草鱼碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质研究

用Tris—HCl缓冲液抽提，硫酸铵分级沉淀，DEAE-纤维素和葡聚糖凝胶层析，从草鱼肠中提取出碱性磷酸酶（ALP）．提取倍数为6．74，比活为684U／mg蛋白．酶液经PAGE呈现单一带，该酶催化对硝基苯磷酸二钠（pNPP）水解反应的最适pH值为10．41，最适温度为27℃，Km值为1．01mmol／L，酶的热稳定性与pH稳定性研究表明：该酶在pH6．6～11．5区间和在温度低于45℃下稳定．研究金属离子对酶活力影响的结果表明：一价金属离子Li^＋、Na^＋和K^＋对酶活力没有影响；二价金属离子Mg^2＋、Mn^2＋和Co^2＋对酶有不同程度的激活作用；Zn^2＋对酶有抑制作用．     

黑眉锦蛇小肠碱性磷酸酶的分离纯化及其部分性质研究

作者对黑眉锦蛇小肠碱性磷酸酶（AKP）进行了分离纯化,对其部分性质进行研究的结果表明,Ser,Thr,Lys和Trp残基是黑眉锦蛇小肠AKP的必需功能基团,部分二硫键对保护酶的催化功能也是必需的。     

家蚕碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质

经10％～50％硫酸铵分级沉淀分离，DEAE—Sepharose离子交换柱层析,Sephacryl S-200凝胶过滤纯化,从家蚕（Bombyx mori）肠液中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶、该酶提纯倍数为464倍，比活力为3936U／mg、酶学性质和动力学性质研究表明，该酶催化磷酸苯二钠的水解反应，最适pH值为10.5，pH小于7.5和大于11均不稳定；最适温度为40℃，温度高于50℃不稳定；米氏常数Km值为1．25mmo1／L.     

鲍鱼碱性磷酸酶的分离纯化和性质研究

以杂色鲍(Haliotis diversicolor)内脏为原料,经Tris HCl缓冲液(pH 7.5,含0.1mol/L NaCl)抽提,正丁醇处理,硫酸铵分级沉淀分离,DE 32离子交换、Sephadex G 150分子筛、DE 32纯化,得到电泳单一纯的碱性磷酸酶制剂,比活力为1 226 U/mg.酶学性质和动力学性质研究表明:该酶催化对硝基苯磷酸水解反应的最适 pH值为 10.08,最适温度为48℃.米氏常数Km 值为0.80 mmol/L,Vm 值为20.1 mmol/L·min-1(pH 10.0,37℃).酶的热稳定性研究表明:该酶在pH 7~11区间和在温度低于55℃下稳定.金属离子对酶活力的影响结果表明:Li+、Na+和K+对酶活力没有影响,Mg2+、Ca2+、Ba2+、Mn2+和Co2+对酶有不同程度的激活作用,而Cu2+、Cd2+、Zn2+、Hg2+、Ag+、Bi2+和Pb2+等对酶起抑制作用.     

长毛对虾碱性磷酸酶性质

从长毛对虾内脏物分离提纯碱性磷酸酶，经快速蛋白液相色谱（ＦＰＩＣ）检验为单一蛋白纯．研究该酶的性质，酶的紫外吸收特征峰在２７８ｎｍ处，荧光激发峰在２８２ｎｍ处，发射光谱特征峰在３４０ｎｍ处．酶的分子量为８２０００道尔顿．酶水解ＰＮＰＰ的最适温度为４７℃、最适ｐＨ为８．２．在３７℃、ｐＨ８．３下，酶的Ｋｍ值为８．０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ．Ｍｇ２＋对该酶有激活作用，Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋甲醇、乙醇，乙二醇则表现抑制作用．Ｈｇ２＋的抑制作用表现为反竞争性类型，其抑制常数为９．０×１０－５ｍｏｌ／Ｌ．     

一种麦芽酸性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

经硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose CL 4B和DEAE-Sepharose CL 4B离子交换柱层析等步骤,从麦芽中分离提纯到一种酸性磷酸酶(ACPase,E．C．3．1．3．2),纯化倍数为33．06,酶液比活为88．27 U/mg．通过动力学方法测得其最适pH为5．4,酸碱稳定性较差,仅在pH 6．0左右的缓冲液中较稳定;最适温度为50 ℃,40 ℃以下有较好的稳定性;在最适条件下,该酶催化pNPP的米氏常数(Km)为4．696×10-4 mol/L．同时研究了一些金属离子和有机化合物对该酶     

金属离子对鲍鱼碱性磷酸酶活力的影响

碱性磷酸酶(ALP,EC3.1.3.1)是一种金属酶,其结构的维持和酶活性的表现均需金属离子.本文研究了几种金属离子分别对鲍鱼ALP活力的影响.结果表明,Li ,Na 和K 等正一价碱金属离子对酶活力没有任何效应;碱土金属离子Mg2 ,Ca2 和Ba2 对酶有激活作用,其激活程度依次为:Mg2 >Ca2 >Ba2 ,而且Mg2 在5.0mmol/L时可以使酶活力提高267%;在过渡金属离子中,Zn2 ,Mn2 ,Co2 和Cu2 对酶的效应不同,Zn2 、Cu2 为抑制作用,而Co2 、Mn2 表现为激活作用;重金属离子Hg2 、Pb2 、Ag 和Cd2 对酶有抑制作用,其中Hg2 的抑制效应最强,1.0mmol/LHg2 可使酶活力抑制94%.研究Mn2 和Cu2 的抑制类型表明,Mn2 为混合型激活作用,而Cu2 对酶的抑制类型为非竞争性抑制作用,其抑制常数(KI)为0.316mmol/L.     

赤子爱胜蚓碱性磷酸酶的酶学性质研究

以赤子爱胜蚓(Eisenia foetida sarigng)整体为材料，采用正丁醇抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素柱层析、葡聚糖凝胶过滤等方法分离纯化得到蚓体中的一种碱性磷酸酶(AKP)并对其性质进行研究。经测定其分子量为126000Da，富含谷氨酸、脯氨酸。以磷酸苯二钠为底物，测其最适温度为37℃，最适pH为10．10，Km值为1．15mmol／L，Mg^2 、Ca^2 、Mn^2 对酶有激活作用，KH2PO4、ME、EDTA、L-Cys、DFP则对AKP有抑制作用。     

3种淡水育珠蚌碱性磷酸酶（ALP）比较酶学的初步研究

分别从三角帆蚌、褶纹冠蚌、背角无齿蚌的外套膜中部分提取了一种碱性磷酸酶，并对这３种来源的ＡＬＰ进行了比活力和动力学性质的比较研究，经过相同提纯步骤后，外套膜ＡＬＰ比活顺序是褶纹冠蚌＞背角无齿蚌＞三角帆蚌；三角帆蚌ＡＬＰ作用于底物磷酸苯二钠的最适ｐＨ值为９．４０，最适温度为３７℃，米氏常数Ｋｍ为０．５３ｍ ｍｏｌ／Ｌ；褶纹冠蚌ＡＬＰ的最适ｐＨ值为９．１２，最适温度为４０℃，米氏常数Ｋｍ为１．７２ｍ     

重金属 Cu 对土壤碱性磷酸酶活性的影响?

采用室内恒温恒湿培养方法,研究不同深度(表层、50、100cm)土壤样品中重金属Cu对碱性磷酸酶(ALP)活性及其动力学特征的影响.结果表明:ALP活性随着培养时间的延长而增加;相同培养时间条件下,随着Cu质量分数w的增加,表层、50cm样品的土壤ALP活性呈现先升高后降低的变化趋势,100cm样品的土壤ALP活性减小;不同土壤ALP活性变化存在差异,这与各土壤样品的理化性质,尤其是有机质含量不同有关;w(Cu)与ALP的Vmax、Vmax/Km显著相关,可以考虑将ALP催化动力学参数Vmax、Vmax/Km值作为辅助参考指标用作考察土壤重金属Cu污染水平;金属Cu对ALP的作用先是非竞争性抑制,后是竞争性抑制,表现出一种混合抑制类型.     

顺序注射荧光法测定生鲜牛奶中碱性磷酸酶

以4-甲基伞形酮磷酸酯(4-MUP)为碱性磷酸酶(ALP)的底物,通过顺序注射荧光法检测乳制品中ALP的活性,进而对巴氏杀菌水平进行评价.结果表明,在最佳条件下相对荧光强度与ALP活性在50～1 000 mU/L范围内呈线性关系,其回归方程为△F=143.4CALP+6.859(r2=0.998 8),相对标准偏差为2.3％(200 mU/L,n=11),检出限(n=11)为14.0 mU/L,分析频率为15 h-1.方法自动化程度高、试剂试样用量少,将其应用于鲜奶和巴氏灭菌奶中ALP活性测定,准确性较好,加标回收率在90.01％～99.95％.     

鸡肝碱性磷酸酶提取及在线固定化研究

分别用有机溶剂沉淀法和盐析法从大骨鸡肝中提取出碱性磷酸酶,并考察了提取酶液的酶促反应动力学性质.在此基础上,利用顺序注射系统将提取酶在线固定于XC—72导电炭黑表面,制备了固定化碱性磷酸酶.结果表明,大骨鸡肝碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠分解的最佳pH=10.8,最适温度为50℃,米氏常数为1.62 mmol/L.相比游离酶,所得固定化酶的比活力显著提高.     

基于金纳米线构建电化学传感器间接检测碱性磷酸酶活性

在临床实践中,碱性磷酸酶（ALP）是最常检测的酶之一,已被广泛用作肝病、骨病、乳腺癌、前列腺癌以及糖尿病等多种疾病的重要检测指标.通过自组装方法在氧化铟锡（ITO）导电玻璃上制备金纳米线（AuNWs）,利用4-巯基苯甲酸（4-MBA）修饰AuNWs,对其进行改性,与铜离子（Cu²⁺）螯合形成Cu²⁺-AuNWs/ITO电极.在ALP活性检测中,电解液中的焦磷酸根阴离子（PPi）与电极表面Cu²⁺结合,湮灭了Cu²⁺的电化学信号.ALP的加入使底物PPi水解并释放出Cu²⁺,电化学信号增加.构建的Cu²⁺-AuNWs/ITO电极对ALP活性检测范围为60~180 U·L^-1,且抗干扰性能良好.     

长毛对虾碱性磷酸酶功能基团的研究

用对－氯汞苯甲酸修饰该酶分子中的巯基，酶活力不受影响，说明该酶不是“巯基酶”．用Ｎ溴代琥珀酰亚胺修饰酶后，活力完全丧失，修饰后的酶在２７５ｎｍ处的紫外吸收峰完全消失，３４０ｎｍ处荧光发射峰也逐渐下降至完全淬灭，说明色氨酸残基是酶活性必需基因之一．用甲醛、醋酸酐修饰氨基，溴代乙酸修饰咪唑基也可以使酶活力完全丧失，说明赖氨酸残基及组氨酸残基也是酶活性功能基因．用乙酰丙酮修饰精氨酸残基，酶活力下降了５０％，精氨酸残基可能与维系酶分子构象有关．     

不同发育期牦牛血清钙、无机磷和碱性磷酸酶的测定及分析

对同一海拔地区不同发育期牦牛血清钙、无机磷含量和碱性磷酸酶活性进行测定。结果:1日龄和1月龄血清钙含量较高,6月龄和成年组牦牛血清钙含量降低,且明显低于普通牛(P<0.05),导致血清钙与无机磷之比较低;6月龄血清无机磷含量显著低于其余年龄组(P<0.05);游离钙由1日龄的1.48±0.16 mmol/L降低到成年组的0.43±0.02 mmol/L(P<0.05);幼龄犊牦牛碱性磷酸酶显著高于成年组,由1日龄的708.1±202.6 U/L降低到成年组的267.2±123.5 U/L(P<0.05)。结果表明:犊牦牛在生长发育期普遍存在缺钙和血清钙与无机磷比例失调的问题。     

中国大鲵(Andrias davidianus)二十四种组织器官的碱性磷酸酶(AKP)初步分析

用酶的原位复性电泳方法分析了中国大鲵二十四种组织器官的碱性磷酸酶。结果表明,二十四种组织器官中都有碱性磷酸酶存在,其中230和200 KD的碱性磷酸酶占优势;不同组织器官的碱性磷酸酶活性有差异,心脏中活性最强,眼球中活性最弱;在同一组织中,230和200 KD的碱性磷酸酶活性也有差异。另外,在肾脏和心脏中还含有一种250 KD的碱性磷酸酶,推测与器官的功能有关。     

Effects of simulated microgravity on the alkaline phosphatase activity and intracellular calcium concentration of cultured chondrocytes

The effects of simulated microgravity on matrix mineralization of chondrocytes were examined using cultured chicken embryonic chondrocytes as the model. In four days, there was a time course decrease in alkaline phosphatase activity of chondrocytes, a marker of matrix mineralization. Meanwhile, in two days, there was a significant drop in intracellular calcium concentration in contrast to the control. These results indicate that simulated microgravity can suppress matrix calcification of cultured chondrocytes, and intracellular calcium may be involved in the regulation of matrix calcification as the second messenger. Yang Shuzhang made the same contribution to this work as the first author