系统性白色念珠菌感染小鼠动物模型的研究

为了建立稳定的系统性白色念珠菌感染的C57BL/ 6小鼠模型,选用国际标准型白色念珠菌10231(Candida albicans),经小鼠尾静脉直接注射白色念珠菌酵母细胞; 接种后从感染小鼠的脾中能够分离出白色念珠菌,病理学检查肾组织可见肾盂内有大量白色念珠菌的孢子、菌丝体和炎性细胞浸润.噬菌体展示的白色念珠菌HSP 90多肽和热灭活的白色念珠菌菌苗能明显减少感染小鼠肾脏负荷的真菌量.结果说明经尾静脉注射合适剂量的白色念珠菌可建立稳定的小鼠系统性白色念珠菌感染模型,该模型可用于研究系统性白色念珠菌感染的致病机理、免疫和预防.     

展示白色念珠菌热休克蛋白表位的杂合噬菌体诱导小鼠产生的体液免疫应答反应研究

白色念珠菌HSP90 LKVIRK是一段保守的B细胞线性表位.利用展示有LKVIRK表位的杂合噬菌体作为抗原,免疫C57BL/6J小鼠,然后在小鼠的系统性念珠菌感染模型中评价其免疫保护作用.结果证明该杂合噬菌体能够诱导C57BL/6J小鼠产生高滴度的抗HSP90抗体,而且对系统性念珠菌感染的小鼠具有免疫保护作用.说明展示有白色念珠菌LKVIRK表位的杂合噬菌体有可能成为一种候选的真菌疫苗.     

细粒棘球蚴重组蛋白14-3-3和Eg10免疫差异的初步研究

表达纯化细粒棘球蚴重组蛋白14-3-3(rEg14-3-3)和Eg10(rEg10),分别免疫小鼠,8w后进行细粒棘球蚴原头蚴攻击感染.计算免疫保护力,检测脾组织中CD4+T、CD8+T细胞亚群以及T细胞增殖情况.实验结果表明,rEg14-3-3免疫组小鼠具有85.3%抵抗细粒棘球绦虫感染的能力,而rEg10免疫组小鼠与对照组小鼠相比无免疫保护力;与PBS对照组相比,只有rEg 14-3-3免疫组的CD4+T细胞亚群的分布有明显差异,且rEg 14-3-3抗原能诱导淋巴细胞显著增殖.因此rEgl4-3-3蛋白能抑制细粒棘球蚴的生长,诱导小鼠产生高水平的免疫保护力,可作为疫苗候选分子.     

展示肿瘤特异性抗原表位的噬菌体在小鼠体内引起的细胞免疫变化

以含有肿瘤特异性抗原表位的杂合型噬菌体(TSPA-M-A1)作为抗原,免疫C57BL/ 6J小鼠,观察免疫4周后小鼠的细胞免疫变化.结果表明:抗原TSPA-M-A1在小鼠体内能够提高T淋巴细胞对ConA刺激的反应性,使NK细胞杀伤活性明显增高,产生了特异性T淋巴细胞(CTL)反应,引起了较强的迟发型超敏反应.这些结果为肿瘤的免疫治疗提供了实验依据.     

5种甘肃道地中药对衰老小鼠免疫功能影响的比较研究

目的:研究5种甘肃道地中药对衰老小鼠免疫功能影响的差异.方法:将70只健康小鼠随机分成正常组、模型组、纹党组、红芪组、当归组、大黄组和半夏组,采用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型,检测每组小鼠的脾脏和胸腺指数,血IL-1、IL-2、IL-4含量及T淋巴细胞亚群,T淋巴细胞增殖能力,脾胸腺超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量.结果:与正常组相比,模型组小鼠脾脏和胸腺指数,血IL-1、IL-2、IL-4、CD4+T细胞和CD4+/CD8 +T细胞比值,脾T淋巴细胞增殖能力,脾和胸腺SOD、GSH-Px活性均显著降低,MDA含量显著升高(p＜0.05,p＜0.01).与模型组比较,各中药组小鼠脾脏和胸腺指数,血IL-1、IL-2、IL-4、CD4+T细胞和CD4+/CD8+T细胞比值,脾T淋巴细胞增殖能力,脾和胸腺SOD、GSH-Px活性均呈增高趋势,MDA含量均呈降低趋势,纹党组和红芪组上述指标改变更为明显.结论:纹党和红芪水提物对衰老小鼠某些免疫功能的调节作用优于当归、大黄和半夏.     

gD2 DNA疫苗诱导细胞免疫应答

用生殖器疱疹gD2 DNA疫苗pcDNA3-gD转染哺乳动物细胞COS-7,鉴定gD表达．再用其免疫BALB／c小鼠,测定脾细胞增殖、CTL细胞杀伤活性,以及CD4^ 和CD8^ 细胞群．结果表明：pcDNA3-gD能够在哺乳动物细胞COS-7中表达gD抗原,其免疫小鼠脾细胞增殖活性增加,CTL活性达37．69％,明显高于pcDNA3组和生理盐水组;CD4^ 占T细胞数量的33．38％,数量较pcDNA3组和生理盐水组显著增加．     

噬菌体展示外源多肽的免疫原性研究

利用噬菌体展示技术将丝状噬菌体fd基因8克隆入pKK223-3质粒中，将白色念珠菌特异表位基因插入到修饰后的质粒载体中，并制备了杂合噬菌体，利用纯化的该表位抗原PA免疫小鼠，结果表明该噬菌体-表位抗原PA在有无佐剂存在的情况下均产生抗体，用ELISA方法采用双波长（450/630nm)检测抗体，其在有无佐剂存在的情况下光密度值无明显差别，免疫后小鼠脾淋巴细胞在有无佐剂的情况下均产生明显增殖，未见明显的毒副作用，具有良好的安全性，该方法产生的抗体与传统的合成多肽相比具有方法简便、低价高效等特点，它将成为生产高效低价疫苗的有效途径，该噬菌体-表位抗原PA为真菌疫苗的研制打下基础。     

HCV多表位抗原基因pcxz的三串联表达及其在小鼠体内免疫原性的研究

在本实验室之前合成的多表位抗原基因pcxz的基础上,将之3次串联重复构建了3pcxz,以重组表达的3PCXZ作为抗原,HCV病人血清为检测抗体,作Western blot杂交,结果表明3PCXZ抗原能被HCV阳性血清特异识别,而同正常人的血清无反应.通过对BALB/c小鼠的免疫应答进行检测,发现合成的多表位抗原3PCXZ诱导BALB/c小鼠产生的IgG抗体滴度为5.8×105;IgG亚型分析发现,这一免疫反应主要是基于TH2方式,在细胞免疫应答方面亦能激活特异的CD4+T辅助细胞CTL效应,最高溶解率达到40.54%,在1×106脾淋巴细胞中最多可以产生(698±229)个分泌INF-γ的CD4+T细胞.     

齿密螺旋体免疫抑制现象与T细胞凋亡的关系

用凝胶电泳DNA梯度图谱定性分析T淋巴细胞凋亡率;感染齿密螺旋体后不同时间的小鼠脾脏CD4^ 和CD8^ 细胞,用流式细胞仪动态检测CD4^ 和CD8^ 细胞的比值;两种细胞体外经齿密螺旋体超声破碎提取液刺激后,用流式细胞仪动态检测CD4^ 和CD8^ T细胞的凋亡率．结果显示：(1)齿密螺旋体可诱导小鼠脾细胞凋亡;(2)实验组小鼠脾脏CD4^ ／CD8^ T细胞的比值发生改变;(3)小鼠脾脏CD4^ 和CD8^ T细胞于体外经齿密螺旋体超声破碎提取液刺激后,小鼠CDFT细胞的凋亡率随时间的延长而明显增加;CD8^ T细胞的凋亡率低下,且不随感染时间的延长而变化．通过对齿密螺旋体免疫抑制现象与T细胞凋亡的关系的研究表明：齿密螺旋体与宿主免疫功能减退、CD4^ ／CD8^ T细胞的比值下降密切相关,其机制可能与齿密螺旋体超声破碎提取液含具有能引起T细胞凋亡的成分有关．     

有氧和力竭游泳运动对DNA疫苗免疫效果的影响及机制研究

将48只雌性C57BL/6小鼠随机分成对照组(16只),有氧游泳运动组(16只)和力竭游泳运动组(16只).在小鼠分别进行6周有氧和力竭游泳运动后,肌肉注射DNA疫苗3次,每次间隔14d.末次免疫后14d,处死小鼠,收集血液和脾细胞,检测抗原特异性的体液和细胞免疫反应.为了进一步研究不同强度有氧运动影响疫苗的免疫效果的作用机理,小鼠运动6周后,处死小鼠,收集脾细胞分析CD4⁺CD25+CD25⁺调节性T细胞(Treg)的数量及其抑制功能和IL-2的变化.结果显示:和对照组比,有氧运动增强了抗原特异性的细胞免疫反应和细胞毒T淋巴细胞反应(CTL);与之相反,力竭运动抑制抗原特异性的细胞免疫反应和CTL反应.但两种不同强度的游泳运动都不影响血清中抗体的产生.机理研究发现,力竭运动增加Treg细胞的数量及抑制功能,而有氧运动并不影响Treg的数量和功能,但增加脾细胞IL-2的表达.以上结果表明:1)有氧和力竭运动不影响DNA疫苗的体液免疫效果;2)有氧运动可能通过增加脾细胞中IL-2的产生而增强DNA疫苗的细胞免疫效果;3)力竭游泳运动可能通过改变Treg的数量及其抑制功能而削弱DNA疫苗的细胞免疫效果.     

遗传工程小鼠冻存卵巢异体原位移植比较研究

目的 对 C57BL / 6 J 为背景的遗传工程小鼠卵巢冷冻及复苏后原位移植进行研究,建立遗传工程小鼠卵巢 冷冻方法,弥补小鼠资源保种体系。 方法 采用 DAP213 方法冷冻保存了 C57BL / 6 J 及 SCARB2、PSGL1、IGB3S 三 个遗传工程小鼠 10 日龄幼鼠的卵巢,将四个品系 10 日龄幼鼠的新鲜卵巢及冻存复苏卵巢原位移植到 4 周龄 C57BL / 6 J 及 C57BL / 6 J( Cg) —Tyrc- 2 J / J( B6 albino)受体雌鼠,术后饲养 5 周与 10 周龄性成熟 C57BL / 6 J 雄鼠交 配,观察移植出生幼仔。 结果 C57BL / 6 J 新鲜卵巢和冻存卵巢,三个品系遗传工程小鼠的冻存卵巢原位移植到 C57BL / 6 J 和 B6 albino 受体中,均可以恢复正常功能,交配后得到仔鼠。 结论 采用 DAP213 方法冻存 C57BL / 6 J 及以 C57BL / 6 J 为背景的遗传工程小鼠卵巢,复苏后原位移植到 C57BL / 6 J 和 B6 albino,交配后产仔,卵巢冻存方 式是小鼠资源库保存的一个重要补充。     

三种小鼠血液生理生化正常值的测定

本文通过对三种小鼠－ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ近交系小鼠和昆明远交群小鼠的血液学和血液生化指标进行测定。其结果：⑴血液学指标：ＢＡＬＢ／ｃ近交系小鼠的嗜中性白细胞、淋巴细胞雌雄间差异显著;Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ近交系小鼠、昆明小鼠雌雄间差异不显著;昆明小鼠的白细胞比ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ近交系小鼠的低;ＢＡＬＢ／ｃ近交系小鼠的单核细胞、嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞记数比Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ近交系小     

CD4+CD25+ regulatory T cells control Leishmania major persistence and immunity

The long-term persistence of pathogens in a host that is also able to maintain strong resistance to reinfection, referred to as concomitant immunity, is a hallmark of certain infectious diseases, including tuberculosis and leishmaniasis. The ability of pathogens to establish latency in immune individuals often has severe consequences for disease reactivation. Here we show that the persistence of Leishmania major in the skin after healing in resistant C57BL/6 mice is controlled by an endogenous population of CD4+CD25+ regulatory T cells. These cells constitute 5-10% of peripheral CD4+ T cells in naive mice and humans, and suppress several potentially pathogenic responses in vivo, particularly T-cell responses directed against self-antigens. During infection by L. major, CD4+CD25+ T cells accumulate in the dermis, where they suppress-by both interleukin-10-dependent and interleukin-10-independent mechanisms-the ability of CD4+CD25- effector T cells to eliminate the parasite from the site. The sterilizing immunity achieved in mice with impaired IL-10 activity is followed by the loss of immunity to reinfection, indicating that the equilibrium established between effector and regulatory T cells in sites of chronic infection might reflect both parasite and host survival strategies.     

热浪对Apoe基因缺陷小鼠ET-1、NO及体温的影响

对比热浪过程前后健康小鼠与ApoE-/-小鼠ET-1、NO及体温的变化,探讨热浪对ApoE-/-小鼠体温的影响机制。选取南京2001～2010年间一次实际热浪天气过程,运用气象环境模拟箱模拟,将健康小鼠与ApoE-/-小鼠分为对照组和热浪组(n=6),测定其热浪前后血管内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)的含量以及体温的变化。结果显示热浪刺激后,ApoE-/-小鼠的体温、NO含量上升明显,体重、ET-1水平及NO/ET-1比值变化不大,体温变化、NO含量及NO/ET-1比值相对于健康小鼠差异显著。研究结果 ApoE-/-小鼠在热浪过程中更易受到热浪的影响,是冠心病患者更易受高温热浪影响的可能机理之一。     

三种麻醉药物对小鼠麻醉效果的比较

目的比较三种常用麻醉药阿佛丁、水合氯醛、乌拉坦的麻醉效果,探索最适合于C57BL/6J品系小鼠的麻醉方法。方法三种麻醉药物分别以剂量梯度对C57BL/6J小鼠进行腹腔注射,比较不同剂量下的麻醉起效时间、麻醉深度、麻醉维持时间及恢复时间。结果阿佛丁(1.2%)以0.60～0.65mL/20g剂量效果最好,水合氯醛(4%)以0.20mL/20g剂量效果较好,乌拉坦不适用于C57BL/6J小鼠的麻醉实验。结论腹腔注射阿佛丁(0.60mL/20g)和水合氯醛(0.20mL/20g)是适合于C57BL/6J品系小鼠全身麻醉的起效时间最短,维持时间和麻醉深度适度,死亡率为0,麻醉效果较佳的麻醉方法。     

小鼠白细胞减少症模型的建立

目的为小鼠白细胞减少症模型的建立提供基础资料。方法选用ICR小鼠和C57BL/6J小鼠以5Gy的剂量60Co-γ射线一次性全身照射小鼠,测定小鼠外周血白细胞总数。结果在本实验条件下,ICR小鼠的正常白细胞数量极显著低于C57BL/6J小鼠;雄性C57BL/6J在照射后第3 d白细胞数量显著高于其雌性小鼠。结论小鼠的品系、性别对60Co-γ射线照射建立的白细胞减少症模型具有一定的影响。     

Induction of cytotoxic T-cell responses in vivo in the absence of CD4 helper cells

Cytotoxic T lymphocytes (CTL) seem to provide the major line of defence against many viruses. CTL effector functions are mediated primarily by cells carrying the CD8 (Ly-2) antigen (CD8+ cells) and are triggered by interactions of the T-cell receptor with an antigenic complex, often termed 'self plus X', composed of viral determinants in association with class I molecules of the major histocompatibility complex (MHC). The mechanism(s) of induction of virus-specific CTL in vivo is poorly understood, but data from in vitro experiments suggest that their generation is strictly dependent on functions provided by CD4+ helper T cells (also referred to as L3T4+; or TH) that respond to antigens in the context of class II (Ia) MHC determinants. The prevailing opinion that induction of most functions of CD8+ cells requires help provided by CD4+ cells has recently been challenged by the observation that CD8+ cells alone can mediate a variety of responses to alloantigens in vitro and in vivo; however, the possibility that CTL to self plus X could be generated in vivo in the absence of TH cells has not been evaluated. We report here that C57BL/6J (B6) and AKR/J mice, when functionally depleted of CD4+ cells by in vivo treatment with the CD4+-specific rat monoclonal antibody GK1.5 (refs 8-14) responded to ectromelia virus infection by developing an optimal in vivo virus-specific CTL response, and subsequently recovered from the disease (mousepox) that was lethal for similarly infected nude mice (CD4-, CD8-).     

C57BL/6J胚胎冷冻小鼠的遗传监测和分析研究

目的用生化标记和微卫星检测法观察近交系C57BL/6J小鼠胚胎冷冻后的遗传质量是否发生改变。方法采用国标(GB/T 14927.1-2008)生化标记基因检测法对4只玻璃化冷冻、解冻移植后获得的C57BL/6J F1代小鼠的13个生化位点进行预检测,再根据微卫星DNA多态性的遗传监测方法进行多态性分析。结果4只玻璃化冷冻后移植获得的C57BL/6 F1代小鼠的遗传概貌与国标(GB/T 14927.1-2008)中的14个生化位点完全一致;并与本文作者已建立"几种常用近交系小鼠微卫星DNA多态性的分析研究"的遗传监测结果完全相符。结论玻璃化冷冻法(EFS40,straw)对C57BL/6J冷冻胚胎小鼠的遗传物质并未造成影响,其遗传特性保持稳定,是可行的小鼠胚胎冷冻方法。