传统曲霉型豆豉中高产脂肪酶的米曲霉筛选及鉴定

豆豉是中国特色四大传统大豆发酵制品之一,其中产脂肪酶菌株对豆豉风味的形成发挥着重要作用.实验对传统曲霉型豆豉发酵过程中的脂肪酶产生菌株进行了研究,以发酵过程中的曲霉型豆豉为样品,通过对其分离纯化,得到高产脂肪酶菌株8号,并测出其脂肪酶活力为30 IU·m L-1.对该菌株进行了形态学和分子生物学鉴定,通过与NCBI数据库中ITS序列比对,发现该菌株与米曲霉(Aspergillus oryzae)的相似度达100%,鉴定该菌株为米曲霉.获得的高产脂肪酶米曲霉,对豆豉的风味有重要影响,并且为后续的研究提供了依据.     

1株传统曲霉型豆豉中高活力蛋白酶产生菌的分离及其鉴定

豆豉是一种以大豆作为原料经过微生物发酵而形成的传统发酵食品.在发酵过程中,蛋白酶产生菌是其优势菌株并发挥着重要作用.通过对传统曲霉型豆豉发酵过程中的微生物进行分离、初筛和复筛,筛选获得1株高产蛋白酶的菌株,经测定其酶活力为2231 U·L-1.通过生理生化及16S DNA分子鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌.获得的高活力蛋白酶产生菌将为后续制作风味良好的豆豉提供基础,同时也为工业化生产蛋白酶提供菌种资源.     

可产木聚糖酶的蕙兰根内生细菌的筛选与鉴定

为了获得可产木聚糖酶的功能菌,通过刚果红染色法对592株蕙兰(Cymbidium faberi)根内生细菌进行初筛,DNS法对初筛获得的菌株进行复筛,并通过形态学、生理生化特性、(G+C)的物质的量分数及16SrRNA基因序列分析对菌株进行初步鉴定.结果筛选出31株可产木聚糖酶的菌株,占筛选总菌株数量的5.23%,其中7株产酶活性较强;复筛结果显示菌株6hRe76产木聚糖酶活力最高,其发酵液木聚糖酶酶活为57.15U/mL,初步鉴定该菌株为克里布所类芽胞杆菌(Paenibacillus kribbensis).该研究为木聚糖酶的生产提供了潜在的新资源.     

ScINO1基因克隆及酵母多基因多拷贝整合表达载体的构建

利用PCR技术,以酿酒酵母S288c的基因组DNA为模板,扩增酿酒酵母肌醇-1-磷酸合成酶基因(ScINO1)包含1 602bp的开放读码框,克隆后经PCR和酶切反应进行了鉴定,测序结果与GenBank上已登录的ScINO1序列完全一致.对PUG6载体进行改造,构建了rDNA介导的多拷贝整合表达载体pURH,并将ScINO1基因连入载体pURH,获得ScINO1基因超表达载体pURIH.为下一步的微生物发酵法产肌醇和获得能够耐高乙醇的酵母工程菌株的研究奠定基础.     

酒糟泥中纤维素降解菌的筛选与鉴定

利用羧甲基纤维素钠培养基及刚果红染色从酒糟泥中筛选具有纤维素降解能力的菌株,利用DNS法测定纤维素降解能力最强的菌株6d内的滤纸酶活,并从形态学和分子生物学两方面对该菌株进行初步鉴定.结果表明:从酒糟泥中获得4株长势良好的菌株,其中菌株FIB-3刚果红染色后的透明圈直径与菌落直径比值(1.88±0.175)最大,并且该...     

甘肃腐霉新记录种Pythium carolinianum的分离鉴定及rDNA-ITS序列分析

将诱饵法与组织分离法相结合,对甘肃中部干旱地区菜豆根围土壤中的腐霉菌进行分离,共得到6株腐霉菌株.通过挑单菌丝的方法获得纯培养菌系,在对纯化菌株形态特征、培养特性、生长速度和温度的适应范围研究的基础上,对编号为18-51 D的腐霉菌株培养后提取DNA,采用真核生物核糖体基因(rDNA)转录间隔区(ITS)通用引物ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)进行PCR扩增;扩增产物直接测序并输出全序列,获得947 bp的序列;将该序列在GenBank中进行比对,用DNAStar分析软件将同源性较高的登记菌株的序列与18-51D腐霉菌株用邻接法构建系统发育树,结果发现18-51 D与菌株DQ211524(Pythium carolinianum)和AY987038(P.carolinianum)聚为一类.依据形态学特征和分子鉴定,将这6株腐霉菌株鉴定为卡地腐霉P.carolinia num.这是第一次在菜豆根围土壤和在甘肃分离到卡地腐霉P.carolinianum,为甘肃腐霉新记录种.用平皿法测定该菌种对三科九种栽培植物的致病性,发现所有供试植物的胚根仅部分有轻微褐变,未见对生长有明显影响,说明P.carolinianum对这些植物基本无致病性.     

葡萄酒野生酿酒酵母的筛选及其生物特性的研究

从蓬莱葡萄酒产区君顶酒庄霞多丽葡萄果实表皮和葡萄园土壤中分离纯化得到200个单菌落,经初筛和复筛,获得性能较好的菌株11株,对其进行26SrDNA D1/D2区序列分析、形态学观察和生理生化测定,将编号为PJ16的菌株鉴定为酵母属酿酒酵母种（ Saccharomyces cerevisiae）。通过耐受性及发酵性能测试,表明菌株PJ16适合用于酿造葡萄酒。所酿葡萄酒的香气成分,如正己醇、1-壬醇、2-壬醇、壬醛、苯甲醛、乙酸乙酯、乙酸异戊酯、异戊酸乙酯、乳酸乙酯、乙酰苯、苯并噻唑、2-乙酰基呋喃、2-甲基四氢噻吩-3-酮和β-突厥酮,浓度远高于对照组商品酵母所酿葡萄酒,体现出酿酒酵母PJ16的优良特性。     

用透射电子显微镜确定嗜酸红假单胞菌的形态分类

利用透射电子显微镜对实验菌P－3O1菌株进行形态学分类,为该菌株是嗜酸红假单细胞菌的福建变种（Rhodopseudomonas acidophila var.Fujianensis n.var.）的鉴定奠定了形态学的依据。     

云南传统发酵豆豉中细菌的分离与分子鉴定

目的:为了明确云南传统发酵豆豉中细菌的种类,对云南传统发酵的豆豉进行研究。方法:采用平板稀释法进行菌种分离,利用分子生物学方法对分离到的菌株进行鉴定。结果:随机选择的130株细菌菌株属于3个属5个种,分别是芽胞杆菌属(Bacillus)3个种、葡萄球菌属(Staphylococcus)1个种和肠杆菌属(Enterobacter)1个种。其中枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)占所分离菌株的79.23%,是云南传统发酵豆豉的优势菌。结论:分离出的枯草芽胞杆菌有望作为实现云南传统发酵豆豉纯种发酵的主要菌种。     

蛇足石杉一株盘菌目内生真菌的分类鉴定

目的对分离自蛇足石杉的一株盘菌目内生真菌菌株LYS02进行分类鉴定.方法采用形态学、分子生物学和分子系统学方法对蛇足石杉内生真菌菌株LYS02进行了形态学、r DNA ITS的测序和系统发育分析研究.结果菌株LYS02与Pezizales sp. CL309 (KJ407058. 1)有着更近的发育关系.结论菌株LYS02为盘菌目(Pezizales)中的一未知种,该种为微生物资源的开发和利用提供了一种新的菌种资源,可为研究和分析真菌间的系统发育关系提供新的支持材料.     

度夏仿刺参病原菌伯麦罗氏弧菌的分离鉴定和特征研究

以患有腐皮综合征的度夏仿刺参(Apostichopus japonicus)为对象,从其体壁病灶处分离纯化获得一株病原细菌.通过传统细菌鉴定方法对病原菌的形态学、生理生化特征和培养特征进行研究;以16SrRNA基因测序为基础,结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)进行鉴定,结果表明该菌株在分类上属于伯麦罗氏弧菌(Vibrio pomeroyi);人工感染实验验证了不论是注射感染还是浸浴感染,该菌株均能导致仿刺参发病甚至死亡.此外,将本次实验获得的伯麦罗氏弧菌菌株SUS(V.pomeroyi SUS)与伯麦罗氏弧菌的其他菌株,如V.pomeroyi LMG20537T(典型菌株)、V.pomeroyi 929进行比较,探讨了来自不同海域的菌株生理生化特征与环境因子之间的关系.研究结果显示:伯麦罗氏弧菌为南移度夏仿刺参腐皮综合征的病原菌,而且表明MALDI-TOF MS技术结合微生物数据库MALDI Biotyper系统的鉴定方法准确、便捷、重复性高,非常适合于传统鉴定方法易混淆的种类鉴别,这为南移仿刺参的疾病检查和预防奠定了基础.     

产纤溶酶菌种的鉴定及纤溶酶的分离纯化

为了获得纯纤溶酶并探讨其酶学性质,从广泛收集的豆豉中筛选到一株具有高产纤溶酶能力的菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌.将该菌突变株DC-12N8的发酵液经离心除菌、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤,获得电泳纯的豆豉纤溶酶,每升发酵液可得到4.5mg活性酶蛋白,每克酶蛋白活力达1.18mol/s,纯度为发酵原液的53.6倍,回收率为11.7%.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,该酶是单链蛋白质,其分子质量约为28ku.     

苯酚降解菌TX1的分离鉴定及其代谢途径

从受酚类污染的土壤中分离筛选出一株能够高效降解苯酚的菌株.通过形态学、生理生化及26S rDNA测序等手段对其进行初步鉴定,确定该菌株为丝孢酵母菌属(Trichosporon sp.),并命名为Trichosporon mycotox-inivorans sp·X1.该菌株最适宜的降酚培养条件是:温度30℃、pH7.0、摇床转速150r·min-1.研究结果表明,该菌株对苯酚的代谢途径是细胞膜和细胞质上的苯酚羟化酶先将苯酚转化为邻苯二酚,进而通过邻苯二酚1.2-双加氧酶(C12O)邻位开环裂解,C12O为诱导型胞内酶.     

一株铜绿假单胞菌的分离鉴定及其对VPAHPND拮抗效果的评价

近年来，急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND)造成了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖业巨大的经济损失，其病原为一类含有致病基因PirAB的弧菌(Vibrio),主要为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP_AHPND).本研究以VP_AHPND为受试菌株，从江苏海域捕获的黄姑鱼(Nibea albiflora)体内分离筛选对VP_AHPND具有抑制作用的拮抗菌株.通过形态学、生理生化及分子生物学方法进行鉴定，研究了其拮抗效果、拮抗活性物质，并对生物安全性和被动保护效果进行评估.结果表明，分离筛选出1株具有良好拮抗效果的菌株JSHY97,经鉴定该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa).该菌株对3株具有不同分型的VP_AHPND均具有良好的拮抗效果，其抑菌圈直径达19.25 mm～21.80 mm,初步判断其活性物质来源于胞外产物.口服JSHY97的凡纳滨对虾...     

一株耐镍寡养单胞菌的分离及鉴定

从福建某五金厂综合污水中筛选到一株对Ni2+耐受性400 mg/L的菌株,对其形态学、16S r DNA序列及生理生化特征进行分析,并利用较佳生长条件对所得菌株进行Ni2+吸附验证.结果表明:该菌为革兰氏阴性杆菌,在牛肉膏蛋白胨培养基上形成的菌落,表面较光滑,边缘整齐;经16S r DNA序列比对及生理生化特征的分析,将菌株JMUZJ-1鉴定为寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.);菌株JMUZJ-1生长的较好条件是p H 7.0,温度30℃,Na Cl质量分数0.5%,在该条件下,菌株对Ni2+表现出良好的吸附性能.     

高效脱氮好氧反硝化菌的筛选及其污水处理工艺优化

从活性污泥中驯化、筛选并分离出1株能有效去除氨氮的菌株LX 1-3,经过形态学与分子生物学鉴定该菌株为副球菌属(Paracouccus sp),NCBI Gen Bank登录号为MH156598.对该菌株进行反硝化性能测试,结果表明该菌培养的最适条件为30℃,最适p H值为7. 0～7. 3,48 h后脱氮率为30. 7%.将该菌与1株高耐盐季也蒙毕赤酵母(KX447139)搭配,脱氮效率有显著提高.在好氧条件下,按照好氧反硝化菌与高效耐盐菌1∶1的接菌量配比接入污水中,30℃反应48 h后,氨氮去除率为86. 36%.该研究为提高污水脱氮处理效率提供了有效的方法.     

酵母细胞表达金属硫蛋白对铅离子的吸附研究

根据人肝金属硫蛋白的基因序列,结合酿酒酵母菌密码子使用规律,改造并合成了可在酵母细胞内高效表达的金属硫蛋白基因,并将该基因转入酵母细胞内进行了表达.以野生型菌株为对照,初步测定了酿酒酵母INVSC1-mt菌株对pb2+的吸附作用.研究结果表明,金属硫蛋白基因的表达有助于提高酿酒酵母细胞对pb2的吸附作用,其最大吸附量比野生型菌株提高了11％.同时,酿酒酵母INVSC1-mt菌株吸附pb2+的速度较快,在30 min时,其吸附率就达到了96.03％,吸附量为5.76 mg/g湿重细胞.而野生型菌株至120 min时,其吸附率才达到90.44％.     

光合细菌的分离鉴定及其对废水净化效果研究

为筛选能够高效净化当地废水的光合细菌,采用双层平板法,从宜宾当地废水中分离得到1株光合细菌,将其命名为YBX-1,并对该菌株进行形态学和生理生化实验,鉴定为红色假单胞菌.该菌株的最适生长条件为:45 W的白炽灯为光源,pH值为6.0~6.5,接种量为15%~20%.该菌株对宜宾本地3种废水的净化能力与外购对照菌株相当,最高CODCr去除率可以达到63.2%,具有潜在的应用价值.     

一株酵母菌的鉴定及初步应用

从塔罗科血橙园土壤中,获得一株酵母菌,经形态学与生理生化实验鉴定,确定为柠檬型克勒克氏酵母.用该菌株对甜橙皮发酵6d后,得到其分解利用效率分别是啤酒酵母的1.3倍,葡萄酒果酒专用酵母的1.2倍.     

1株嗜盐细菌ZSTB203的鉴定及其生长特性研究

采用形态学观察、生理生化反应和16SrRNA基因序列同源性分析方法,对嗜盐菌株ZSTB203进行鉴定,并对其生长特性进行研究.结果表明,ZSTB203菌株呈杆状,革兰氏染色阳性,具有芽孢,不含类脂粒.16SrRNA基因测序结果显示,该菌株与Halobacillus faecis NBRC103569的相似度达99.7%.进一步结合生理生化反应试验,将ZSTB203鉴定为喜盐芽孢杆菌属(Halobacillus)的成员.ZSTB203菌株的最适生长温度为30℃,最适生长pH 7.0,10%NaCl,生长需氧.