的建立

【目的】建立簸箕柳组培再生体系,为在簸箕柳中开展功能基因组研究奠定基础。【方法】分别以簸箕柳带腋芽茎段和种子为外植体,比较不同消毒方法、基本培养基类型、光照条件及植物生长调节剂等因素对不同外植体脱分化和再分化能力的影响。【结果】簸箕柳组培基本培养基成分以MS+蔗糖(30 g/L)+Phytagel(植物凝胶)(4.4 g/L)为宜。以幼嫩茎段为外植体,最佳消毒方法为70%(体积分数)酒精处理30 s+20%(质量分数)的次氯酸钠处理10 min,适宜诱导腋芽的生长调节剂组合为6-BA(1 mg/L)+NAA(0.01 mg/L),丛生芽继代增殖的适宜生长调节剂配比为6-BA(0.5 mg/L)+NAA(0.05 mg/L),适宜腋芽生根的生长调节剂组合为IBA(0.2 mg/L)+NAA(0.03 mg/L)。以种子为外植体,最佳消毒方法为70%(体积分数)酒精处理10 s+20%(质量分数)的次氯酸钠处理2 min,光照条件下诱导愈伤组织的生长调节剂配比为6-BA(0.5 mg/L)+ NAA(0.3 mg/L),并利用6-BA(0.5 mg/L)+ NAA(0.5 mg/L)和6-BA(0.5 mg/L)+NAA(0.8 mg/L)两种组合方式交替使用进行愈伤组织的继代培养; 愈伤组织分化成芽的生长调节剂配比为6-BA(0.5 mg/L)+ TDZ(0.2 mg/L),生根培养基只需添加NAA(0.01 mg/L)。【结论】以茎段和种子作为外植体,通过不同的再生途径,均可以建立簸箕柳组织培养再生体系。     

紫花苜蓿高频再生组织培养体系建立

以8个品种的无菌实生苗子叶和下胚轴为外植体,研究了4种不同培养程序及基因型对紫花苜蓿胚性愈伤组织、胚状体诱导及成苗移栽的影响.结果显示:4种培养程序对苜蓿的出愈率影响差别不大,但不同培养程序对苜蓿的分化率和成苗率影响差异显著,其中SHK-MSO-MSO在分化率和出苗率上表现较佳;另外,不同基因型在苜蓿出愈率和成苗率上反应不显著,但在分化率上反应显著,其中中苜一号,草原2号和保定苜蓿表现较佳.     

草地早熟禾胚性愈伤组织的诱导和植株再生体系的建立

使用MS附加2,4-D作基本培养基,对草地早熟禾进行愈伤组织的诱导和愈伤组织分化成苗试验,建立了最佳的早熟禾胚性愈伤诱导和植株再生体系.早熟禾的成熟种子经过灭菌后,接种到愈伤组织诱导培养基上,置于25±2℃,黑暗条件培养约8周~9周,有胚性愈伤组织产生.然后将愈伤组织转至分化培养基上,黑暗培养一周后,再进行光照培养,约20天后开始分化出根和芽,继续培养则长成粗壮的绿色植株.2,4-D是影响愈伤形成和植株再生的关键物质.本实验结果证明,3.0mg.L-1和0.1mg.L-12,4-D是最佳浓度组合,其诱导频率和分化频率分别为67.82%和48.81%;0.5mg.L-16-BA对根和芽的分化具有促进作用.     

蒲苇愈伤组织的诱导和再生体系的建立

以蒲苇成熟种子为外植体,MS为基本培养基并附加不同激素组合,筛选出诱导蒲苇愈伤组织产生和分化的最佳培养基,成功建立蒲苇的再生体系．试验结果表明：蒲苇种子最佳灭菌方式是将种子灭菌前用无菌水浸泡24h左右,然后用75％酒精消毒20s,再用0．1％（W／V）氯化汞消毒灭菌10min．愈伤组织诱导的最佳培养基为MS＋2,4-D3．0mg/L＋6-BA0．1mg／L;愈伤组织分化的最佳培养基为MS＋6-BA 2．0mg／L＋NAA 0．1mg/L分化继代的最佳培养基为MS＋6-BA 1．5mg／L＋NAA 0．2mg/L;生根最佳培养基配方为1／2MS＋NAA 0．8mg/L＋6-BA 0．2mg／L＋（0．02％）AC．     

水稻广亲和基因互作研究中测交种的再生体系建立

研究组织培养中水稻种子胚愈伤组织的诱导与2,4－D（2,4－二氯苯氧乙酸）质量浓度变化的关系,结果表明,2,4－D质量浓度为0．1mg/L时诱导愈伤组织的效率高达88．9％,低质量浓度及高质量浓度的2,4－D则均不适宜水稻成熟胚愈伤组织的形成;在此基础上成功建立了用于广亲和基因互作研究的受体杂交水稻F1代测交种的再生体系,并探讨了从愈伤组织分化到再生植株形成过程中可能出现的一系列问题,为F1代测交种的遗传转化奠定了基础。     

粳稻成熟胚愈伤组织诱导及其分化培养体系的建立

为了促进新型高产水稻品种的抗病性,以粳稻成熟胚为外植体,通过诱导培养基、继代培养条件、分化培养路线、光照强度和蔗糖浓度的优化,建立了适合新稻18和豫粳6号的高效再生体系.结果表明:选择适宜的培养基是提高愈伤组织诱导率及愈伤组织质量的基础.新稻18和豫粳6号的水稻成熟胚诱导愈伤组织的培养基分别为MB1(MSB5+2,4-D 2 mg/L+6-BA 1 mg/L+KT 1 mg/L+ABA 1 mg/L)和MB2(MSB5+2,4-D 3 mg/L+6-BA 1mg/L+ABA 0.5 mg/L),愈伤诱导率分别达95.24%和91.07%;愈伤组织剥离后的继代培养基为MB3(MSB5+2,4-D 3.5 mg/L+6-BA 1.5 mg/L);愈伤组织的分化培养路线为三步分化法MSD0/N6B5D0→N6B5D2→MSD0,适宜的分化培养温度为33℃,光照强度为43.75μmol.m-2.s-1.新稻18和豫粳6号的愈伤分化率最高分别达到99.3%和83.33%.     

柳杉种子合子胚的愈伤组织诱导及植株再生

为探索柳杉种子合子胚的愈伤组织诱导技术,选取柳杉4个家系,采集其尚未完全成熟的种子进行愈伤组织的诱导,并经器官发生再生途径得到再生植株。利用6-BA、2,4-D等激素种类及其浓度的正交设计,研究各因素及其交互作用对柳杉种子合子胚愈伤组织诱导的影响。结果发现:柳杉4个家系的愈伤组织诱导量在8月中旬采种时呈明显上升,至8月底时各家系的子叶胚愈伤诱导率达到最高,其中57号家系愈伤诱导率最高,达92%。柳杉4个家系,在不同激素组合中愈伤诱导率存在着一定的差异。其中57号家系子叶胚在DCR+6-BA1.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L培养时,愈伤组织诱导率达到最高,且诱导出来的愈伤组织状态为白色、干燥、无针状突起,结构紧密。愈伤组织在DCR培养基上成功获得再生植株。     

花生愈伤组织的诱导及植株再生

研究花生愈伤组织的诱导及植株再生的条件．用汕油71花生幼苗上胚轴、下胚轴、子叶、幼叶等不同外植体类型进行比较,发现幼叶较易诱导愈伤;用不同激素质量浓度配比研究对花生幼叶愈伤诱导的影响,发现IAA（吲哚乙酸）对花生的愈伤诱导效果较2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）和NAA（萘乙酸）好;用不同叶龄及叶切段比较,发现以10d苗龄的叶片中部切段愈伤诱导率较高取苗龄10d的花生无菌苗的幼叶中段为外植体,置于ρ（MS＋IAA）3mg／L＋ρ（BA）1mg／L培养基中培养,30d后诱导率达到100％且愈伤呈淡绿色、半透明、疏松状．50d后转至ρ（MS＋IAA）0．5mg/L＋ρ（BA）2mg／L＋ρ（TDZ）0．5mg／L分化培养基中诱导芽（TDZ,噻重氮苯基脲）,截取诱导芽单芽,转接至根诱导培养基中。获得再生植株     

影响籼稻愈伤组织再生频率的若干因素

以籼稻品种特青的幼胚作为外植体,对影响植株再生的几个因素包括诱导培养基、预分化培养、干燥处理、通气状况和蔗糖浓度进行了研究,结果表明,ＭＳ＋２, ４－Ｄ ２ｍｇ／Ｌ是较为合适的诱导培养基,预分化培养,干燥处理,良好的通气环境以及降低分化培养时的蔗糖浓度均有助于愈伤组织的分化．     

影响籼稻愈伤组织再生频率的若干因素

以籼稻品种特青的幼胚作为外植体,对影响植株再生的几个因素包括诱导培养基、预分化培养、干燥处理、通气状况和蔗糖浓度进行了研究．结果表明,MS＋2,4－D2mg／L是较为合适的诱导培养基,预分化培养,干燥处理,良好的通气环境以及降低分化培养时的蔗糖浓度均有助于意伤组织的分化．     

特种工业用油料作物Lesquerella fendleri的愈伤组织诱导和植株再生

以Lesquerella fendleri下胚轴和子叶作为外植体,研究了不同的激素浓度和组合对于愈伤组织诱导和植株再生的影响．研究表明,L．fendleri下胚轴和子叶在许多激素组合的培养基上都能诱导出愈伤组织．当6-BA的浓度从0提高到1．0mg．L^-1,下胚轴的愈伤组织诱导频率也从35．14％提高到97．30％,进一步提高6-BA浓度会降低下胚轴的愈伤组织诱导频率;将NAA浓度从0提高到0．2mg．L^-1,下胚轴的愈伤组织诱导频率从70％提高到76．76％,进一步提高NAA浓度则降低下胚轴的愈伤组织诱导频率;将2,4-D的浓度从0提高到0．5mg．L^-1,下胚轴的愈伤组织诱导频率从64．29％提高到85．00％,进一步提高2,4-D浓度会降低下胚轴的愈伤组织诱导频率．当6-BA的浓度为0．5mg．L-时子叶的愈伤组织诱导频率最高,达到80．00％;提高NAA浓度可以提高子叶愈伤组织诱导频率,提高2,4-D浓度则会降低子叶的愈伤组织诱导频率．绝大多数愈伤组织在含有6-BA和NAA的MS培养基上都能够分化出许多不定芽．不定芽在MS基本培养基能够诱导生根,生根率在80％以上．     

玉米幼胚高培养力基因型的筛选

以132个玉米基因型的幼胚为外植体,研究了基因型对幼胚愈伤组织诱导和继代的影响及基因型、分化培养基成分和液体培养基振荡处理对愈伤组织再生苗率的影响。结果表明:郑22×昌7-2、综3×HiⅡA、97-7×郑22等24个基因型产生了容易再生植株的Ⅱ型愈伤组织,其中仅有郑22×昌7-2、综3×HiⅡA、97-7×郑22等11个基因型再生出了植株;郑22×昌7-2、综3×HiⅡA和97-7×郑22这三种基因型再生苗率较高,是较为合适的幼胚培养材料;分化培养基成分对再生苗率有明显影响;液体培养基振荡处理有利于植株再生。     

NaCl对高蛋白糯稻品系H1701胚培养力的影响

以糯稻Ｈ１７０１为材料,通过胚培养诱导愈伤组织,继代培养并分化,实验结果表明,ＮａＣｌ对胚性愈合伤组织的诱导和生长有不同程度的抑制作用,ＮａＣｌ浓度越高,抑制越明显,转人发化培养基后以后,除含１０ｇ／Ｌ及以上浓度ＮａＣｌ的诱导培养基中愈伤组织分化为零外,其余均能分化出苗,其中,含ＮａＣｌ２ｇ／Ｌ的诱导培养基中诱导出愈伤组织分化率最高。     

华北蓝盆花再生体系的建立及其黄酮类化合物研究

为了有效保护和利用野生华北蓝盆花(Scabiosa tschiliensis Grunning)资源,通过离体培养技术建立了华北蓝盆花再生体系.研究结果表明:以子叶为外植体,诱导愈伤组织较适宜的培养基为M S+ TDZ1.0 mg/L,诱导率达82.74％;诱导不定芽的培养基为MS+6-BA 4.0 mg/L,诱导率为86.30％;生根培养基为MS+IBA 2.0 mg/L,生根率为73.85％.愈伤组织、野生植株总黄酮含量较高,其醇提物具有较强的抗氧化活性,对DPPH自由基具有很高的清除率.