重组乙肝表面抗原结合蛋白(SBP)的制备及功能研究

先前的研究发现乙肝病毒表面抗原结合蛋白(Hepatitis B virus surface antigen binding protein,SBP)能够与乙肝病毒表面抗原结合并促进HBsAg与肝细胞的亲和性,为进一步探索该分子对免疫应答的调节功能,构建了表达载体pBV-SBP,并在E.coliDH5α中表达重组SBP.以Balb/c小鼠为试验对象,分为SBP试验组和对照组,首次注射乙肝疫苗21 d后,测定两组小鼠血清中抗乙肝疫苗抗体的效价.结果显示SBP试验组小鼠血清中抗乙肝疫苗抗体效价的平均值约为对照组的3.0倍(P<0.01),表明SBP能够显著提高乙肝疫苗的免疫效力,在试验期间Balb/c小鼠总体IgG水平未见显著变化.     

西归对睡眠剥夺小鼠单核细胞功能的影响

目的:研究西归乙醇提取物对小鼠睡眠剥夺模型非特异性免疫功能的影响.方法:随机将小鼠分为空白对照组,睡眠剥夺组,阳性对照组,西归高、中、低剂量组.空白对照组和睡眠剥夺组灌胃生理盐水;阳性对照组灌胃人参34.01 g生药/(kg·d);西归高、中、低剂量组分别灌胃80.88 g生药/(kg·d)、40.44 g生药/(kg·d)、20.22 g生药/(kg·d)的剂量,连续给药9 d.在第10天,将睡眠剥夺组,阳性对照组和西归高、中、低剂量组的小鼠采用单平台水环境法对小鼠进行SD,在SD期间,继续给予实验药物.3 d后,采用炭粒廓清试验观察药物对SD小鼠非特异性免疫功能的影响.结果:与睡眠剥夺对照组比较,西归高、中、低剂量组的廓清指数(K)值和吞噬指数(α)值显著提高(P<0. 05或P<0. 01).结论:西归具有增强SD小鼠免疫功能的作用.     

绿茶素对荷瘤小鼠红细胞免疫功能的影响

目的 :观察绿茶素对荷瘤小鼠治疗前后红细胞免疫功能的变化。方法 :将移植 S1 80 实体瘤的昆明种小鼠随机分为治疗组和对照组 ,并设一正常组 ,灌胃给药 ,检测肿瘤红细胞花环率。结果 :对照组肿瘤红细胞花环率与正常组相比显著降低 ;治疗组肿瘤红细胞花环率与对照组相比显著提高。结论 :荷瘤小鼠红细胞免疫功能比健康小鼠低 ,绿茶素能提高荷瘤小鼠机体的红细胞免疫功能     

小檗碱对小鼠体内抑菌作用的研究

目的:研究小檗碱对抑制小鼠体内沙门氏菌感染的效果.方法:通过将60只SPF级昆明小鼠随机等分为4组,每组15只.按体重计算1-3组小鼠分别按照低剂量(0.01 g/kg)、中剂量(0.02g/kg)、高剂量(0.03g/kg)灌胃小檗碱0.2 mL,第4组为空白对照组灌胃生理盐水,给药七天后皮下注射沙门氏菌(2.3× 108CFU)建立人工感染小鼠模型,并观察小鼠临床表现与死亡情况.结果:各剂量药物组对抑制小鼠体内沙门氏菌感染效果明显,其中高剂量组使小鼠死亡率下降60％左右.各药物组均显著延长感染小鼠的存活时间,其中高、中剂量组与空白对照组差异极显著(P＜0.01).结论:此研究证明小檗碱对革兰氏阴菌感染小鼠体有很好的抑菌效果,并具有一定量效关系.     

家蝇蛹凝集素对免疫低下小鼠免疫功能的影响

将家蝇蛹凝集素(MPL)分别按400μg/(kg·d)、800μg/(kg·d)、1 200μg/(kg·d)连续给小鼠灌胃10d,于第8d和第9 d给阴性对照组和3个剂量组小鼠腹腔注射环磷酰胺,造成小鼠免疫功能低下.观察家蝇蛹凝集素对免疫低下小鼠免疫器官指数、巨噬细胞的吞噬能力、脾脏淋巴细胞增殖和血清溶血值HC50的影响.结果表明,家蝇蛹凝集素能显著拮抗环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的免疫器官指数下降,提高巨噬细胞的吞噬能力,明显促进脾脏淋巴细胞增殖,且能使血清溶血素含量显著增加.说明家蝇蛹凝集素对环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下有较好的预防作用.     

双金花茶对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用

为了研究双金花茶对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用,将50只KM小鼠随机分为5组,双金花茶低、高剂量组(2.59、10.35 g/kg)每天灌胃1次,连续14 d,空白对照组、溶媒对照组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃.末次给药后,模型组和双金花茶组小鼠给予25％CCl4皮下注射,24 h后处死小鼠,检测小鼠血清中谷丙转...     

甘草苷对急性灌酒小鼠肝损伤的保护作用

为进一步研究甘草苷对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用,将50只小鼠随机分为对照组、酒精组及给药组三个剂量组,连续7天灌服给药.对照组、酒精组灌服蒸馏水,给药组分别灌服相应浓度甘草苷,第7天d末次给药后1h,除对照组外,酒精组和给药组均给予50％酒精(12 mL/kg)灌胃,建立急性酒精性肝损伤模型.观察灌酒后各组小鼠的状...     

灵芝提取物对提高小鼠机体免疫力作用研究

为研究灵芝提取物多糖和生物碱对小鼠机体免疫功能的影响,将36只雌性BALB/c小鼠随机分为3组(n=12),A组为多糖组,B组为组生物碱组,C组为空白对照组分别连续灌胃15 d(中期)和30 d(终期).灌胃结束后进行小鼠巨噬细胞吞噬能力、T淋巴细胞转化能力和外周血interferon-γ(IFN-γ)水平的测定.实验显示,灵芝提取物多糖和生物碱均能明显增强小鼠巨噬细胞吞噬能力和T淋巴细胞转化能力,同时可提高小鼠外周血中IFN-γ的表达水平.结果表明,灵芝多糖和生物碱能有效提高小鼠免疫功能.     

水溶性羟丙基壳聚糖衍生物对小鼠免疫功能的影响

将两种不同分子量的羟丙基壳聚糖衍生物(HPCS1,Mw=1.6×105;HPCS2,Mw=3.5×104)按不同的剂量对各实验组小鼠灌胃,通过测定小鼠免疫器官指数、碳廓清速率、迟发型变态反应、血清溶血素含量(HC50)比较分析水溶性壳聚糖衍生物的分子量和摄入量对小鼠免疫功能的影响。摄食羟丙基壳聚糖后,各项免疫指标均高于空白对照组;HPCS2与高剂量HPCS1组的各项免疫指标与对照组相比,呈显著与极显著性差异(P<0.05或P<0.01);灌胃期间,小鼠生长正常,无死亡和中毒症状发生。实验结果表明HPCS能增强小鼠免疫功能。     

KPC-rg1抗H1N1流感病毒活性研究初探

为了研究肉桂提取物KPC-rg1对H1N1流感病毒的抗病毒活性.本研究以C57BL/6近交系小鼠为研究对象,并将小鼠分为3组,分别是健康空白组、对照组和实验组,分别对应给予磷酸缓冲盐(PBS)溶液、H1N1流感病毒溶液和H1N1流感病毒+KPC-rg1混合溶液,饲养28 d,观察实验过程中各组小鼠的存活率,通过红细胞凝集抑制实验(HI)分析KPC-rg1抗H1N1流感病毒的血凝抑制效价,并采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法定量检测病毒载量.与健康空白组相比,对照组小鼠接受H1N1病毒攻击后,体质量急剧下降,并在第3天出现死亡,而实验组小鼠给药后2 d内体质量略微下降,之后恢复到正常增长水平,且无小鼠死亡;小鼠感染28 d后,对照组和实验组小鼠血清中均检测出高滴度的血凝抑制效价(128 HAV);病毒攻击后3 d,对照组和实验组小鼠肺部病毒载量均达到1×10~7 copies/50 mg(1 IU≈5.6 copies);实验终点所有攻毒存活小鼠的肺组织病毒均得到了有效的清除.由此可知,KPC-rg1可有效地灭活H1N1流感病毒,对小鼠有显著的保护预防作用;被灭活的病毒保留了完整的抗原性,形成"原位固化灭活"效应;KPC-rg1可促使小鼠产生强烈的免疫应答反应,使机体产生高滴度的抗病毒抗体.     

季节性流感病毒裂解疫苗在小鼠中的 安全性和免疫原性研究

目的 评价季节性流感病毒裂解疫苗在动物体内的安全性和免疫原性。 方法 按《 中国药典》 三部( 2015 版)方法进行 BALB / c 小鼠异常毒性试验。 免疫原性试验将 BALB / c 小鼠随机分为 2 组,试验组每只小鼠肌肉注射 0. 1 mL 测试疫苗,空白对照组注射 0. 1 mL PBS。 接种后连续观察 49 d,每天记录动物的活动、饮食及体质量情况。 分别于接种后 0、14、28、35 和 49 d,采血并分离血清,红细胞凝集抑制试验( hemagglutination inhibition,HI)检测血清 抗体水平。 结果 异常毒性试验结果提示该疫苗的安全性良好,对小鼠的生长无影响,符合《中国药典》 三部( 2015 版)判定标准。 免疫原性试验结果显示,BALB / c 小鼠免疫后 28 d,血清抗 A( H1N1) pam09 和 A( H3N2) HI 抗体阳 转率均达到了 100% ;免疫后 35 d,抗 B( Victoria 系) 的抗体阳转率达到 70% 。 BALB / c 小鼠抗 A( H1N1) pam09、A ( H3N2)和 B( Victoria 系)抗体水平均达到峰值。 结果表明,该季节性流感病毒裂解疫苗对小鼠进行一次性免疫, 即能达到良好的免疫效果。 结论 该流感病毒裂解疫苗在 BALB / c 小鼠中具有良好的安全性和免疫原性。     

单价流感疫苗脂质体干粉细胞免疫研究

从细胞免疫水平考察流感疫苗脂质体干粉肺部免疫的免疫原性,以验证在稳定性提高的同时,流感疫苗脂质体干粉肺部免疫原性不低于现行应用的流感疫苗原液腹腔注射免疫。将实验小鼠分为2个大组,每组分为阴性对照组、疫苗脂质体冻干粉组、非脂质体流感疫苗原液组和阳性对照组(n=5)。非脂质体流感疫苗原液组和疫苗脂质体冻干粉组分别以每只6μg血凝素(以H1N1计)肺部灌注免疫,同时以每只6μg非脂质体流感疫苗原液组腹腔免疫作为阳性对照。分别免疫14 d和28 d后,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测脾淋巴细胞增殖情况,以考察其细胞免疫原性。脂质体肺部免疫可以诱导细胞免疫,且其免疫原性明显高于流感疫苗原液传统腹腔注射免疫组。与流感疫苗原液腹腔注射免疫相比,流感疫苗脂质体干粉通过肺部免疫,细胞免疫效果明显提高。     

三种重组乙型肝炎疫苗异常毒性检查对动物影响的比较

摘要:目的 观察和比较三种重组乙型肝炎疫苗异常毒性检查对动物体质量增长情况和注射后状态的影响,探讨采用不同药用辅料生产的重组乙型肝炎疫苗检查对动物的影响。 方法 汇总 2016 年 3 月—2018 年 2 月,重组乙型肝疫苗(汉逊酵母 Hansenula ploymorpha) 、 重组乙型肝疫苗( 酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae) 和重组乙型肝炎疫苗( CHO 细胞)的异常毒性检查中的动物体质量和注射后状态情况,采用 IBM SPSS Statistics 23 分析软件进行统计分析。 结果 疫苗的异常毒性检查结果均符合规定。 注射疫苗后,动物均未见异常。 比较空白对照组 ICR 小鼠和三 种 乙 型 肝 炎 疫 苗 给 药 组 ICR 小 鼠 体 质 量 增 长 值, 差 异 没 有 统 计 学 意 义 ( P > 0. 05 ) , 重 组 乙 型 肝 疫 苗( S. cerevisiae)给 药 组 小 鼠 的 体 质 量 增 长 的 平 均 值 大 于 重 组 乙 型 肝 炎 疫 苗 ( CHO 细 胞) 和 重 组 乙 型 肝 疫 苗( H. ploymorpha)给药组小鼠的体质量增长值,差异有统计学意义( P< 0. 05) ;比较空白对照组 Hartley 豚鼠和三种乙型肝炎疫苗给药组 Hartley 豚鼠的体质量增长值,重组乙型肝炎疫苗( CHO 细胞) 组豚鼠与空白对照组豚鼠的差异,有统计学意义( P<0. 05) ,其他两组动物与空白对照组动物的差异无统计学意义( P> 0. 05) ,比较三种疫苗的给药组豚鼠的体质量增长值,差异没有统计学意义( P> 0. 05) 。 结论 本研究中的实验动物一般状态观察未见明显差别,均没有观察到文献记载的因铝佐剂导致的 ICR 小鼠腹膜刺激症状;三种重组乙型肝炎疫苗对 ICR 小鼠给药后 7 d 内的体质量增长值影响不同;对 Hartley 豚鼠给药后 7 d 内的体质量增长值未见明显影响。     

重组戊型肝炎疫苗的免疫原性试验

目的　研究重组戊型肝炎疫苗的免疫原性。方法　通过对小鼠、新西兰兔的多点皮内注射及肌肉注射 ,然后测定其抗体效价 ,研究重组戊型肝炎疫苗的性能。结果　小鼠在免疫 7d后开始产生抗体 ,两周抗体阳性率为80 % ,四周抗体阳性率达 10 0 %。新西兰兔从第二周后开始产生抗体 ,第三周达到高峰 ,抗血清在 1∶6 4 0 0稀释度的阳性率达 4 0 %。结论　重组戊型肝炎疫苗免疫动物具有良好的免疫原性 ,为进一步研究开发戊肝疫苗对人体的免疫提供了基础     

用于乙肝疫苗效力检定的小鼠种群的建立

目的在进行乙肝疫苗效力检测时应用统一的动物种群。方法目前评价乙肝疫苗免疫效力的主要方法是用小鼠测定乙肝疫苗的ED50值(接种疫苗后使50%的动物抗体阳转的疫苗稀释度的倒数),而小鼠对HBsAg免疫应答的水平与H-2单倍型密切相关。因此我们通过微量细胞毒法和PCR方法检测小鼠的H-2单倍型的特点,得出乙肝疫苗与不同动物种群的相关性,解决实际工作中的问题。结果通过多方面的实验验证,NIH鼠可以对乙肝疫苗产生高应答效应。结论NIH鼠的H-2单倍型中有q型基因,同时NIH鼠保持了原封闭群动物繁殖力强生长速度快等优点,所以便于进行乙肝疫苗效力检测时应用。     

海豚链球菌灭活疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

用野外分离的海豚链球菌(Streptococcus iniae)海水菌株HD-1和淡水菌株TBY-1制备成含1×1010cfu/mL的灭活疫苗,以0.1 mL/尾的剂量对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)进行腹腔注射,免疫2次,测定免疫后1周、3周和5周免疫鱼血清中抗海豚链球菌的抗体滴度和相应菌株攻毒后的相对保护率,以评价海豚链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫保护性.结果显示免疫鱼血清中抗体凝集效价在免疫后第3周和第5周呈显著性升高,且两种疫苗免疫血清存在明显的交叉凝集反应,说明HD-1和TBY-1抗原具有交叉免疫原性.在免疫后第4周,利用8倍半数致死量浓度(LD50)的海豚链球菌强毒菌株进行攻毒试验,结果显示:HD-1和TBY-1免疫组的死亡率分别为5%和0%,相对保护率分别为93.8%和100%;未经免疫的阴性对照组的死亡率分别为77.5%和62.5%.     

DNA疫苗经基因枪介导的免疫研究

将基因枪介导的DNA疫苗用于小鼠腹部免疫,并用免疫组化法检测gD抗原在接种部位的表达,利用ELISA检测血清中的抗gD抗体,并采用病毒攻击检测DNA疫苗对动物的保护效果。结果表明,基因枪可有效地将DNA质粒运送至小鼠皮肤组织,DNA疫苗携带的抗原保护基因gD2糖蛋白能在真皮和肌肉组织中高效表达。同时,免疫小鼠体内产生高滴度的中和抗体,能有效抵抗HSV2病毒的攻击。     

甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的体液免疫影响*

目的 研究甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的影响。方法 选取49只雌性ICR小鼠,分7组,每组7只,这7组小鼠分别为阴性对照、单纯抗原组、铝佐剂组和4组甘油-3-磷酸组,分别在免疫之后的第4、8、12、16、20周用酶联免疫法(ELISA)测定小鼠血清中的特异性的anti-HAV IgG水平。结果 在小鼠免疫之后的第4、8、12、16、20周单纯抗原组、铝佐剂组和4组不同剂量甘油-3-磷酸组均能检测到特异性抗HAV抗体,并且趋势为先升高后降低,且在免疫后的第8周最高;第4周和第8周的甘油-3-磷酸实验组的结果均高于单纯抗原组,且差异均具有统计学意义(P<0.05),并且第4周甘油-3-磷酸组抗体水平均超过铝佐剂组,并具有统计学意义(P<0.05),其中甘油-3-磷酸2 mg为最佳剂量组,其抗体水平在免疫后的第4、8、12、16、20周均高于单纯抗原组,且在第8周抗体水平达到峰值,抗HAV IgG水平为lg(3.064±0.07851),铝佐剂的也是在第8周抗体水平达到峰值,抗HAV IgG水平为lg(3.150 ±0.1382)。结论 甘油-3-磷酸有免疫佐剂的作用,能够有效、迅速地增强HAV诱导的体液免疫应答,是一种潜在、安全有效的新型疫苗佐剂。     

ELISA法替代RIA法测定重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)效价

分别用ELISA法和RIA法测定重组乙肝疫苗(CHO细胞)效价,将血清抗-HBs阳转率及ED50值(稀释度)进行统计学分析,对全部样本的阳转率进行X2检验,P0.05,按α=0.05水准分析,说明两种方法的阳转率差异不显著;对检测结果进行t检验,0.05P0.1,按α=0.05水准,说明两种方法检测结果差异不显著。因此,可用ELISA法替代RIA法测定乙肝疫苗效价。     

Protection against malaria by immunization with plasmid DNA encoding cholera toxin B subunit andPlasmodium falciparum epitopes

Cholera toxin B subunit is a good carrier protein and an effective adjuvant which can boost both cellular and humoral immunity. DNA fragments encoding B cell, Th cell and CTL epitopes of P. falciparum CS, MSA-1, MSA-2 and RESA antigens were cloned down-stream of cholera toxin B subunit gene in the same reading frame. Another modification using IL2 as adjuvant was also made. High titer of anti-malaria epitopes antibodies and strong cellular immunogenicity were elicited after Balb/c mice were immunized three times with 100 μg recombinant plasmid DNA dissolved in 100 μL PBS. 200 vaccinees were challenged with mouse Plasmodium yoelli to investigate if cross protection existed. The protective efficacy was about 50%. And it is found that the protective efficacy is correlated with CTL activity which was considered to be the primary effects of anti-sporozoite protective immunity. Better results might be expected when the DNA vaccine candidates were applied to primates.