几种豆科牧草外植体培养和体细胞胚诱导及人工种子研究

研究了鹰咀紫云英，苜蓿，红豆草，甘肃棘豆，红三叶草，白三叶草，胡卢巴和扁蓿豆八种豆科植物的组织培养和体细胞胚诱导。不同种类的外植体在附加不同成分的ＵＭ培养基上进行离体培养，均获得愈伤组织采用固体和乳浮两种方式进行分化诱导；     

利用电击法转化玉米胚性愈伤组织获得GUS基因瞬时表达的研究

作者以成单玉米幼胚经诱导、继代、筛选,获得了可分化的胚性愈伤组织,采用电击转化法,将质粒PBI121导入成单玉米的胚性愈伤组织中,通过组织化学染色法,观察到了GUS基因的瞬时表达,并筛选出对愈伤组织损害轻、GUS表达较强的最适电击条件为：960μF,375V/cm,61ms。     

高蛋白籼稻品系H28胚培养力的初步研究

以籼稻Ｈ２８优良品系为材料，通过胚培养诱发愈伤组织并继代培养，最适的诱导培养基为ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ，在此培养基上产生的愈伤组织具有较强的分化能力，将愈伤组织转移到分化培养基，光照培养１７ｄ后，在ＭＳ＋０．２５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１ｍｇ／Ｌ ＢＡ的分化培养基上，愈伤组织的芽分化率可达４０％。在分化培养基上培养１０ｄ后，将愈伤组织转移到无激素或低浓度激素的培养基上，其分化出苗率有明显的提高。     

应用基因枪将外源基因导入小麦幼胚获可育的…

以小麦晋２１４８，７５０６，７６０６，５９２６四个春性品种的幼胚为材料，用ＪＱ７００型高速基因枪将ＢＰＩ１２１质粒导入小麦，研究并确立了轰击速度、钨粉直径、上方式、ＤＮＡ浓度等基因枪转化参数。在以上研究基础上进一步将导入外源基因的小麦幼胚质片细胞通过胚胎发生途径再生成植株。供试的４个品种中有３个（７５０６，７６０６，５９２６）获得了可育的转基因植株。ＧＵＳ基因的转化频率分别为０．６％，０．６％和１     

仙客来种苗球茎胚性愈伤的诱导及体胚的发生

为了建立仙客来稳定的快繁增殖体系,以仙客来种苗为试材,接种于含不同浓度激素组合的I／2MS培养基上,经过初培养和多次继代培养,诱导产生胚性愈伤,结果表明：球茎是较好的诱导胚性愈伤的材料,1／2MS＋6-BA0．2mg／L＋2,4-D2mg／L＋蔗糖30g／L＋琼脂6．5g／L＋肌醇100mg／L＋酪蛋白100mg／L是较好的诱导配方,将胚性愈伤转接到不含激素的1／2MS基本培养基上,诱导产生大量球形胚和鱼雷胚,2—3周后正常成熟的体胚萌发,表明此研究可以为仙客来的快速繁殖提供技术参考．     

用于基因转化的几个云南水稻品种的胚性愈伤组织的诱导

建立了几个云南水稻品种的长期胚性愈伤组织培养系。发现在所选用水稻品种中,Ｈ４２的愈伤组织诱导频率和绿苗分化频率为最高,分别达到７７％和８９％。为基因转化准备了受体材料。     

用基因枪法将AGP基因导入水稻的初步研究

以水稻成熟种子的愈伤组织为受体，采用基因枪法将AGP基因导入水稻细胞，通过组织培养和抗性筛选，得到了转基因植株，转基因植株总DNA的PCR分析初步表明，目的基因已整合到水稻的基因组中。     

外源激素对牡丹胚性愈伤组织诱导的影响

为了探讨外源激素的添加对牡丹胚性愈伤组织诱导过程中生理生化特性的影响.以牡丹品种‘凤丹白’叶柄诱导的愈伤组织为材料,研究不同浓度NAA和TDZ对胚性愈伤组织诱导过程中POD(过氧化物酶)、SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(过氧化氢酶)和可溶性蛋白的影响.结果表明,抗氧化酶类活性和蛋白质含量与胚性细胞早期发育发生密切相关,在胚性愈伤组织形成时期,POD和CAT活性变化趋势基本一致,而SOD活性变化则相反;SOD活性经过短暂下降后回升,于第15天达到第二个峰值后稳步下降,表明SOD在胚性愈伤组织诱导初期起主导作用;POD与CAT活性出现峰值时间较SOD滞后,推测POD和CAT活性的升高能够促进胚性愈伤组织的形成和早期发育;可溶性蛋白含量于胚性细胞形成前一直保持较高水平,在第15天达到峰值后下降,说明其含量的升高有利于胚性细胞的形成和发育,其累积对形成胚性愈伤组织有促进作用.添加NAA 0.2 mg/L和TDZ 0.5 mg/L对牡丹胚性愈伤组织的诱导效果最好.     

仙客来(Cyclamen persicum Mill)体细胞胚的发生及组织细胞学的研究

以仙客来开花植株新生叶片为外植体,成功诱导、筛选出体细胞胚发生的胚性愈伤组织,胚性愈伤组织的形态有两种:微棕红色松软愈伤和松脆愈伤.显微镜下观察松软胚性愈伤多为含有数十个胚性细胞的胚性细胞团,而松脆胚性愈伤的胚性细胞团的胚性细胞数目只有几个或十几个.细胞学观察二者均包含前胚性细胞团、二细胞、四细胞、八细胞,进一步继代培养2周可观察到多细胞原胚、球形胚、梨形胚、心形胚、鱼雷胚的出现,大多数体胚60～90 d可发育成完整的小植株.     

仙客来(Cyclamen persicum Mill)体细胞胚的发生及组织细胞学的研究

以仙客来开花植株新生叶片为外植体,成功诱导、筛选出体细胞胚发生的胚性愈伤组织,胚性愈伤组织的形态有两种：微棕红色松软愈伤和松脆愈伤.显微镜下观察松软胚性愈伤多为含有数十个胚性细胞的胚性细胞团,而松脆胚性愈伤的胚性细胞团的胚性细胞数目只有几个或十几个.细胞学观察二者均包含前胚性细胞团、二细胞、四细胞、八细胞,进一步继代培养2周可观察到多细胞原胚、球形胚、梨形胚、心形胚、鱼雷胚的出现,大多数体胚60～90 d可发育成完整的小植株.     

芦柑子叶培养中过氧化物酶活性及其同工酶的变化

以芦柑子叶为外植体，对脱分化产生愈伤组织至再分化产生器官的发育过程中过氧化物酶活性及同工酶谱变化的研究结果表明，再分化过程的酶活性高于脱分化过程，根分化过程的酶活性高于芽分化过程。同工酶分析揭示出１０条酶带，其中由子叶经愈伤组织到分化出芽的过程中先后出现了９条酶带，带５（Ｒ＿ｆ＝０．１６７）为这一过程所特有；由子叶经愈伤组织到分化出根的过程中也先后出现了９条酶带，带６（Ｒ＿ｆ＝０．２２５）为该过程所特有。     

芦柑子叶细胞脱分化及其线粒体变化

用光镜和电镜观察芦柑子叶在脱分过程中的变化，结果表明，外植体脱分化由接触培养基切口处先启动，未培养的子叶薄壁细胞内充满足脂贮藏物，在脱分化过程中，贮藏物质逐渐减少直到消失，细胞核相对体积增加并常出现核膜内陷和核仁小泡，多聚核糖体与粗面内质网增加，线粒体在数量，形态，分布嵴的发达程序上随着细胞的脱分化进程发生规律性变化。     

广西容县沙田柚与蜜柚营养成分的比较研究

[目的]对广西容县沙田与柚蜜柚两种柚子的蛋白质、总糖、维生素C、脂肪及灰分含量进行比较,为本地柚子资源的开发利用提供参考依据．[方法]分别用考马斯亮蓝法、蒽酮比色法、钼酸铵法及酸水解法测定蛋白质、总糖、维生素C及脂肪含量,高温灰化法测定灰分．[结果]实验表明沙田柚4种成分（蛋白质、总糖、维生素C、脂肪）含量均比蜜柚高,但蜜柚灰分含量较沙田柚高[结论]．总体上看沙田柚比蜜柚营养成分高．     

NPR1和Defensin双价抗病基因过量表达载体的构建及其对沙田柚的遗传转化

柑橘黄龙病是一种严重危害柑橘生产上的毁灭性病害,目前对该病尚无有效的防治方法.为了培育柑橘黄龙病抗性育种材料,本文分别从克里曼丁橘和荔枝品种三月红叶片中提取总DNA,根据已公布于NCBI中的基因序列设计引物,克隆获得了NPR1和Defensin基因序列。以pbi-121作为载体骨架,构建了NPR1和Defensin双价抗病基因过量表达载体（命名为ND-pbi121）.通过根癌农杆菌介导的遗传转化,获得了6株PCR检测为阳性的导入了NPR1和Defensin基因的沙田柚植株.这一结果将为探究NPR1和Defensin基因的过量表达对柑橘黄龙病的抗性影响提供试材和技术基础.     

柑桔种子贮藏蛋白基因部分序列的克隆

应用染色体步移技术从柑桔优良品种锦橙(Citrus sinensis cv．Jincheng)的总DNA中获得一条长度为2054bp的片段．序列分析结果表明，该片段含有柑桔种子贮藏蛋白基因(citrin)的5’端部分序列，并且它与同一物种的伏令夏橙(C．sinensis cv．Valencia)的citrin是高度同源的．从而证明，已克隆并获得了锦橙种子贮藏蛋白基因的部分序列．     

人工种子的开发与应用研究进展

介绍了人工种子开发的效益及应用研究进展,阐述了人工种子的种植优势及未来发展展望。     

龙柚离体培养快速无性繁殖技术研究

龙柚的茎尖和幼嫩的茎段离体培养快速繁殖试验研究结果：外植体用75％的乙醇浸泡0.5min后再用0．1％的HgCl2溶液浸泡10min灭菌效果最好；不同外植体的培养结果是茎段（带腋芽的）的繁殖系数大于茎尖，差异达到显著水平；培养基以MS添加6-BA0．5mg／L和IBA0．2mg／L对不定芽诱导效果最好，增殖比例达到4．2，与其它处理差异达到极显著；无根苗转入1／2 MS附加IBA1．0mg／L的培养基中不定根诱导率为78．3％．添加活性炭对培养材料生根诱导有促进效果．     

Gus基因在佛手叶片中的瞬间表达

采用基因枪法对佛手(Citrus medica L.var.sarcodactylis(Noot)Swingle)嫩叶和老叶叶盘进行了Gus基因转化和瞬时表达研究,分析了轰击距离、叶片组织特性对转化效果的影响.结果显示,在7.584 5×106Pa轰击压力下,采用6 cm轰击靶距转化嫩叶可获得比较高的Gus基因瞬间表达频率;老叶的转化效果比嫩叶差;增加轰击次数并不一定能提高瞬间表达频率.     

沙田柚S-RNase基因的克隆及序列分析

利用高通量测序技术对沙田柚自交和异交花柱进行转录组测序。通过差异分析得到沙田柚S-RNase基因序列。该基因全长为1 238bp(GenBank登录号为KP172529),开放阅读框(ORF)全长为834bp,共编码278个氨基酸,编码的蛋白质的相对分子质量为31.402kDa,理论等电点为5.30。S-RNase蛋白为亲水性蛋白,共有17个可能的磷酸化位点。氨基酸序列分析表明,其编码的氨基酸与柚Citrus maxima、沙糖桔Citrus reticulata和甜橙Citrus sinensis的同源性分别为99%、98%和96%。系统进化树显示沙田柚S-RNase基因与柚、沙糖桔和甜橙亲缘关系很近,属于同一进化分支。     

农杆菌介导的大豆反义fad2-1基因转化烟草研究

以烟草无菌苗叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导法,将大豆反义油酸脱饱和酶基因导入烟草中,经梯度卡那霉素筛选,获得可在含75mg/L卡那霉素选择生根培养基上再生的抗性植株75株,其中67株抗卡那霉素植株的PCR分析扩增出目的片段;RT-PCR分析表明该基因在烟草中表达.结果表明大豆反义油酸脱饱和酶基因在烟草基因组中整合和表达.这为大豆反义油酸脱饱和酶基因转入大豆和表达奠定基础,也为烟草基因工程育种提供了依据.