用基因枪法转化水稻获得转基因植株

从水稻成熟胚诱导的愈伤组织经继代培养后可以产生大量胚性愈伤组织．将分别含有苏云金杆菌δ－内毒素基因［ＣｒｙⅠＡ（ｂ）］、潮霉素磷酸转移酶基因（ｈｐｔ）的质粒混合包裹在金粉上轰击上述胚性愈伤组织．经过筛选和再生培养，得到９２个系的潮霉素抗性再生植株．点杂交结果表明９７．８％的抗性植株含有ｈｐｔ基因，７３．９％的植株同时含有ＣｒｙⅠＡ（ｂ）基因和ｈｐｔ基因．Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析进一步证实外源ＣｒｙⅠＡ（ｂ）基因已经整合到水稻基因组中．     

根癌农杆菌介导的绿色荧光蛋白基因在水稻植株中的表达

将改良的绿色荧光蛋白（EGFP）基因插入到植物表达载体中,构建了ubi启动子驱动下的植物表达载体p13UEGFP．通过根癌农杆菌介导转化水稻的胚性愈伤组织,经潮霉素筛选,获得抗性愈伤组织和再生植株．对T2代植株进行PCR分析、激光共聚焦显微镜检测和RT—PCR分析,结果表明,绿色荧光蛋白基因已经在转基因植株中稳定表达．     

含编码类铁氧还双亲性蛋白ap1基因的转基因水稻植株的获得

利用基因枪法将含有潮霉素抗性基因（hpt),gusA报告基因和ap1基因的2个质粒（pJIMB15和pBiSAP1)共同转化同转化由粳稻品种鄂宜105号种 子在胚诱导的愈伤组织（2－3周龄）。ap1基因编码一种双亲性的蛋白。该蛋白能延缓因假单孢菌感染所引起的非寄主植物中的过敏反应。经过2轮潮霉素（30mg/L)筛选,抗性愈伤组织被转入含30mg/L潮霉素的再生培养基中再生植株。从轰击的186块愈伤组织中共再生出32株独立的转基因水稻植株（转化率为17．2％）,PCR／Southern blot分析显示84％的转基因植株含有所有3个基因。     

BYDVCP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性愈伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病基因的质粒Ｐ＾ｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒Ｐ＾ＢｌＡｅｔＳＮ导入融合细胞中。经抗性筛选获得抗潮霉素的阳性克隆并再生植株。对再生植株作ＰＣＲ检测表明，     

农杆菌介导的DREB1A基因转化多花黑麦草及其转化体系的优化

采用携带卡那霉素抗性基因nptII和GUS基因的ubiquitin启动子驱动的表达载体pBI121／DREB1A的根癌农杆菌AGL1, 对多花黑麦草幼胚来源的胚性愈伤组织进行了遗传转化,并优化了各种影响因素。胚性愈伤组织经根癌农杆菌感染和共培养后,用50mg／L巴龙霉素筛选抗性愈伤组织,待抗性愈伤组织在IB分化培养基上分化成苗后用25mg／L卡那霉素进一步筛选再生植株, 获得了部分抗性植株。抗性植株的总DNA用DREB1A基因的特异引物进行PCR检测,转化频率为2.14％,PCR-Southern blot进一步验证了转化植株基因组中含有该外源基因。各种影响转化效率因素的优化实验表明,当转化时菌液浓度的OD600为2.0、侵染时间为1h、共培养时间为2d、共培养温度为21℃及在共培养期间使用乙酰丁香酮等,均可明显提高转化频率。     

口蹄疫抗原决定簇融合基因转化胡萝卜的研究

利用转基因植物生产疫苗是目前植物基因工程的一个研究热点,具有生产简单、成本较低、使用安全方便、易贮存等优点.本实验通过农杆菌介导的遗传转化,以O型和A型口蹄疫抗原决定簇基因O21-O14-A21转化胡萝卜.通过筛选,获得潮霉素抗性愈伤组织,经胚状体再生得到156棵抗性苗.通过GUS染色检测,GUS报告基因在部分转化的愈伤组织中瞬时表达,并在部分抗性苗中稳定表达.对部分抗性植株进行PCR和PCR-Southern杂交检测,证实目的基因已经成功整合到胡萝卜基因组中.     

用基因枪法转bar基因以培育抗除草剂的直播稻

用基因枪法将 p CB1 质粒 (含 bar基因和 cecropin B基因 )导入到三种有应用前景的直播稻品种中 ,受体材料为来源于水稻未成熟胚的胚性愈伤组织和来源于成熟胚的悬浮细胞系 .当代转化植株显示出很强的对除草剂 Basta的抗性 ,Southern-blot分析显示 :两个外源基因共整合到转化植株基因组中 ;子一代植株中仍含有外源基因 ;来源于同一块愈伤组织的转化植株的整合模式可能是相似的 ,也可能完全不同 .     

口蹄疫抗原决定簇融合基因转化胡萝卜的研究

利用转基因植物生产疫苗是目前植物基因工程的一个研究热点，具有生产简单、成本较低、使用安全方便、易贮存等优点．本实验通过农杆菌介导的遗传转化．以O型和A型口蹄疫抗原决定簇基因O21-O14-A21转化胡萝卜．通过筛选．获得潮霉素抗性愈伤组织。经胚状体再生得到156棵抗性苗．通过GUS染色检测．GUS报告基因在部分转化的愈伤组织中瞬时表达．并在部分抗性苗中稳定表达．对部分抗性植株进行PCR和PCR—Southern杂交检测．证实目的基因已经成功整合到胡萝卜基因组中．     

转抗虫融合基因(cry1Ac3-cpti)玉米(Zeamays L.)植株的获得及其抗虫性分析

将苏云金杆菌家族中的cry1Ac3基因与豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(cpti)融合成融合基因，构建cry1Ac3-cpti融合基因植物表达载体，表达Bt-CpTI抗虫融合蛋白．用基因枪转化技术将cry1Ac3-cpti融合基因分别导入玉米优良自交系E28及340的胚性愈伤组织中，轰击后的愈伤组织经筛选剂3次筛选，获得可育的再生植株．经PCR及Southernblot分子检测，证实所获得的再生植株为转基因植株．抗虫性分析结果表明，部分转基因玉米植株对玉米螟虫有较强的抗性．将苏云金杆菌家族中的cry1Ac3基因与豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(cpti)融合成融合基因，构建cry1Ac3-cpti融合基因植物表达载体，表达Bt-CpTI抗虫融合蛋白．用基因枪转化技术将cry1Ac3-cpti融合基因分别导入玉米优良自交系E28及340的胚性愈伤组织中，轰击后的愈伤组织经筛选剂3次筛选，获得可育的再生植株．经PCR及Southernblot分子检测，证实所获得的再生植株为转基因植株．抗虫性分析结果表明，部分转基因玉米植株对玉米螟虫有较强的抗性．     

水稻同源重组型质粒载体的构建

根据同源重组机制,以水稻17S-5.8SrDNA 2.5 kb 同源片段和含有MT基因、Km r 基因的外源DNA片段构建了质粒载体pURKMT,并用电激法转化水稻愈伤组织,经Km 筛选,获得了对Km 抗性明显高于基础抗性的愈伤组织.经DNA斑点杂交检测,证实外源基因已整合到水稻基因组DNA中.