滞育和非滞育棉铃虫脑的组织解剖学研究

滞育和非滞育棉铃虫在不同的发育阶段，脑的形态组织学结构存在着一定的差异，主要表现在：非滞育脑的神经纤维体发达，神经分泌细胞中的核较大，且细胞质中除了有线粒体外，还有大量的粗面内质网及游离的核糖体；而滞育脑的神经纤维体相对固缩、不发达，神经分泌细胞中核较小，细胞质中含有线粒体、光滑内质网和特有的脂滴，不具粗面内质网．这些证据表明滞育棉铃虫的脑活性相对较低．     

棉铃虫性信息素合成激活肽基因的检测

性信息素合成激活肽是调节昆虫性信息素合成的神经肽．根据昆虫性信息素合成激活肽的氨基酸序列保守性,合成若干引物,以棉铃虫基因组ＤＮＡ为模板,用ＰＣＲ方法得到单一的扩增条带．ＲＴＰＣＲ方法从棉铃虫咽下神经结中检测出性信息素合成激活肽基因在棉铃虫基因组中不仅存在,而且表达．     

不同氰戊菊酯抗性水平棉铃虫越冬适应性的研究

本文利用人工诱导滞育的方法,对不同氰戊菊酯抗性水平的棉铃虫越冬蛹进行了比较研究．结果表明,氰戊菊酯抗性较高的棉铃虫滞育率低,越冬蛹期长,越冬死亡率高．     

棉铃虫泛素基因的克隆及序列分析

泛素介导的泛素-蛋白酶体通路(Ubiquitin-proteasome pathway,UPP)是真核细胞内依赖ATP的非溶酶体蛋白质降解途径,该途径对细胞内蛋白的选择性降解起着重要作用.设计一对简并引物,从棉铃虫Helicoverpa armigera卵巢细胞Ha831中克隆了泛素基因的编码区,GenBank登录号AY456195.序列分析表明,该编码区的长度为228bp,编码76个氨基酸、其编码蛋白的相对分子质量为8 560,等电点为6.56.同源性比较发现,棉铃虫泛素基因与其他真核生物泛素基因在氨基酸水平上具有96%以上的相似性,而与棉铃虫核多角体病毒泛素的相似性为76%,所有已知的泛素关键功能位点在该泛素蛋白中均保守存在.     

定向筛选抗枯萎病棉花的抗病相关基因条带的鉴定

以天九63号棉花品种和其经过病圃定向筛选2年、3年分别对枯萎病菌7号生理小种表现高感、耐病和抗病的材料为研究对象,利用差异显示PCR技术对接种枯萎病菌前后的抗、感材料中差异表达的基因进行了初步研究,结果共得到62个差异条带。进一步通过反向Northern杂交验证,发现其中有8个是抗病诱导增强的阳性条带。经克隆、测序和同源性比对分析,结果表明：除14-3片段没有找到同源性外,其余的差异条带都可以找到同源性较高的序列。其中10-5和22-11与盐胁迫下松科植物的抗菌素cDNA同源性达到100%,22-6达到96%,22-2与缺氮条件下松科植物cDNA的同源性为100%,推断其与植保素类物质的调控和生成相关;13-10与陆地棉纤维的cDNA同源性为100%,蛋白质序列比对发现它编码磷酸氧化酶相关的维生素类物质,推断其参与抗病相关酶类的合成途径;差异条带6-3与棉花根茎部幼嫩组织和纤维的cDNA同源性为99%,与陆地棉胚珠cDNA同源性为98%;10-7与假定的衰老相关蛋白mRNA同源性为98%。     

济宁青山羊大小猾子皮的差异表达基因研究

以差异显示PCR（DDRT PCR）技术研究了小猾皮（出生3?d内）和大猾皮（出生30～60?d）的差异表达基因,并以反Northern点杂交技术快速剔除假 阳性条带。从40对随机引物中筛选出8对引物组合,其在2种猾子皮中共扩增出482条cDNA片段,其中差异表达条带为52条,占总条带数的10.79％。在所发现的差异条带中有41条为表达“强与弱”的差异 带,占总条带数的8.51％;另有11条为表达“有或无”的差异条带,占总条带数的2.28％。说明与小猾皮相比,大猾皮皮肤组织中有8.51%的基因增强或减弱表达,有2.28％的基因启动或关闭表达。这些 差异表达的基因是大猾皮和小猾皮花纹品质差异的遗传基础。     

葱蝇己糖激酶基因的鉴定、特征分析及在滞育期的表达分析

基于转录组数据,首次鉴定了葱蝇(Delia antiqua)2条己糖激酶(Hexokinase,HXK)基因分别命名为Da HXK-1和Da HXK-2。Da HXK-1基因含有1 544 bp的开放阅读框,编码513个氨基酸,相对分子量和理论等电点分别为58.3k D和5.97;Da HXK-2基因的开放阅读框为2 512 bp,编码819个氨基酸,相对分子量和理论等电点分别为91.1 k D和9.19,二者编码的蛋白同为胞质型蛋白,具有该酶蛋白质典型的保守结构域,且与家蝇(Musca domestica)Md HXK-1和Md HXK-2蛋白的同源性分别为74%和78%;系统发育分析显示它们与其他双翅目(Diptera)昆虫的己糖激酶的进化关系最近,表明己糖激酶在进化过程中比较保守。基因表达分析显示Da HXK-1和Da HXK-2基因在夏滞育蛹中都下调表达;Da HXK-1基因在冬滞育蛹中的表达呈先上升后下降趋势,Da HXK-2基因的表达模式则相反。研究认为Da HXK-1和Da HXK-2基因的不同表达模式可能与组织特异性有关。
     

棉铃虫组织蛋白酶B在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定

以棉铃虫（Helicoverpa armigera）组织蛋白酶B作外源基因重组构建克隆载体,自重组菌株HCB-DH10Bac、Histag-HCB-DH10Bac中提取穿梭质粒,脂质体法转染草地贪夜蛾卵巢细胞系Sf21细胞,转染液再感染细胞,收集感染3～4d的上清液,提取芽生病毒的DNA,PCR法鉴定外源HCB基因,感染上清进行SDS-PAGE、Western-blotting、蛋白酶活性检测．结果：感染上清中的芽生病毒的DNA作模板扩增出预期的1700bp片段,SDS-PAGE、westem-blotcing检测均在28ku处有明显表达产物,且表达产物有蛋白水解活性．     

中国棉铃虫多粒包埋型核多角体病毒几丁质酶基因的研究

中国棉铃虫多粒包埋型核多角体病毒VHA273毒株的几丁质酶基因的开放阅读框大小为1713bp，编码570个氨基酸残基，分子量约60kDa，氨基酸序列分析显示，杆状病毒与原核生物特别是细菌的几丁质酶具高度同源性，暗示杆状病毒的几丁质酶基因与细菌的几丁质酶基因有更为接近的讲化关系，可能源于共同的祖先。     

抗棉铃虫组织蛋白酶B单克隆抗体的制备及鉴定

分别以棉铃虫组织表达的组织蛋白酶B和基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B为抗原免疫BALB／c小鼠，选择血清抗体滴度高的免疫小鼠，取其脾细胞和Sp2／0骨髓瘤细胞进行细胞融合．经ELISA法筛选阳性克隆和有限稀释法克隆细胞，共获得分泌抗组织蛋白酶B的单克隆抗体杂交瘤细胞3株，分别命名为9D5，100E2和100H6．以ELISA法和Western blotting法对3株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行了特异性鉴定，其中9D5和100E2能够同时识别两种不同来源的组织蛋白酶B，而100H6只能识别基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B．     

沿江棉区棉田棉铃虫卵的空间格局

对安徽沿江棉田棉铃虫卵的空间分布动态规律进行了调查研究,结果表明棉铃虫卵在棉田的聚集程度随发生代次而逐渐增强,发现不同代次虫口密度相同对理论抽样数明显不同,提出了沿江各代估值调查中的理论抽样数,并对几种空间格局模型拟合棉铃虫的空间分布情况作了比较。     

Molecular characterization of diapause hormone inHelicoverpa armigera

Diapause hormone (DH) is a neurohormone which is secreted from suboesophageal ganglion and responsible for induction of embryonic diapause in many insects. Using rapid amplification of the cDNA ends (RACE) method, the cDNA encoding diapause hormone inHelicoverpa armigera, a main kind of crops pest was cloned. The nucleotide sequence reveals that the mRNA encodes an open reading frame and the 25-aa DH peptide is localized at N-terminal region just after the signal peptide. A homology search showed thatH. armigera DH has high homology with the diapause hormone ofBombyx mori andHelicoverpa zea; and it also belongs to the FXPRL neuropeptide family. Thus,H. armigera DH seems to be a new type of diapause hormone molecule.     

淮北棉区主要捕食性天敌类群的发生及对棉铃虫种群的控制作用

通过调查研究表明棉田捕生天敌由于化学农药的使用减少了39．3％ －63．0％,农田生态系中龟纹瓢虫、食虫蝽发生消长与棉铃虫之间相关性较强,分别组建了棉田、玉米田二代棉铃虫自然种群以作用因子为组分的生命表,分析结果表明捕食性天敌及其它非寄生因子的排除控制作用指数为62－106。     

Host selection of Helicoverpa armigera and H. assulta and its inheritance

The difference in host selection between the polyphagous Helicoverpa armigera (Hübner) and the oligophagous H. assulta Quenée was examined, with cotton (Gossypium hirsutum), tomato (Lycopersicon esculentum) (hosts of H. armigera), tobacco (Nicotiana tobaccum) (host of both H. armigera and H. assulta), and bush redpepper (Capsicum frutescens) (host of H. assulta) as testing plants. A multiple-choice test was used with caged plant cuttings for adult oviposition and with leaf discs for larval feeding. A no-choice test was run for evaluating larval growth rate. The results indicated that the relationship between larval performance and adult preference of H. assulta was more conspicuous than that of H. armigera. Reciprocal hybridization between H. armigera and H. assulta followed by backcrossing of the hybrids (F1) with H. armigera was also carried out for genetic study on host selection of these two insect species. A two-choice test with cotton and bush redpepper leaf discs showed that H. armigera larvae preferred to feed on cotton, and H. assulta larvae to bush redpepper; feeding preferences of the two F1 lines were intermediate between those of their parents, but close to that of their female parent; preference indexes of backcross lines also showed that both maternal factor and chromosomal inheritance were involved in feeding selection of two Helicoverpa species.     

新疆棉铃虫病原微生物分离及其高效杀虫微生物的筛选

从新疆不同生态区自然死亡的980头棉铃虫上分离到360株细菌和12株病毒,经鉴定,其中气杆菌344株,球孢芽孢杆菌8株,粘质赛氏杆菌6株,苏云金芽孢杆菌2株,HaNPV病毒12株,依次占分离物的92.5%、2.2%、1.6%、0.5%和3.2%。从中选出19株细菌、1株HaNPV进行生物测定,结果在供试菌株中以35号和360号菌株及HaNPV毒力最强,其感染棉铃虫后的死亡率分别为80.0%、70.0%、70.0%,对其进行不同浓度的试验,经回归分析,2株苏云金芽孢杆菌35号、360号和1株HaNPV对棉铃虫3龄幼虫的毒力与浓度有高度相关性(r>0.900)。     

Synthesis dynamic and developmental profile of prothoracicotropic hormone between diapause-and nondiapause-destined individuals in Helicoverpa armigera

Biosynthesis and secretion of prothoracicotropic hormone (PTTH) of diapause-and nondiapause-destined individuals in Helicoverpa armigera were studied using whole-mount immunocytochemistry and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The immunocytochemistry revealed that PTTH is expressed in two pairs of lateral neurosecretory cells of the brain. The presence of immunoreactivity has not significant difference between the brains of the diapause-and nondiapause-destined 6th instar larvae. However,the obvious differences of expressional pattern from day 4 pupae were observed be-tween the two types. PTTH titers in hemolymph from the 6th instar larvae to pharate adults were measured by the ELISA. Although there were similar titer changes between the two types of individuals at the larval stage,a significant difference from developmental expression was detected at the pupal stage,suggesting that the expression and secretion of PTTH does play a crucial role in regulation of pupal diapause of H. armigera.     

棉铃虫致病菌分离、鉴定及高活力苏云金杆菌的筛选

从山东省棉田自然死亡的棉铃虫上分离到常见致病菌至少有8种,经鉴定为:苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、球孢白僵菌(Beauveriabassiana)、卵孢白僵菌(B.tenella)、青霉菌属真菌(Penicilliumspp.)、拟青霉属真菌(Paecilimycesspp.)和蛾霉属真菌(Nomuraespp.);得到一株对棉铃虫高毒的苏云金杆菌菌株Hu,其毒力比普遍使用的Bt菌系7216高,二者的LC50分别为15.1μg/mL和26.28μg/mL。蛾霉属真菌对棉铃虫有明显的拒食作用和杀伤作用,但人工培养时生长十分缓慢。