蛋白质印迹技术在生物医学中的应用方法

蛋白质印迹（Westem blot）技术是通过聚丙烯酰胺电泳根据分子量大小分离蛋白后转移到杂交膜上，然后通过一抗／二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。蛋白质印迹技术进行蛋白质分析最流行和作成熟的技术之一，超过60％的生命科学工作者使用该方法。     

泛素-蛋白水解酶复合体通路在小鼠精子变态中的作用

应用重力沉降法分离睾丸各层细胞,通过蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫迹观察各种生精细胞中泛素结合蛋白的表达规律,并通过免疫组织化学方法对其进行组织和细胞水平的定位,表明,在圆形精子和长形精子细胞中泛素结合蛋白增加,在成熟精子中量较低,在精原和精母细胞中量微弱。总蛋白电泳的结果表明,在精子变态过程中蛋白 变化以长形精子细胞转变为成熟精子阶段最为剧烈,其间许多蛋白消失同时半随一些新蛋白的出现,此阶段消     

抗人PD-1高亲和力抗血清的制备及其在PD-1免疫印迹分析中的应用

利用纯化的可溶性人PD-1胞外域(sPD-1)蛋白为免疫原免疫小鼠,获得抗血清.免疫印迹显示该抗血清与原核表达的sPD-1有特异性反应,但与某些菌体蛋白存在交叉反应.经菌体蛋白吸附法处理后,交叉反应明显减弱.以商业化抗人PD-1抗体和小鼠sPD-1抗血清分析经亲和层析富集的活化的Jurkat T细胞表达的PD-1,只有自制的抗血清鉴定到特异反应条带,其表观分子质量为49 ku.     

人白细胞介素7重组蛋白原核表达载体在大肠杆菌中的表达和鉴定

目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定.方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条件,利用免疫印迹鉴定重组蛋白.结果:重组载体经DNA测序显示包含正确的rhIL-7编码序列,重组载体转入大肠杆菌后,经IPTG诱导后外源蛋白表达,相对分子质量为17 400,与IL-7理论分子质量一致;免疫印迹显示,外源蛋白可以被人IL-7特异性抗体识别,表明在原核表达的外源蛋白是rhIL-7.rhIL-7主要表达于包涵体中,包涵体表达优化条件为:温度为37 ℃、IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为4 h.结论:成功的构建了rhIL-7的原核表达载体.     

FEZF1在结直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达及临床意义

本文旨在探究FEZF1蛋白在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达和其临床意义.通过免疫组化实验和Western Blot实验以及细胞实验,发现FEZF1在结直肠癌组织中低表达,并且其表达与肿瘤淋巴结转移(tumor node metastasis,TNM)分期具有显著相关性,在FEZF1低表达时,RKO细胞增殖和迁移能力提高,FEZF1高表达时RKO细胞增殖能力减弱.本研究证明了FEZF1是结直肠癌中的一个低表达蛋白,其表达与结直肠组织癌变的发生、发展相关,并且FEZF1会抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移.     

SWAP-70在小鼠正常动情周期和围植入期子宫中的表达及其调节

SWAP-70是鸟苷酸交换因子家族成员之一，是PI3K介导的酪氨酸磷酸化受体下游通路的信号分子之一. 以往的研究及我们的前期工作初步表明它在小鼠子宫和恒河猴胚胎植入位点有高表达，提示此分子可能参与了胚胎植入的调节. 为此，本研究在小鼠模型中，采用原位杂交、免疫组化和半定量RT-PCR方法，系统地研究了SWAP-70在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和动情周期子宫中的表达及其受雌、孕激素的调节. 结果表明SWAP-70在植入位点有非常显著的高表达，其mRNA和蛋白分布于胚泡以及对系膜侧的腔上皮细胞和临近胚泡的子宫基质细胞，而在非植入位点表达强度很弱；在妊娠第7天和第9天的母胎界面上，滋养层巨细胞、迷走滋养层和海绵滋养层都维持较强的SWAP-70表达；正常动情周期中，SWAP-70在动情期子宫中表达明显上调；卵巢切除模型显示雌激素显著上调SWAP-70的表达，孕激素能够阻断雌激素的作用. 以上结果提示，SWAP-70可能参与胚胎植入过程中多种细胞行为的调节，如胚泡黏附、基质细胞的增殖与蜕膜化以及滋养层细胞的浸润和分化过程，同时在动情周期子宫内膜细胞功能调控中发挥一定作用.     

大豆黄酮在D半乳糖致衰老小鼠肝组织氧化损伤中的保护作用

探讨大豆黄酮在D半乳糖致衰老小鼠肝组织氧化损伤中的保护机制．将昆明系小鼠随机分成D半乳糖致衰老对照组、生理盐水对照组、大豆黄酮大剂量组、大豆黄酮小剂量组．检测肝脏中MDA的含量,SOD和GSH—Px的活性,Bcl-2和Bax的转录水平,以及Caspase-3的表达水平．实验显示,大豆黄酮可减少D半乳糖致衰老小鼠肝脏中MDA的含量,并可提高肝组织中SOD,GSH-Px的活性;能明显增加Bcl-2的转录水平,降低Bax的转录水平和Caspase-3的表达水平;且大豆黄酮大剂量组和小剂量组在Bcl-2的转录水平上表现出一定的剂量效应．结果表明,大豆黄酮能清除肝组织内过多的氧自由基,进而抑制过氧化反应后的细胞凋亡损伤,对衰老小鼠的肝组织具有一定的保护作用．     

概率分析法和灵敏度分析法在岩质边坡稳定性中的应用

随着城市的建设与发展,也需要对城市中岩质边坡稳定的风险评估进行不断的研究。对某城市住宅区附近的边坡,运用基于不连续岩土体材料的基本属性和岩体的地质力学参数,评估了对岩质边坡稳定性影响最大的参数以及边坡的失效概率。根据确定性分析和概率分析法分析,最可能会导致平面滑动而破坏。此外,利用敏感度分析法对各影响因素之间的关系及其对安全系数的影响进行了分析。结果表明:边坡坡角、孔隙水压力和节理组产状对安全系数的影响很大,不同的参数和研究区安全系数之间属于非线性关系,继而提出提高城镇中岩质边坡稳定性的有效方法。     

免疫基因和代谢基因 在胃癌患者预后分析中的比较研究

胃癌是1种预后效果较差且预后分析涉及许多因素的恶性肿瘤,其中免疫基因和代谢基因都与胃癌的预后密切相关.首先利用LASSO回归构建预后风险评分模型,经过一系列的图表对比研究后发现利用免疫基因能更好的分析胃癌患者的生存状况,有较高的准确性(AUC=0.799).另外,通过寻找ROC曲线中的最佳截断值(cutoff=-0.0...     

突变型P53和肿瘤易感基因101在肺癌组织中的表达及意义

探讨了P53基因突变对肺癌组织中TSG101基因的影响,结果是:TSG101在正常组织中呈强阳性表达100%(30/30),在高分化肺癌(包括肺鳞癌和肺腺癌)组织、低分化肺癌组织、淋巴结转移组织的表达分别为77.97%(92/118)、25.37%(17/67)、18.95%(18/95);P53的表达则相反,在正常组织、高分化肺癌组织、低分化肺癌组织、淋巴结转移组织的表达分别为6.67%(2/30)、67.80%(80/118)、86.57%(58/67)、94.63%(90/95);P53基因PCR-SSCP分析谱检测P53第5~8外显子阴性56例占30.27%,阳性129例占69.73%,总突变率为69.73%(127/180);P53与TSG101呈现负相关.这些结果提示P53和TSG101可能共同参与了肺癌的发生、发展和转移.     

化学发光自显影免疫印迹法（Western Blotting）检测绒山羊皮肤组织中催乳素受体蛋白

采集不同季节绒山羊皮肤组织样品,提取总蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,将电泳结果转移到醋酸纤维薄膜,然后与催乳素抗体结合、辣根过氧化物酶标记二抗结合,后者作用于化学发光底物,暗室中置X-光胶片上自显影数分钟,经显影、定影,得到黑色曝光斑,根据胶片上曝光斑的位置确定出催乳素受体的分子量为87kD。根据不同时期样品黑斑的大小得出各时期催乳素受体表达量与绒毛生长趋势是一致的。     

实验小鼠肾匀浆中肽酶-3样本稳定性分析

目的 通过分析肽酶-3样本的稳定性,了解该样本的贮存条件和运输条件,进而采取适当措施保障能力验证样品的品质时刻符合实施能力验证活动的要求。方法 按照国家标准 GB/T 14927.1—2008进行样本的制备,设定-20 ℃,4℃,室温和37 ℃为4个温度检验点,设定1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、14 d和28 d为9个时间检验点,进行稳定性检验。结果 肽酶-3样本在37 ℃仅能稳定保存1 d,在4 ℃、室温和-20 ℃均可以稳定保存至28 d。结论 在该项目实施过程中,有必要严格控制肽酶-3样本的保存条件和运输条件。     

荧光分光光度法测定人血清中西诺沙星的浓度

建立了荧光分光光度法测定血清中西诺沙星浓度的方法． 用乙腈沉淀蛋白对血清进行预处理, 在硼酸盐缓冲溶液（ｐＨ＝ ９－０） 中, 血清中西诺沙星线性测定范围为０－１ ～１０－０μｇ／ｍ Ｌ（ｒ ＝０－９９６１） , 人血清中西诺沙星的平均回收率为９７－５ ％ ． 日内变异系数为３－０ ％ （ ｎ ＝ ５） , 日间变异系数为３－４ ％ （ ｎ＝ ６） ． 本法适于西诺沙星血药浓度的测定．     

确定小鼠动脉粥样硬化斑块负荷的新方法

目的 如何对小鼠动脉粥样硬化斑块体积进行定量分析国内尚未见报到.本文将以载脂蛋白E基因敲除小鼠为例介绍一种确定小鼠动脉粥样硬化斑块体积的新方法.方法 将16周龄雌性.ApoE基因敲除小鼠的主动脉根部进行连续冰冻切片700 μm,每间隔100 μm收集组织切片进行油红O染色,利用Leica Q500MC图像分析软件测量斑块面积,利用Cavalieri公式计算动脉粥样硬化斑块体积.结果 本例中小鼠主动脉根部粥样斑块面积为520 632μm2,体积为364 442 μm3.结论 本文介绍的确定小鼠动脉粥样硬化斑块体积的方法操作简单、易于进行标准化.     

用细胞周期分析结合免疫印迹方法检测微型浮游植物细胞增长率的研究

采用基于流式细胞仪的细胞周期分析和免疫印迹方法来研究浮游植物的细胞增长率.检测和分析同步化后的有害浮游植物Takayama pulchellum,可知T.pulchellum的S期大约出现在10h左右.免疫印迹检测的结果显示抗微小原甲藻（Prorocentrum minimum）和抗Pfiesteria piscicida的PCNA抗体与T.pulchellum无明显的阳性杂交信号出现,表明这2种PCNA抗体不能作为检测T.pulchellum PCNA表达的抗体.Rubisco抗体免疫印迹反应的信号强烈,但与细胞生长状态的相关关系不够明显,其特异性不高使其不能作为理想的指示细胞原位生长率的指标.     

流动注射化学发光分析法测定邻苯三酚

在碱性介质中,铁氰化钾直接氧化邻苯三酚产生化学发光信号,结合流动注射技术建立了一种测定邻苯三酚的化学发光新方法.该方法的相对发光强度与邻苯三酚的浓度在1.0×10-4-9.0×10-3 mol／L范围内呈线性关系,检出限为7.52×10-5 mol／L,对浓度为1.0×10-3 mol／L的邻苯三酚平行测定11次,相对标准偏差为1.58%,应用于湖水中的邻苯三酚的测定,结果满意.     

猪血清胸腺因子免疫活性的测定

根据哺乳动物循环血液中所含有的血清胸腺因子(STF)能使θ-阴性的玫瑰花瓣状形成细胞(RFC~-)转变成RFC~+,同时提高其对抗θ抗原血清的代用品硫唑嘌呤的敏感性的原理,采用成熟的BALB/C品系小鼠,经摘去胸腺后的鼠脾脏淋巴细胞和绵羊红细胞(SRBC)之间,在STF和硫唑嘌呤同时共存的条件下具有抑制玫瑰花结形成的作用,从而建立了对哺乳动物循环血液中的STF(九肽)的超微量生物活性测定方法。用本方法对猪血清和血浆的检测结果,其活性滴度分别为1:512、1:1024。     

绵羊血清中替米考星的高效液相色谱检测

试验研究了用高效液相色谱法检测替米考星在绵羊血清中的含量。绵羊血清用C18SPE柱净化,甲醇一乙腈一乙酰胺(20mL：80mL：0．77g,)洗脱,采用反相高效液相色谱测定,检测波长288nm。在血清中0．05,0．50,5．00mg(L^-1添加回收率范围为92．3％～101．0％,变异系数为4．7％～8．0％。用该方法测得绵羊血清中替米考星含量的最低检测限为0．025mg(L^-1,定量限为0．05mg(L^-1。     

新型混合基体改进剂和石墨炉原子吸收光谱法测定鼠血中的铅

目的:用新的混合基体改进剂建立石墨炉原子吸收光谱法快速测定鼠血中的铅.方法:采用2 mg/mL磷酸二氢铵-l mg/mL硝酸镁-0.35％ Triton X-100作为混合基体改进剂,电热石墨炉原子化系统和氘灯扣背景校正的原子吸收光谱仪测定鼠血中痕量的铅.结果:测得骨铅的回归方程为A =0.008 22 C+0.107 04(r =0.999 1);平均回收率为96.3％,RSD =2.1％ (n =3),检出限为0.5 ng/mL.结论:本方法操作简便、重现性好、灵敏度高且结果准确.     

AFM观察小白鼠心肌和肝核DNA片段的基因移位

用原子力显微镜(简称AFM)直接观察、体外表达和体外转录等实验技术组合,观察到了心肌和肝的核DNA片段的基因;用磷酸缓冲液稀释,并用开关蛋白质等活性因子使其部分解离,促使核基因在核DNA片段内或核DNA片段间静态或动态移位,得到了对应核DNA片段中的相关基因,如LDH/DNA体外表达活性变化的LDH同功酶酶谱图。基因静态或动态移位均表达活性降低,且基因移位程度与其对应基因活性降低程度呈正相关性。展示了未来运用AFM和体外表达等实验技术组合研究核DNA片段的基因移位和对应基因突变机制的前景。