蚯蚓纤溶酶与“龙心”的比较研究

以北星二号蚯蚓为材料,分离纯化蚯蚓纤溶酶。并对其理化性质、溶纤机理等与“龙心”进行了比较。蚯蚓纤溶酶和“龙心”主要组份的分子量分别为37200和43500。蚯蚓纤溶酶和“龙心”的溶纤比活力(mm~2/mg蛋白)分别为83700和24430蚯蚓纤溶酶既能直接水解血纤维蛋白,又能激活血纤溶酶原。在0—4℃时也能水解血纤维蛋白。蚯蚓纤溶酶经DEAE-Sepharose离子交换柱层析,可分离为9个纤溶活力不同的组分。     

蜡状芽孢杆菌Bc-05菌株纤溶酶的酶学性质

对蜡状芽孢杆菌Bc-05茵株的发酵上清液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析所获得的纤溶酶进行性质研究.结果表明:经纤维蛋白平板法检测该酶有直接水解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用,最适作用温度37℃,最适pH=8.0,在pH=8.0条件下25℃和37℃放置24 h酶活力仍保持77.52%和78.96%,该酶体外对兔血凝块有明显的溶解作用;Ca2+,Mn2+离子对该酶具有激活作用,而Cu2+,Fe3+完全抑制其纤溶活性,PMSF,EDTA和DTT对该酶有抑制作用,说明活性中心含有二硫键、金属离子和丝氨酸;测其N端10个氨基酸序列为NH2-Val-Thr-Pro-Thr-Asn-Ala-Val-Asn-Thr-Gly,与其他生物来源的纤溶酶相比较没有同源性.     

蚯蚓类纤溶酶与“龙心”的比较研究

以人工饲养的北星二号蚯蚓(Esenia foelida)为材料,分离纯化蚯蚓类纤溶酶,并与“龙心”进行了比较,该酶可分离为9个纤溶活力、水解BAEE活力等各不相同的组分,其纤溶性质与“龙心”相似,既能直接水解血纤维蛋白,又能激活血纤溶酶原。     

大平2号蚯蚓纤溶酶酶活的测定

本文以大平2号蚯蚓为材料,制作了纤溶酶纤维蛋白水解活性测定曲线及纤维蛋白溶酶原浓度选择曲线,确定了酶活的最佳测定范围扣测定条件。测定结果表明:大平2号蚯蚓所产生的纤溶酶具有很强的纤维蛋白水解活性和纤维蛋白溶酶原激活活性,是一种很有希望的溶栓药物。     

赤子爱胜蚓纤溶酶活性的研究

研究了赤子爱胜蚓纤溶酶活性的提高条件及酶的最适作用条件。以纤维蛋白平板法测定赤子爱胜蚓纤溶酶活性。结果表明，纤溶酶在温度(57～59)℃，pH在8.0时，酶活性较稳定。赤子爱胜蚓纤溶酶干燥粉末浸泡在氯化钠等溶液中，可提高纤溶酶活性4-5倍。     

溶栓剂的研发现状及展望

由血栓引起的血栓性疾病是一种常见的心脑血管疾病。溶栓剂是预防与治疗心脑血管疾病的主要抗血栓药物。本文总结性地概述了目前国内外各种新型溶栓剂的溶栓机理、临床应用效果及其副作用等。其中,第三代溶栓剂组织型纤溶酶原激活剂变异体、导向溶栓剂、嵌合体溶栓剂,以及部分天然溶栓剂包括蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂、蛇毒纤溶酶原激活剂、水蛭素及其变异体等均通过将纤溶酶原激活为纤溶酶溶解血栓。临床实验结果表明它们在延长体内半寿期、增强对血纤维蛋白选择性和溶栓效率等方面有较大的改进,但溶栓治疗后的冠状动脉再栓塞,颅内出血等问题仍是目前未解决的难题;而纳豆激酶及豆豉纤溶酶由于溶栓原理的不同,引起内出血的几率较低。溶栓剂未来的发展方向为如何综合不同药物的优点,使其更加安全与廉价。     

中药红花与产纤溶酶菌株相互影响的研究

作者采用生长曲线法衡量不同浓度红花对产纤溶酶菌株C2-13的生长影响；纤维蛋白平板法测量纤溶酶活性；邻二氮菲-Fe^2 氧化法测量羟自由基清除率；乙酸酐直接测定法测量总胆固醇；HPLC法分析发酵产物．结果表明：产纤溶酶菌株C2-13能显著提高红花降血清总胆固醇的功效以及抗羟自由基氧化的能力；一定浓度红花的加入对C2-13的生长和纤溶酶活性有明显促进作用．HPLC分析还观察到红花经发酵炮制后，其成分发生了改变．说明中药红花与产纤溶酶菌株C2-13可相辅相成，互相促进．     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及性质鉴定

以赤子爱胜蚓为材料，经过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤和制备电泳分离得到四种纤溶酶组分．经PAGE鉴定四种组分为单一组分；SDS-PAGE测定其分子质量分别为27、28、23和33ku；等电点均在4．0以下；经甲苯胺蓝染色后都出现糖蛋白的阳性反应；用苯酚一硫酸法测定其中性糖含量分别为8.4％、13.5％、9．1％、6．8％；纤维平板法测得四种组分的活性存在明显差异；四种组分都具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用．pH值对四种组分纤溶活性稳定性的影响各不相同．四种组分对温度的适应范围较广．     

脑血管病患者检测血浆D——二聚体含量的临床意义——附104例临床分析

D--二聚体是纤维蛋白单体经活化因子ⅩⅢ交联后,再经纤溶酶水解产生的特异性降解产物,其血浆浓度增高反映凝血酶生成增多和继发性纤溶活性增强,它可作为体内高凝状态和继发性纤溶亢进的标志之一,也是判断溶栓疗效的有效指标.     

磁性蚯蚓纤溶酶脂质体的制备

用超声法将磁流体和蚯蚓纤溶酶同时包入脂质体中,形成一种具有磁导向性能的溶栓药物──磁性蚯蚓纤溶酶脂质体。纤溶酶包封率达80％以上。在磁场作用下该脂质体定向聚集在血栓周围,脂质体破坏后释放出来的纤溶酶可以将血栓完全溶解。还介绍了一种简便、快速制备磁流体的方法。本系统对于制备水溶性药物的磁性脂质体可能有一定通用性。     

脉孢菌纤溶酶的纯化和性质初步研究

应用超滤、盐析、凝胶过滤和疏水相互作用层析对脉孢菌产纤溶酶初步纯化后,活性电泳证实获得单一的纤溶活性组分。对该纤溶组分的基本酶学性质作了进一步的研究,结果表明该纤溶酶的最适作用温度和最适pH分别是46℃和7.8,在40℃以下和pH6.2~7.8时稳定,该纤溶酶具有直接和间接的纤溶活性。     

安舒克栓酶和水蛭素融合基因在枯草杆菌中的表达(简报)

安舒克栓酶(Antithromboase,AT)是本实验室从枯草杆菌N18中分离得到的具有强烈水解纤维蛋白活性的蛋白酶.研究表明,该酶具有直接纤溶和纤溶酶原激活剂的双重作用,且有较强的纤维蛋白亲和性,是极具开发价值的溶栓药物.来源于医用水蛭的水蛭素(hirudin,Hir)是凝血酶的最强有力的天然抑制剂,是极具优势的抗凝药物.但仍各有不足:安舒克栓酶只有溶栓功能,不能抗栓,不能解决血栓治疗中再栓塞的问题;水蛭素只有抗凝作用,不具溶栓功能.如果将这两种从不同途径治疗血栓的药物.通过融合     

微生物发酵生产纤溶酶的研究

以一株具有高产纤溶酶能力的菌株中国根霉１２＃为出发菌株，以麸皮、胰蛋白胨为培养基，采用液体发酵法生产一种高效血栓溶解酶。用人工血纤维蛋白平板检测其活性。对培养基中的碳源、氮源、浓度及配比进行了研究，通过正交试验设计了最佳培养基配方和培养条件，并进行了扩大培养实验     

壳聚糖固定化蚯蚓纤溶酶及其性质

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联荆,用吸附交联法固定蚯蚓纤溶酶,对蚯蚓纤溶酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究,确定了酶固定的最适条件:1 g用pH为6.5的磷酸盐缓冲液浸泡的壳聚糖载体与5 mL体积分数为1%戊二醛在25℃交联8 h,充分洗去戊二醛之后,加入蚯蚓纤溶酶13 U,4℃吸附6 h,充分洗去未交联的游离酶,酶活力回收最高大约为63%,固定化酶的比活为0.082 U/mg.固定化酶,游离酶的最适温度均为50℃,游离酶的最适pH值为8.5,而固定化酶的最适pH值为8.0,固定化酶的热稳定性,pH稳定性均比游离酶有所提高,游离酶、固定化酶都能水解纤维蛋白原和纤维蛋白,固定化酶不再水解BSA.     

蚯蚓纤溶酶研究进展

蚯蚓纤溶酶是蚯蚓体内含量十分丰富的一种血纤维蛋白水解酶。自1982年日本宫崎医科大学美原恒首先报道蚯蚓体内存在这种酶以来,我国兰州大学:中科院生物物理所、中科院上海生化所、渝州大学、北京大学以及清华大学、山西医学院等单位,相继对蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺、理化性质、生物学活性等方面都进行了广泛的研究。现就研究的进展情况,结合本人的工作介绍如下。     

凝血酶在纤溶过程中的动力学作用与影响

在生化实验的基础上，利用数值模拟初步研究了纤维蛋白溶酶在凝血过程中的动力特征作用，并研究了凝血酶与纤溶酶在生化反映中的相互关系，得到了一些新的结论，这些结论将为血液学与临床实践提供有益的启示，同时也显示出数值模拟方法的实用性．     

薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法对纤溶酶活性的体外检测

用薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法体外检测了6种市售心血管药物的纤溶酶活性,结果与所检测药物的相关药理作用相符,表明薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法能够准确、可靠地进行纤溶酶活性的体外检测.     

豆豉纤溶酶纤溶活性的定向进化研究

通过易错PCR方法向来源于枯草芽孢杆菌DC-12的豆豉纤溶酶基因中引入突变并构建突变体库.利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA以酶活力为指标对突变体库进行筛选,通过三轮易错PCR最终获得一株酶活力提高的突变株M324.序列分析表明突变体M324酶基因发生了六处碱基突变,其中四处突变发生氨基酸取代,另两处为无义突变.通过SWISS-MODEL Repository模拟突变酶的结构显示,三个突变氨基酸位于回环结构上,一个位于α螺旋上.纤维蛋白平板法测定纤溶酶活,结果显示突变酶的比活力是野生型的2.44倍.     

脑血管病患者检测血浆D—二聚休含量的临床意义：附104例临床分析

Ｄ———二聚体是纤维蛋白单体经活化因子ＸＩＩＩ交联后 ,再经纤溶酶水解产生的特异性降解产物 ,其血浆浓度增高反映凝血酶生成增多和继发性纤溶活性增强 ,它可作为体内高凝状态和继发性纤溶亢进的标志之一 ,也是判断溶栓疗效的有效指标。近年来将Ｄ———二聚体作为高凝和继发性纤溶的分子标志物 ,应用到心脑血管疾病 ,作为血栓预告的标志之一。为了探讨缺血性脑血管病、脑出血和正常老年人的Ｄ———二聚体的变化及脑血管病判断、治疗 ,将我院检查确诊脑血管病患者观察结果报告如下。１资料和方法１．１资料１．１．１健康人对照 :３０例…     

蛹虫草纤溶酶酶学性质的初步研究

对蛹虫草纤溶酶的酶学性质进行了研究,结果表明,其纤溶活性随温度(≤45℃)的升高和保温时间的延长,逐渐下降,当温度超过50℃时,则随温度的升高和保温时间的延长急剧下降;蛹虫草纤溶酶的最适pH为7.0,在碱性条件下纤溶活性相对稳定;金属离子Ca2+和Fe2+对蛹虫草纤溶酶的活性有显著激活作用;抑制剂中PMSF对蛹虫草纤溶酶活性的抑制作用较小,而Aprotinin、EDAT和EGTA对其纤溶活性均有较显著的抑制作用,说明蛹虫草纤溶酶可能不同于之前报道的纳豆激酶(丝氨酸蛋白酶),而是一种全新的蛋白酶,但对这一点还需要进一步的研究验证.