非特异性IgG含量对EIA法检测抗-HCV抗体的干扰现象

用酶免疫分析法(EIA)研究了人血清非特异性IgG 在抗-HCV抗体检测中的干扰作用.结果显示:随着正常健康人血清标本(阴性血清)中I gG量的增加,其OD值随之增高,当标本中的IgG含量增加至一定值时即产生假阳性结果.此结果表明非特异性IgG与支持材料(酶标板)非特异性结合可造成对EIA实验结果的干扰作用.这就解释了一些学者报导类风湿性关节炎、自身免疫性肝病、高血清免疫球蛋白血症等患者用EIA法检测抗-HCV时易出现假阳性的原因.     

ELISA方法检测人外周血中的IL-18

建立了一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的酶联夹心ELISA方法,可定量检测人外周血中的白细胞介素18(hIL-18)。将体外重组表达的hIL-18蛋白作为抗原免疫新西兰家兔,纯化兔血清中的抗体IgG,用辣根过氧化物酶(HRP)标记,检测正常人血清样本中的hIL-18。此方法灵敏度高,可重复性良好,且结果数据化。适合于IL-18的临床定量检测,为进一步开展研究提供了有力的工具。     

ELISA定量测定单克隆抗体方法改进

本文介绍了以亲和层析纯化的免抗鼠IgG类抗体及其酶标物作为捕获及检测抗体进行鼠杂交瘤培养上清及腹水中IgG类单克隆抗体的ELISA定量测定方法。结果表明:小牛血清(BS)、免血清(RS)、马血滑(HS)、人血清(HuS)及非抗体产生细胞的培养上清对本项εLISA实验无干扰,使测定的结果较可靠,测定的鼠IgG各亚类的标准曲线的线性范围均在5～100ng/ml之间,因此这个快速、可靠的方法可为鼠IgG类单克隆抗体的定量测定提供一种实用的手段。     

抗弓形虫IgY抗体在酶免疫试验中的应用

IgY是从鸡蛋黄中提取的免疫球蛋白,不但具有高免疫活性,而且不受类风湿因子、血清补体等干扰,在免疫学试验中具有优越性。用纯化的弓形虫虫体抗原免疫白菜杭鸡获得特异性的IgY抗体,用辣根过氧化物酶标记后与抗人IgM单抗配伍建立捕获法酶免疫试验,与同类试剂对照,平行检测192份临床血样,检测结果二者吻合,表明该IgY具有良好的特异性和敏感性。     

双抗原夹心ELISA检测抗鳗弧菌抗体效价的研究

建立检测抗鳗孤菌抗体效价的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。采用高碘酸盐法对鳗孤菌抗原进行辣根过氧化物酶标记,并通过血清抗体效价比较双抗原夹心ELISA与微量凝集法的优越性。结果显示：标记蛋白含量为2．5mg的抗原所需HRP的最适量为0．20rag。以超声破碎后鳗弧菌离心上清为最适标记抗原,其工作浓度为12．25mg／L．并且双抗原夹心ELISA操作简易具有较高的敏感性和特异性。     

IB-ELISA诊断试剂的研究

目的　为鸡群日常监测传染性支气管炎病毒 (IBV)抗体提供一个方便、特异、快速的检测方法。方法　利用 9日龄SPF鸡胚尿囊腔接种培养IBV ,以及鸡胚成纤维细胞传代培养IBV ,经纯化后 ,测定蛋白含量 ,作为包被抗原 ,利用过碘酸盐法标记兔抗鸡IgG作为酶结合物 ,用TMB作为显色剂 ,建立起酶联免疫吸附试验 (ELISA)技术 ,检测血清样品中传染性支气管炎抗体。结果　上述两种方法制备的抗原皆可用于此试验 ,与NDV、MDV、IBDV、AIV、APIV、REV、ILTV、IC、MG、MS等抗血清无交叉反应 ,与IDEXXIB ELISA比较 ,结果吻合较好。结论　本研究制备的IB ELISA诊断试剂 ,可用于日常监测传染性支气管炎病毒抗体     

AOZ化学发光酶联免疫检测试剂盒的研制

以呋喃唑酮代谢物(AOZ)和卵清蛋白(OVA)偶联物为包被抗原,与AOZ样品或标准品竞争呋喃唑酮多克隆抗体,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔抗体(IgG),研制AOZ的化学发光酶联免疫检测试剂盒。以鲁米诺-过氧化氢为发光底物进行化学发光酶联免疫检测。结果表明:试剂盒分析灵敏度为0.005μg/L,比传统的ELISA试剂盒高出一个数量级,拥有更低的检测限,批内变异系数为2.1%～7.9%,批间变异系数为5.2%～9.5%,批内回收率为93%～113%,批间回收率为94%～110%。与呋喃西林代谢物(SEM)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)及呋喃妥因代谢物(AHD)之间无明显交叉反应。此试剂盒可用于水产品中AOZ的检测。     

兔抗PEB1多克隆抗体的制备及鉴定

摘要：【目的】利用纯化的空肠弯曲菌表面蛋白PEB1,制备其多克隆抗体。【方法】用PEB1蛋白作为抗原免疫兔,分离血清得到兔抗PEB1多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价,并用Western-Blotting验证。【结果】PEB1蛋白免疫兔后,得到了兔抗PEB1多克隆抗体,间接ELASA法检测表明兔抗PEB 1血清效价达到1：10 000,Western印记检测表明,该抗体能与PEB1蛋白发生特异性结合,其特异性与敏感性均较好。【结论】获得了高效价的PEB1多克隆抗体。     

双抗体夹心ELISA检测禽流感病毒方法的初步建立

用饱和硫酸铵初步纯化的兔抗AIV-H9高免血清中的IgG作为包被抗体,利用抗AIV-NP-7B4单抗作为ELISA的第二抗体,建立了检测禽流感病毒(AIV)抗原的双抗体夹心ELISA方法. 经方阵滴定试验测定反应的最佳工作条件为:兔抗AIV-H9高免血清IgG包被稀释度为1: 8 000(浓度为3.531 ug/mL),抗AIV-NP-7B4单抗腹水最佳使用稀释度为1: 800,酶标二抗的工作浓度为1: 4 000. 与其他禽易感病毒(NDV、IBV、EDS-76V)等均没有交叉反应. 结果表明,本方法具有很高的特异性.     

新型肾综合征出血热EIA诊断试剂盒的研制

用多肽合仪合成汉坦病毒核衣壳蛋白（NP）(aa17－66）50个氨基酸残基的核心序列,以此为抗原,建立特羿性检测抗汉坦病毒IgG和IgM的酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）,通过实验发现这一序列具有较强的抗原性,研制出了以合成肽为抗原的新型牧场异性检测抗汉坦病毒IgG和IgM的诊断试剂盒,通过对肾综合征出血热抗体阳性血清的检测,效果良好。     

抗中性粒细胞胞浆抗体对溃疡性结肠炎诊断价值的研究

目的 建立固定中性粒细胞－ＥＬＩＳＡ，分析血清ＡＮＣＡ对ＵＣ的诊断价值。方法 采用固定中性粒细胞－ＥＬＩＳＡ法检测２５份溃疡性结肠炎血清、２６份细菌性结肠炎血清、１５份混合类型腹泻血清和５０份正常对照血清中的ＡＮＣＡ，对各组血清的吸光度Ａ值进行统计分析。结果 ＵＣ组ＡＮＣＡ与其它对照组ＡＮＣＡ之间的差异非常显著（Ｐ〈０．００５）。ＵＣ组Ａ值超过正常对照组Ａ值２ＳＤ以上病例达８０％，诊断特异性达８９     

唾液IgG抗体测定在幽门螺杆菌感染诊断中的价值

目的 :探讨唾液抗幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)IgG测定对Hp感染的诊断价值。方法 :用ELISA法测定67例Hp阳性及20例Hp阴性患者的唾液内抗HpIgG ,并与血清抗体测定结果比较。结果 :唾液抗HpIgG对Hp感染的敏感性为91 1% ,特异性为85 0% ,准确性为89 7 % ,与血清测定结果接近(分别为92 6 % ,90 0%和91 9 %)。结论 :唾液抗Hp抗体测定对Hp感染的诊断有较好的应用价值。     

抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究——三、应用酶标单抗ELlSA竞争法检测抗T.e.抗体的实验研究

应用酶标单抗(HRP-MCAbⅡG_6)ELISA竞争法对7只感染伊氏锥虫的家兔血清进行了检测,结果表明该法具有特异、敏感、快速等优点.与间接ELISA检测结果相比呈现明显的正相关,两种方法检测相符合,因此本法可作为流行病学调查和血清学诊断的工具.     

用酶联免疫吸附试验诊断蓝氏贾第鞭毛虫病免疫价值的研究

用蓝氏贾第鞭毛虫纯培养虫株和超声粉碎可溶性虫体部分作为抗原,采用ELISA方法检测人体感染蓝氏贾第鞭毛虫血清免疫抗体并讨论其寄生虫学诊断价值．检测65份成人贾第虫病血清,其中55份IgG和／或IgA阳性,阳性率84．62％．20份10岁以下儿童贾第虫病人血清无1份阳性．结果提示蓝氏贾第鞭毛虫感染产生的体液免疫反应存在有年龄依赖性,酶联免疫吸附试验用于蓝氏贾第鞭毛虫病免疫诊断具有局限性．     

应用酶联免疫吸附试验检测山羊日本血吸虫病抗体的研究

本研究首先制备了日本血吸虫水溶性止卵抗原和兔抗山羊酶标复合物。经测试确定了:抗原的最适包被浓度(5ug/ml);酶标复合物的最佳工作浓度(1:2500)以及血清不同稀释度下的阴—阳临界值,从而成功地建立了山羊日本血吸虫病抗体的酶联免疫检测法。以1:80稀释作参考,对25份标准阳性血.清和19份标准阴性血清的考核结果证实:在最适条件下,该法特异性,敏感性良好,具有临床和科研应用价值。随后,应用酶联免疫吸附试验对7只实验山羊血吸虫病抗体消长作了长期、细致地观察,结果表明:特异性IgG最早于尾蚴感染后第40天出现;吡喹酮治疗后,7个月消失。     

花椰菜天然钙调素抗体的特性及其ELISA定量法的建立

钙调素是一种具有多种调节功能的钙结合蛋白质，其免疫原性很弱，本文采用两次基础免疫和多次加强免疫的方法，获得了免疫花椰菜天然钙调素抗血清，用免疫双扩散法鉴定，其效价为１：３２钙调节不易与固相载体结合，我们先用０．２％戊二醛处理聚苯乙烯板载体，再用于包被钙调素，在上述基础上建立了定量测定植物钙调素的竞争性酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）技术及检测动物血清中抗钙调素抗体的间接ＥＬＩＳＡ技术。     

抗爪蟾角蛋白单克隆抗体的研究

本实验以非洲爪蟾(Xenopus laevis)成体皮肤角蛋白免疫的BALB/c鼠脾细胞与小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞在PEG的作用下进行融合,经HAT选择培养、ELISA筛选、反复克隆化及冻存复苏,获得四株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。对其中一株杂交瘤细胞KD_(10)及其分泌的抗体进行了较全面的研究。     

腐食酪螨和粉尘螨的共同抗原

目的：探讨腐食酪螨和粉尘螨之间是否存在共同抗原.方法：对粉螨过敏患者进行腐食酪螨和粉尘螨特异性IgE相关性分析，用SDS-PAGE分析腐食酪螨和粉尘螨变应原，并对螨特异性IgE阳性血清进行免疫印迹试验及抑制试验.结果：42例粉螨过敏患者血清粉尘螨和腐食酪螨特异性IgE光密度值相关性较高（r=0.641 5，P＜0.01）.SDS-PAGE分析知腐食酪螨和粉尘螨变应原分子量均为10 kD～110 kD.免疫印迹抑制试验表明，腐食酪螨变应原可与粉尘螨变应原发生交叉反应.结论：腐食酪螨和粉尘螨间存在共同抗原.     

五种疟原虫红内期蛋白的SDS—聚丙烯酰胺电泳

本文用１％ＮＰ－４０提取五种疟的虫（间日疟原虫、恶性疟原虫、食蟹猴疟原虫、伯氏疟原虫、约氏疟原虫）红内期可溶性蛋白组分。各种蛋白提取物经ＳＤＳ－聚丙烯安电泳后氨银染色，所得蛋白图谱经光密度扫描进行分析。实验结果表明五种疟原虫蛋白区带数目及位置各不相同，但两条分子量分别为７２ＫＤ和６４ＫＤ蛋白为五种疟原虫共有区带。在五种疟原虫中，以伯多疟原虫与约氏疟原虫蛋白谱最类似，表明二者种间进化关系较接近。     

Expression of the HTLV-III envelope gene by a recombinant vaccinia virus

The discovery that the aetiological agent of acquired immune deficiency syndrome (AIDS) is a retrovirus, referred to as human T-lymphotropic virus type III (HTLV-III) or lymphadenopathy-associated virus (LAV) (for review see ref. 1), has raised the possibility of developing a vaccine. In this regard, the envelope (env) proteins of murine retroviruses can induce protective immunity in mice. The HTLV-III env gene specifies a primary polypeptide of approximately 860 amino acids that is glycosylated to form a precursor of relative molecular mass (Mr) 160,000 (gp160), which gives rise to mature membrane-associated proteins of Mr 120,000 (gp120) and 41,000 (gp41). The HTLV-III env gene has been expressed in Escherichia coli and by simian virus 40 (SV40) vectors but formation of the authentic proteins has not been demonstrated. Here, we describe the expression of the complete env gene by a vaccinia virus vector. Evidence is presented that synthesis, glycosylation, processing and membrane transport of the env polypeptide occurred without other HTLV-III gene functions; the env protein was recognized by sera from unrelated AIDs patients; and a single vaccination with the infectious recombinant vaccinia virus induced antibodies to gp120 in mice.