芜菁花叶病毒崇明大白菜Y_(12)分离株的生物学鉴定

上海郊区青菜上流行的病毒病,经过近几年的研究,初步明确病毒主要属于以下三个类群:烟草花叶病毒(群)(TMV)、芜菁花叶病毒(T_PMV)和黄瓜花叶病毒(CMV).1980年前徐来升等已自青菜上分离出属于TMV群的长叶车前花叶病毒上海分离株(RMV(?));1980～1981年徐来升等又自崇明大白菜上分离出芜菁花叶病毒崇明分离株     

芜菁花叶病毒衣壳蛋白亚基分子量测定及其在低浓度SDS中的解聚现象

一、引言芜菁花叶病毒(T_PMV)发现于1921年,但其研究进展甚慢.究其原因主要是该病毒在分离纯化过程中极易集聚,得率低,病毒本身很不稳定.到七十年代,仍未找到圆满解决芜菁花叶病毒在纯化过程中颗粒间极易发生的集聚现象和提高得率的有效方法.尽管如此,国外仍有一些关于芜菁花叶病毒衣壳蛋白亚基的氨基酸组分和核酸碱基比的研究     

在新疆发生的芜菁花叶病毒的鉴定

从新疆感染病毒的萝卜(Raphanus sativus)分离到一株线状病毒,该病毒在人工接种条件下可经汁液传播侵染属于9科的25种草本植物;该病毒可经桃蚜以非持久性方式传播;染病组织粗汁液和提纯病毒制备物在SDS双向免疫扩散试验和酶联免疫吸附(ELISA)试验中与芜菁花叶病毒抗血清发生强烈的免疫反应;该病毒的病毒粒子为长约750 nm的线形病毒粒子;以差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯了该病毒,纯化病毒的A260/A280为1.26;用提纯病毒制备了ELISA试验所用效价为1∶106的抗血清,证明该病毒株应属于芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus)的一个株系.     

斑点免疫结合法检测3种植物病毒

研究了改进的斑点免疫结合法在检测芜菁花叶病毒、烟草花叶病毒和小西葫芦黄化花叶病毒中的应用.无论是使用全抗血清还是纯化的免疫球蛋白,检测感染组织粗汁液中的病毒或纯化的病毒,均获得了满意的结果.同时进行的斑点免疫结合试验、酶联免疫吸附试验和免疫吸附电子显微术等的比较结果表明:无论是检测纯化病毒还是感染组织粗汁液中的病毒,斑点免疫结合法的检测敏感性均优于后2种方法,病毒的可测感度芜菁花叶病毒为0.65ng,烟草花叶病毒为0.39 ng,小西葫芦黄化花叶病毒为0.45 ng;应用碱性磷酸酶标记抗体及羟基吲哚磷酸盐和氮兰四唑为底物较为合适,这种底物可在室温下长期保存,并且反应产物为不褪色的紫色,易于观察和保存.     

新疆五种芫菁同工酶电泳酶谱的比较研究

本文报道了用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析比较了新疆五种常见芜菁——草原斑芜菁Mylabris frolovi Germ。四点斑芜菁M.quadripunctata L.单纹斑芜菁M. monoxona Well。天山斑芜菁M. quadrisigtata, F. —M. 红头豆芜菁Epicauta erythrocephala Pall.的乳酸脱氢酶(LDH),酯酶(EST),苹果酸脱氢酶(MDH)和醇脱氢酶(ADH)的电泳酶谱。研究结果表明:1.每种芜菁都有不同的特征性酶谱;2.属间的酶谱差异性明星大于种间的酶谱差异性;3.同属芜菁具有共同的特征性酶带;4.酯酶在四种同工酶中活性最高。     

豇豆病毒病的鉴定

1983年9月,从新疆石河子豇豆病毒病植株上分离到1株病毒分离物Cp—1。汁液摩擦接种试验的结果证明,它可以侵染三种豆科植物和二种藜科植物。在豇豆上引起系统花叶,叶片皱缩,下卷并有疱疹等症状;在绿豆上表现为局部病斑。体外抗性测定,失毒温度为55—60℃,稀释限点为10~(-3)—10~(-4)。体外保毒期3—4天。Cp—1汁液易摩擦接种,桃蚜、棉黑蚜均可传毒,可通过种子传毒,种传率为10.6％。病毒粒体线条状,大小为12—5×700—750纤米。病株叶片细胞内有风轮状内含体。该分离物与豇豆蚜传花叶病毒(CA-BMV)的抗血清形成明显的沉淀线。根据以上性状,分离物Cp—1属于马铃薯y病毒组的豇豆蚜传花叶病毒。在新疆各地采取21个标样,经血清学和寄主范围测定,有13个标样属该病毒,约占62％。说明豇豆蚜传花叶病毒在新疆种植的豇豆上是普遍存在的。     

芜菁花叶病毒四川分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析

从四川省3个蔬菜基地感病的甘蓝、花菜、萝卜、叶芥菜分离到芜菁花叶病毒6个分离物.利用 RT-PCR克隆了这6个分离物的外壳蛋白基因(CP), 测定了它们的核苷酸序列并进行了序列分析. 结果表明,6个分离物的 CP基因均为864个碱基,核苷酸序列同源性较高, 达 97.0%～100%;它们与 world-B组分离物的同源性最高,达 92.1%～100%;与 basal-B组分离物的同源性最低,仅 87.6%～90.2%. 基于 TuMV的 CP基因核苷酸序列的分子进化树显示,TuMV分离物可分为4组,本研究所分离到的6个 TuMV四川分离物属于第四组,即 world-B组.     

天然海鱼共附生细菌抗TMV增殖的活性筛选

从福建平潭潮间带周边海域采集7种海鱼,选择了6种分离培养基,获得海洋共附生细菌191株,通过叶碟法进行抑制烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)增殖的菌株活性筛选,其中36株海洋细菌抑制率大于60%,其浓度为1 mg/mL的粗提物抗TMV增殖的活性都能达到38%以上,抑制率超过60%有8株。     

西瓜花叶病毒2号对甜瓜氨基酸的影响

病毒侵染寄主后植物的氨基酸糖蛋白含量发生改变 ,导致病毒传播介体生物学特性的改变 ,大豆花叶病毒 (ＳＭＶ)侵染大豆后碳氮代谢发生变化 ,病毒明显地抑制寄主碳水化合物代谢 ,促进寄主氮化物的代谢 ,有利于病毒的复制和增殖。西瓜花叶病毒 2号 (ＷＭＶ 2 )为新疆甜瓜的优势种病毒 ,棉蚜是其有效传播介体。作者于 1 995～ 1 996年研究了西瓜花叶病毒 2号侵染寄主甜瓜后氨基酸含量的变化。将确定为ＷＭＶ 2的病毒从甜瓜上分离提纯后 ,接种在防虫温室盆栽培养的寄主植物甜瓜 86 0 1品种的 3、4片真叶上 ,病株和对照健康株各 3 0盆。接毒后 …     

不同分离培养基对检测废水中微生物种群多样性的影响

用3种不同培养基(YPG、LB、WW)从焦化废水处理系统中分离培养细菌,并用ERIC-PCR指纹分析的方法,对分离物的种群多样性进行了比较研究.同一悬浮污泥样品在YPG、LB和WW培养基上的活菌计数结果分别为1.6×106CFU/ml、7.0×105CFU/ml和9.8×105CFU/ml.选取最适稀释度(10-4),分别从YPG、WW和LB三种不同培养基平板上分离了56、39和60株菌株.用ERIC-PCR指纹图的方法分析这155株菌株的多样性,结果显示,废水培养基(WW)的选择性最强,39株分离物只显示12种不同的指纹类型;而YPG培养基的选择性相对较低,54株分离物中共有30种不同的指纹类型,多样性明显;LB培养基上因有28%的小菌落无法用ERIC序列扩增,故不能用此方法对其多样性作有效评价.至此,本次实验就分离焦化废水处理系统中的细菌及对分离物进行分子多样性的研究而言,选用YPG培养基最合适.     

苜蓿花叶病毒RNA_23′端cDNA转基因烟草及其抗病性研究

将本室克隆的编码复制酶基因3′端约1/2序列及其3′端非编码区的苜蓿花叶病毒中国分离株(AlMV-Ch)RNA23′端cDNA,重组到植物表达载体pROKII中,通过致瘤农杆菌(A-grobacteriumtumefaciens)介导,以叶圆片为转化材料,转化普通烟草,并获得了转基因植株.经卡那霉素抗性选择、PCR检测目的基因证明AlMVRNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中.转基因植物的攻毒试验表明转基因植株对苜蓿花叶病毒产生高水平的抗性.     

四川传统烟区烤烟叶面可培养细菌的遗传多样性分析

为认识烤烟(Flue-cured tobaccos)叶面可培养细菌的多样性,挖掘叶面可培养细菌资源.本研究以四川省各传统烟区旺长期烤烟叶片为材料,通过纯培养法及测定菌株的产吲哚乙酸(IAA)能力、溶磷溶钾特性、纤维素降解活性、拮抗病原菌等,并通过反转录重复因子扩增(BOXA1R-PCR)技术、16S rRNA基因测序和系统发育分析研究叶面可培养细菌的遗传多样性和功能特征.结果表明:分离得到的86株叶面细菌中有12株菌株(占总分离菌株的13.95%)具有产IAA的能力,4株产量较高(57μg/mL);有9株(占总分离菌株的10.47%)表现溶磷活性,8株(占总分离菌株的9.30%)表现溶钾活性.基于BOXA1R-PCR图谱选取12株代表菌株进行16S rRNA基因序列测定,系统发育分析显示,86株菌株分别属于节杆菌属(Arthrobacter)、短小芽孢杆菌属(Lysinibacillus)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、无色杆菌属(Achromobacter)和假单胞菌属(Pseudomona),其中以假单胞菌属(Pseudomonas)为优势菌属.表明四川传统烟区烤烟叶面存在着丰富的细菌资源.     

POD、PPO指纹图谱在芸薹属蔬菜分类上的研究

采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对芸薹属21个品种根POD同工酶和PPO同工酶进行了研究,并用类平均法(UPGMA)进行了聚类分析。结果表明:大白菜、小白菜、菜心、油菜、壬生菜、京水菜、芜菁属于芸薹种下的亚种或变种,结球甘蓝、紫甘蓝、抱子甘蓝、羽衣甘蓝、花椰菜、青花菜、紫花菜、苤蓝、芥蓝属于甘蓝种下的亚种或变种,雪里蕻、结球芥菜属于芥菜种下的变种。从蛋白质分子水平上分析了芸薹属三大类蔬菜的亲缘关系,并确定了特征指纹图谱。     

基于公共sRNAs库的病毒检测分析研究

以公共的small RNAs(sRNAs)新一代测序数据为材料,通过生物信息学的分析方法检测生物实验系统样品中存在的病毒,讨论病毒与宿主间的关系,病毒的种属特性,进而指导生物实验设计.从GEO Datasets数据库下载917个已发表的sRNAs高通量测序数据,通过生物信息学分析共检测出来自334个样品库的2,107条高度同源的病毒序列和2,930条疑似的病毒序列.这些病毒主要是正链RNA病毒、反转录病毒和双链DNA病毒,集中在花椰菜花叶病毒科、反转录病毒科、杆状病毒科和芜菁黄花叶病毒目.     

幼兔细菌性感染症的检验与分析

从自然发生的2月龄幼兔肺脏中分离到3种类型的细菌(记作:a,b,c),经对所做的纯培养30株分离菌的形态特征、理化特性等检验,结果表明a菌(17株)为支气管炎博德特氏菌(Bordetellabronchiseptica);b菌(8株)为铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa);c菌(6株)为大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)。通过人工感染试验,表明其为相应的致病菌。     

一株喜树内生真菌次级代谢产物分离纯化及结构鉴定

以一株分离自福建省武夷山自然保护区的喜树内生真菌SXZ-19为研究对象,通过固体平板发酵培养对菌体的化学成分进行了研究.从10L发酵菌体提取物中分离得到8个单体化合物,通过核磁共振以及质谱数据鉴定了化合物1～8的化学结构,分别为:2个线性呋喃聚酮类化合物(1～2);2种真菌毒素(7～8),交链孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)和交链孢酚(alternariol,AOH);4个洛伐他丁类似物oblongolides D(3),P(4),H(5)和V(6),其中化合物4和5互为差向异构体,为从同一菌株中分离得到oblongolides的差向异构体.     

天然海鱼共附生细菌抗TMV增殖的活性筛选

从福建平潭潮间带周边海域采集7种海鱼,选择了6种分离培养基,获得海洋共附生细菌191株,通过叶碟法进行抑制烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）增殖的菌株活性筛选,其中36株海洋细菌抑制率大于60%,其浓度为1 mg/mL的粗提物抗TMV增殖的活性都能达到38%以上,抑制率超过60%有8株。     

蚕豆萎蔫病毒中国分离物RNA2全序列及多聚蛋白切割位点

对蚕豆萎蔫病毒2(BBWV2)分离物B935 RNA2全序列进行了测定,全长由3 601个核苷酸组成(不包括3'端Poly(A)).RNA2包含一个长的开读框,该开读框起始于231位,终止于3 428位,编码一个分子量为119 ku的多聚蛋白.对外壳蛋白亚基N端氨基酸序列测定表明外壳蛋白大亚基(LCP)和小亚基(SCP)是由119 ku多聚蛋白中谷酰胺与甘氨酸及谷酰胺与丙氨酸之间的切割产生的,LCP含有402个氨基酸,SCP含有197个氨基酸.与蚕豆病毒属(Fabavirus)病毒基因组核苷酸及编码的蛋白质氨基酸序列比较表明,B935与BBWV2分离物及广藿香轻花叶病毒具有很高的同源性,而与BBWV1分离物的同源性较低.B935与豇豆花叶病毒属(Comovirus)和线虫传多面体病毒属(Nepovirus)的基因组结构相似,但序列同源性很低.B935与豇豆病毒属病毒的LCP和SCP氨基酸具有共同的保守序列.用4株单克隆抗体进行TAS-ELISA测定表明B935与BBWV1分离物(NRS和PH3)抗原上有差异.     

苜蓿花叶病毒RNA_23′端cDNA转基因烟草的研究

将克隆的苜蓿花叶病毒中国分离株(AlMV-Ch)RNA23′端cDNA重组到植物表达载体pROKII中,用三亲融合法导入农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404,采用叶圆片法转化普通烟草,诱导再生小植株.经卡那霉素抗性筛选和PCR检测,证明AlMVRNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中.     

牛源非结核分枝杆菌的分离培养与结果分析

为了了解近几年来长春地区非结核分枝杆菌的流行情况,对长春地区的牛群非典型分枝杆菌的感染情况进行了调查。采集牛颌下淋巴结及肠系膜淋巴结各150份,按2006年中国防痨协会新编写的《结核病诊断实验室检验规程》的标准鉴定方法共分离出14株分枝杆菌,分离率达4.7%。颌下淋巴结阳性5例,分离率3.3%,其中龟脓肿分枝杆菌2株(分离率占14.3%);偶发分枝杆菌3株(分离率占21.4%);肠系膜淋巴结阳性9例,分离率为6.0%,其中牛分枝杆菌2株(分离率占14.3%);新金色分枝杆菌3株(分离率占21.4%);瘰疬分枝杆菌4株(分离率占28.6%)。