人神经元电压门控钙通道 γ -3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析,得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在４３５ｂｐ中有７５％同源的ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｗ２９０９５）。在该ＥＳＴ中设计引物与ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式ＰＣＲ和ＲＡＣＥ反应,在人脑前叶皮质ｃＤＮＡ文库和人脑Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得ｃＤＮＡ序列１５４５ｂｐ,其中包含一个９４８ｂｐ的可读框,编码３１５个氨基酸。该可读框经确证命名为ＣＡＣＮＧ３     

人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在 ４３５ ｂｐ中有 ７５％同源的 ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ： Ｗ２９０９５）．在该 ＥＳＴ中设计引物与 ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式 ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质 ｃＤＮＡ文库和人脑 Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得 ｃＤＮＡ序列 １５４５ ｂｐ，其中包含一个 ９４８ ｂｐ的可读框，编码 ３１５个氨基酸．该可读框经确证命名为 ＣＡＣＮＧ３．ＣＡＣＮＧ３基因与大规模测序中定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１的ＢＡＣ克隆ＡＣ００４１２５完全一致，从而将该基因定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１，并由此获得它的基因组结构，编码区由４个外显子组成．经ＲＴ－ＰＣＲ分析，ＣＡＣＮＧ３在成人脑和胎脑有表达．运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测，未检测到突变．     

MBLL cDNA的克隆及组织表达分析

果蝇的ｍｂｌ基因编码一个核蛋白,含有２个Ｃｙｓ３Ｈｉｓ锌指基序。ｍｂｌ基因的突变将影响果蝇所有光感受器细胞的分化。根据与ｍｂｌ基因高度同源的人ＥＳＴ ＡＡ０８６１３９设计ＰＣＲ引物,筛选胎儿脑ｃＤＮＡ点阵文库,得到一个人ｃＤＮＡ,命名为ＭＢＬＬ。     

人类肽-甲硫氨酸亚砜还原酶的cDNA克隆、组织表达谱特征及染色体定位

蛋白质结构中某些氨基酸的氧化和还原是生物体内对蛋白功能的一种调控方式．甲硫氨酸（Ｍｅｔ）被氧化则变为甲硫氨酸亚砜（Ｍｅｔ（Ｏ））,它可导致所在蛋白质的生物学活性降低或丧失,但肽－甲硫氨酸亚砚还原酶（Ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ, ｍｓｒＡ）则可使甲硫氨酸亚砜还原为甲硫氨酸,使其所在蛋白质重新恢复活性．为了研究人体中Ｍｅｔ氧化还原的机制,以牛ｍｓｒＡ ｃＤＮＡ序列为信息探针,筛选人ＥＳＴ数据库,依据若干同源ＥＳＴ的信息从人ｃＤＮＡ分子库中克隆到一个长１２５５ｈｐ的人ＭＳＲＡ ｃＤＮＡ．该ＣＤＮＡ包含一个长７０５ ｂｐ的可读框,它编码了 ２３５个氨基酸残基．同源性比较表明,该基因与牛和大肠杆菌的ｍｓｒＡ基因的氨基酸一致性分别为８８％和６１％．表达谱分析发现,该基因在人体大多数组织中均有一条长约１．６ｋｂ的转录本,并在肾中呈高表达．应用辐射杂种细胞株定位系统（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｈｙｂｒｉｄ ｍａｐｐｉｎｇ ｐａｎｅｌ, ＲＨ ｍａｐｐｉｎｇ）将该基因精确定位在人染色体８ｐ２２～２３区带的ＤＳＳ５１８和Ｄ８５５５０位标之间,由于此前已有Ｋｅｒａｔｏｌｙｔｉｃｗｉｎｔｅｒｅｒｙｔｈ     

人脑新EST的分离及其表达特异性分析

为了解离发育和分化的机制，利用差异显著技术从１３和３３周和脑中分离到９０个ＥＳＴ。比较ＧｅｎＢａｎｋ以后发现其中的７４个ＥＳＴ代表新的基因，当中的一些与某些脑发育相关的基因同源。将来自差异显示的７个ＥＳＴ固定在膜上，用来自不同组织的总ｃＤＮＡＲＰＷＳＱＦ ＧＮ ＡＤＷ ＶＳ ＵＱ 进一步鉴定了其在胎儿脑中的差异表达。     

耐旱植物厚叶旋蒴苣苔BDN1脱水素基因的克隆及表达特性分析

根据已知植物脱水素基因保守区域设计引物,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法从耐旱植物厚叶旋蒴苣苔的总ｃＤＮＡ中扩增出一个５００ｂｐ的与植物脱水素基因同源的序列。结合５’ＲＡＣＥ获得了植物脱水素基因家族一个新成员ＢＤＮ１的全长ｃＤＮＡ（１１４８ｂｐ）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明,ＢＤＮ１基因在厚叶旋蒴苣苔基因组中以单拷贝形式存在,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明,该基因的表达受干旱,寒冷及ＡＢＡ的诱导。推测该基因与     

人类STK全长cDNA克隆及其表达谱分析

从人类的睾丸组织ｃＤＮＡ文库中分离出１条新的全长ｃＤＮＡ,在其１２２５ｂｐ序列中含有一个长１０３２ｂｐ,编码３４４个氨基酸的开放阅读框。基于它与丝／苏氨酸蛋白激酶家族中其他成员存在较高的同源度,尤其是与小鼠ＭＭＳＴＫ１的同源度高达８０％,推论该基因的蛋白产物可能也是一个丝／苏氨酸蛋白激酶,故将其暂命名为ＨＵＭＳＴＫ１（人类ＳＴＫ１）。它的ｍＲＮＡ在胎儿胸腺中呈高表达,在睾丸、小肠和结肠中低表达,而     

在胚胎性横纹肌肉瘤中呈下调表达的新基因HUMCyr61的分离与克隆

横纹肌肉瘤是软组织中较常见的恶性肿瘤,它包括胚胎性横纹肌肉瘤、腺泡型横纹肌肉瘤和多形性横纹肌肉瘤3种类型.其中,胚胎性横纹肌肉瘤常见于小儿,多侵犯眼眶、鼻咽部、泌尿生殖道、胆道、腹膜后和四肢等部位.恶性程度比多形性横纹肌肉瘤高,预后极差,极易复发,晚期常发生转移.我们在同源扩增筛选人类新型细胞因子基因的过程中,从人胚胎骨骼肌ｃＤＮＡ分子库中分离到一个新的ｃＤＮＡ片段(ＢＡ＿1克隆).经在Ｇｅｎｂａｎｋ库中查新,发现它与Ｇｅｎｉｎｉ等人1996年注册的一个ＥＳＴ序列(长304ｂｐ,Ｇｅｎｂａｎｋ注册号Ｚ50168)呈100%同源.他…     

人纺锤体素cDNA 的克隆定位和组织表达谱分析

纺锤体是细胞有丝分裂及配子成熟分裂过程中特有的亚细胞结构,它的结构和功能物正常与直接影响生物个体的发育、分化、生长和繁殖、最近的研究表明,小鼠Ｍｏｓ／ＭＡＰＫ途径对纺锤体的作用与纺锤体素蛋白的磷酸化过程密切相关,采用同源筛选方法从人睾丸ＣＤＮＡ分子克隆到一个与小鼠纺锤体素基因编码序列高度同源,长１９２９ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,计算机软件分析发现,该ｃＤＮＡ的２７１－９８４ｎｔ是一个完整的开放阅读框（Ｏ     

人LDB1 cDNA的分离与克隆

根据与鼠ＬＩＭ结构域结构蛋白Ｌｄｂ１有较高一致性人ＥＳＴＡＡ４５２７３４设计筛库引物,在人胎脑ｃＤＮＡ文库中筛出一长度为２３９８ｂｐ的ｃＤＮＡ克隆。其开放读码框编码３４７个氨基酸与鼠Ｌｄｂ１、爪蟾ＸＬｄｂ１及果蝇Ｃｈｉｐ蛋白高度同源,含ＬＩＭ相互作用结构域及核定位信号。     

人和鼠GRY-RBP cDNA的克隆

通过筛选人胎儿脑ｃＤＮＡ文库,克隆了编码一个新的ＲＮＡ结合蛋白的人ｃＤＮＡ,命名为ＧＲＹ－ＲＢＰ,人ＧＲＹ－ＲＢＰ ｃＤＮＡ的长度为２９３２ｂｐ,编码一个具６２３个氨基酸,分子量为６９．６ｋｕ的ＲＮＡ结合蛋白。ＧＲＹ－ＲＢＰ蛋白含有３个ＲＮＡ识别基序（ＲＮＡ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆｓ,ＲＲＭｓ）和一个富含甘氨酸（Ｇ）、精氨酸（Ｒ）、酷氨酸（Ｙ）的羧基端,经数据库比较发现该蛋白与许多ＲＲ     

水稻减数分裂相关基因OsDMC1的克隆

酵母ＤＭＣ１基因是一个在减数分裂前期 Ｉ表达的减数分裂特异基因,其产物是减数分裂同源染色体配对所必需的．根据在酵母Ｄｍｃ１与拟南芥ＡｔＤｍｃ１中保守的氨基酸ｍｏｔｉｆｓ合成的简并性引物,以ｃＤＮＡ作模板,通过套式ＰＣＲ（ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）和ＲＡＣＥｓ克隆了水稻中酵母ＤＭＣ１的同源基因 ＯｓＤＭＣ１．ＯｓＤＭＣ１全长的 ｃＤＮＡ是 １３４８ ｂｐ,编码 ３４４个氨基酸组成的多肽（ＯｓＤｍｃ１）． ＯｓＤｍｃ１与 Ｄｍｃ１和ＡｔＤｍｃ１的氨基酸序列一致性分别是５１．８％和８１．７％．ＯｓＤＭＣ１在生殖器官中表达量较高,在根中有少量表达,而在叶和幼芽中不表达． Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果表明水稻基因组中有两个拷贝的 ＯｓＤＭＣ１．     

人脑胶质细胞瘤分化相关基因GDR1全长cDNA的克隆和鉴定

人脑胶质细胞瘤是严重危害人类健康的一类恶性肿瘤,选用在ＤＤＲＴ－ＰＣＲ研究中获得的１９个代表新基因的ＥＳＴ之一设计筛库引物,在人ＣＤＮＡＹ语文加中筛出一长度为１５３５ｂｐ的ＣＤＮＡ克隆,其开放读码框码３３４个氨基酸,与已知蛋白无明显同源性属一新发现的ＧｅｎＢａｎｋ接受号为ＡＦ０６８１９５．ＲＴ－ＰＣＲ显示该 物在分化后的ＢＴ－３２５中的表达量明显高于分化前的细胞,暗示该蛋白可能与脑     

一个与人鼻咽癌相关新基因的克隆

利用高密度ｃＤＮＡ微阵列表达检测技术,筛选出在成人正常鼻咽组织高表达而在成人咎咽低分化鳞状细胞癌组织中低表达的ＥＳＴＮ２７７４１,用ＲＴ－ＰＣＲ技术证实之,进而由该ＥＳＴ克隆出长度为１０９６ｂｐ的新基因,利用生物信息学分析发现,该序列有含有完整的阅读横架,编码２５６个氨基酸,在５＇端起始密友子上游有终止密友子ＴＡＡ,３＇端有加尾信号ＡＡＴＡＡＡ和ｐｏｌｙ Ａ尾,该新序列在非宙余的核酸序列数据 比     

应用抑制差减杂交法分离水稻幼穗发育早期特异表达的基因

以水稻茎尖分生组织为对照群体,幼穗分生组织为目标群体,进行抑制差减杂交。用经过ＳＡＭ ｃＤＮＡ差减的Ｐｂ／Ｓｂ ｃＤＮＡ群体构建了一个差减文库,通过差示筛选鉴定了４０个在Ｐｂ／Ｓｂ中特异表达或表达增强的候选克隆,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交验证,至少４０％的候选克隆代表了在Ｐｂ／Ｓｂ中特异表达或表达增强的基因,同时,相当一部分克隆为你荐度转录本。对４０个ｃＤＮＡ克隆单向测序后,与ＧｅｎＢａｎｋ中同源序列进     

利用SSH技术研究小鼠淋巴组织中与束缚应激相关的基因

利用差异表达基因克隆技术减数杂交法,筛选束缚应激诱导小鼠淋巴组织特异表达或高表达基因。获得了应激状态下差异表达的ｃＤＮＡ片段,克隆化后挑选克隆测序。狭窄杂交结果表明Ｌ３６和Ｌ７两个克隆为应激诱导特异高表达的ｃＤＮＡ片段。经ＧｅｎＢａｎｋ检索,Ｌ７克隆只有片段同源序列而无全长同源序列,提示可能来自新基因。用ｏｒｔｈｅｒｎ杂交估算Ｌ３６和Ｌ７的转录基因分别为８００和７００ｂｐ。     

水稻核糖体蛋白S4基因的克隆及表达特性研究

以减数分裂期的水稻雄蕊为材料建ｃＤＮＡ文库,并从中分离到一个ｃＤＮＡ克隆。ＤＮＡ序列分析和数据库比较结果表明,该ｃＤＮＡ编码一个与真核生物８０Ｓ核糖体小亚基蛋白Ｓ４高度同源的蛋白;Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明,该基因在水稻中属一多基因家族。     

一个猪免疫球蛋白 IgG H 链基因的克隆、序列分析及表达

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从猪脾脏中分离到于段１４２５ｂｐ的ＤＮＡ片段,该片段编码免疫球蛋白基因。经全序列分析证明此片段与前人报道的序列有较高同源性,其Ｃ区属于猪Ｉｇγ链基因亚类３。用ＥｃｏＲＩ和ＮｓｉＩ切点将该片段切焉插入ｐＥＴ－３ｂ（ＮＳＥＢ）（－＿中,表达出约５２ｋｕ的蛋白质,表达量约为２１％。     

棉纤维相关cDNA的克隆及其在4个纤维突变体中的结构变异

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从陆地棉遗传标准系“ＴＭ－１”的纤维细胞ＲＮＡ中克隆了一种纤维细胞优势表达的ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡ,记为ＴＭ－Ｅ６基因）,该基因不含内含子,可读框长为７７１ｂｐ,可编码２４６个氨基酸的多肽。从４个纤维突变体中分别克隆同源性基因,并与野生型“ＴＭ－１”的ＴＭ－Ｅ６基因进行了同源性分析,发现纤维突变体不但在基因结构而且在密码组成上有明显变异。在距转录起始位点的第２７９碱基对处有ＧＧＣＴＣ     

烟草花器官实体基因的部分序列及其表达

以烟草花芽的ｃＤＮＡ一链为模板扩增出３个花器官实体基因的同源序列ＮＴＳＱＵＡ４,ＮＴＳＱＵＡ１２和ＮＴＳＱＵＡ１５。这３个克隆都包含有典型的花器官实体基因所拥的的结构域：Ｉ区,Ｋ区和Ｃ末端区。同Ａ类基因ＡＰ１和ＳＱＵＡ的氨基酸序列相比,这３个克隆有５０％－６０％的残基与它们相同。