3D培养技术在细胞培养中的应用

细胞培养是研究体内细胞在体外生物学行为的重要的研究手段。传统的细胞培养是在培养皿或培养瓶的二维平面上进行的,这与细胞在体内所处的三维生长环境有着很大的区别。三维(3D)培养则是一种可以使细胞在体外条件下在进行三维生长的培养方法,可以更好地模拟细胞在体内的生长状况及环境。在三维培养条件下细胞的许多生物学行为与传统的二维培养有着很大的不同,其应用领域也有更广泛的扩张,具有重要的研究意义。本文将对三维细胞培养的发展、特点及应用进行简要的综述。     

鲢和鳙单倍体和二倍体单个囊胚的细胞培养

对鲢、鳙单倍体和二倍体单个囊胚胚胎进行培养.结果表明,单倍体和二倍体细胞对培养条件的要求相差不大,其原代培养细胞的生长特点表现为新生细胞主要沿着组织块边缘重叠生长,向外扩展生长的速度非常缓慢.二倍体的鲢和鳙胚胎细胞培养物成活率相对高于单倍体,其中鲢二倍体胚胎细胞传代细胞占细胞培养数的18.06%.本结果对深入开展鲢、鳙核移植及胚胎干细胞研究具有积极意义.     

悬浮培养红豆杉细胞中影响细胞生长和紫杉醇产量若干因？…

综述了悬浮培养红豆杉细胞生长状态、植物生长调节因子、糖分、氨基酸、无机盐、ｐＨ值及光照等因素对细胞悬浮培养生产紫杉醇的作用,为探索生产紫杉醇的最适条件和大规模细胞培养（生产紫杉醇）提供理论依据。     

悬浮培养红豆杉细胞中影响细胞生长和紫杉醇产量若干因素的研究进展

综述了悬浮培养红豆杉细胞生长状态、植物生长调节因子、糖分、氨基酸、无机盐、ｐ Ｈ值及光照等因素对细胞悬浮培养生产紫杉醇的作用,为探索生产紫杉醇的最适条件和大规模细胞培养（生产紫杉醇）提供理论依据     

JAL1杂交瘤细胞的批量培养研究

研究了不同葡萄糖、谷氨酰胺浓度下JAL1细胞的生长、糖耗、乳酸及氨的生成、单抗合成等代谢过程及该株细胞的基本代谢规律，同时对该株细胞生长和单抗生产的动力学方面进行了研究，在细胞培养箱中，采用方瓶批量培养杂交瘤细胞，培养条件为pH7.0-7.5，温度37℃，5％CO2。实验表明，在不同浓度葡萄糖、谷氨酰胺的培养液中，细胞的活性细胞密度、总细胞密度、细胞活性上均有不同，相应地，对细胞的最大比生长速率、葡萄糖最大比消耗速率、乳酸最大比生成速率以及单抗最大比合成速率也有不同程度的影响。实验结果还表明，该株细胞的单抗分泌是属于负生长耦联型的。     

银杏细胞悬浮培养及其黄酮类物质生产

探讨了银杏细胞悬浮培养过程中诸多因子对细胞生长率和黄酮类化合物含量的影响，结果表明：液体培养基以N6＋NAA（1.6-1.8) BA0.5为最好；最适接种量为2.5g-3.0g／瓶（鲜重），最适pH值为6.0-6.5，附加MES效果更好；碳源以40％葡萄糖进行细胞培养的30％蔗糖进行黄酮生产较好；细胞生长和生产黄酮的激素、碳源等培养条件不同，激素类以NAA（1.6-1.8) BA0.5进行细胞培养、以GA0.5 KT1.0进行黄酮生产最佳，附加黄酮前体物PLA可提高黄酮产量，放线菌素－D不适合黄酮类药用物质生产。     

中国红豆杉悬浮细胞培养动力学的研究

考察了中国红豆杉悬浮细胞培养中细胞生长的动态变化，培养基中主要营养成分的消耗，细胞的氧消耗速率，以及次级代谢产物紫杉醇的生产状况。实验结果表明，细胞比生长速率为０．１２９／ｄ，紫杉醇的积累与细胞生长呈部分相关在，培养静止期达到高峰。     

微重力细胞培养与组织工程

组织工程主要致力于组织和器官的形成和再生，其核心就是建立细胞与生物材料的三维复合体，形成具有生命力的活体组织，用于对病损组织进行形态结构和功能的重建并达到永久性替代。目前有关微重力和模拟微重力条件下细胞体外生长的研究提示微重力培养环境有利于细胞体外增生，维持有功能的细胞长期生长，并且有助于形成组织样结构，使培养得到的组织更接近于活体组织。因此微重力细胞培养为组织工程的研究开辟了新的前景。     

红豆杉细胞培养与紫杉醇形成的研究

研究表明红豆杉细胞培养物中含有紫杉醇（Taxol);采用苯基柱．甲醇：乙醇：水（20：32：48）为流动要的HPLC测定条件,细胞培养物中的Taxol与其他化合物的分离效果较为理想;25度,pH5.8的培养条件较适合红豆杉细胞生长和Taxol的形成,减少KNO3,CaCl2.2H2O浓度,增加（NH4）2SO4浓度均能促进红豆杉细胞生长,增加Taxol的形成量。     

应用相差显微镜和扫描电镜对离体培养的大白鼠甲状腺滤泡上皮细胞的研究

利用 Ham's F_(12)培养液对大白鼠甲状腺细胞进行了原代细胞培养,在相差显微镜下观察了培养的甲状腺细胞贴壁及生长情况,还对甲状腺的组织小块贴壁实验进行了反复观察,结果证明,在我们的试验条件下组织块贴壁细胞培养技术有利于大白鼠甲状腺细胞的培养.我们还把甲状腺组织小块接种在玻璃盖片上,并用相差显微镜及扫描电镜对培养的甲状腺细胞表面形态进行了观察,发现在 Ham's F_(12)培养液内加入15%胎牛血清,甲状腺细胞生长良好,细胞呈园形而小,核内有1-2个核仁,还能见到细胞分裂的图像.     

核糖体蛋白RPL34-PS1对B细胞淋巴瘤的生长促进作用

一种核糖体蛋白RPL34具有促进B细胞淋巴瘤生长的作用,通过分子克隆将RPL34基因的序列克隆到逆转录病毒载体pBABE-Puro上后,包装逆转录病毒并感染Balb/c小鼠来源的B淋巴瘤细胞38B9,经嘌呤霉素筛选后构建稳定过表达RPL34的B淋巴瘤细胞系RPL34-38B9。体外培养计数比较细胞增殖变化情况;流式检测细胞凋亡和细胞周期水平;小鼠皮下荷瘤并测量肿瘤体积。结果表明:过表达的核糖体蛋白RPL34能够显著促进B淋巴瘤细胞的生长速率,减少细胞凋亡,同时能够显著增加B淋巴瘤细胞的成瘤速率。     

粉纹夜蛾5BI细胞的悬浮培养

报道了粉纹夜蛾５ＢＩ细胞在转瓶系统悬浮培养及血清浓度，细胞接种浓度，非离子表面活性剂Ｐｌｕｒｎｉｃ－Ｆ－６８等对细胞生长的影响与作用，实验结果显示：５ＢＩ细胞能够搅拌条件下，在含５％血清培养基中正常生长增殖，当血清浓度降至２％时。细胞生长速率产生较明显变化，ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ－６８对细胞生长有显著的保护作用，５ＢＩ细胞适宜于悬浮培养和进一步放大培养。     

伊贝母细胞悬浮培养的研究

研究了伊贝母细胞悬浮培养过程中接种量、培养方式和激素浓度对细胞生长的影响；测得细胞生长周期为１９～２４ｄ；分析了培养液的ｐＨ、蔗糖浓度、电导率和Ｄｏ变化的原因。鉴定了悬浮培养细胞中含有生物碱，其总生物碱和西贝素含量均高于栽培鳞茎。     

Effects of medium nutrition on cell growth and isocamptothecin A and B production by suspension cell culture of Camptotheca acuminata

The effects of initial sucrose concentration, nitrate to ammonium ratio, total N concentration and phosphate concentration in medium on cell growth and isocamptothecin A and B synthesis by suspension call culture of Camptotheca acuminata were investigated in 250 mL shake flasks. 30 g L^-1 sucrose concentration was beneficial to secondary metabolites synthesis. The cell growth and metabolites synthesis were also affected by the ratio of NO3^-/NH4^＋ , and nitrate was tavourable for cell growth. The maximum dry weight was achieved when nitrate was used as the sole N souree. The effect of total initial N on the cell cultures was also investigated with NO3^-/NH4^＋ ratio of 1 ： 2. The final dry cell weight was similar throughout culture period and 50 mM initial N was favourable for secondary metabolite synthesis. 50 mM initial phosphate concentration facilitated both cell growth and secondary metabolites synthesis.     

红豆杉胚源细胞株的培养和紫杉醇的生产

研究了建立适用于紫杉醇生物合成的红豆杉 ( Taxus chinensis)胚源细胞株的方法 .红豆杉成熟种子 ,用自来水冲洗 9d,培养 1 0 d,萌发率可达 1 0 0 %.已萌发的种胚在诱导培养基中培养 6d,愈伤组织的诱导率达 1 0 0 %,使用红豆杉茎源细胞株看护培养诱导出的愈伤组织使愈伤组织的继代成活率提高一倍 .红豆杉茎源细胞株生长 1 5d的条件培养液也能使愈伤组织继代成活率提高 60 %.对建立的胚源细胞株进行了筛选和培养 ,其中细胞株 E2和 E3生长快 ,紫杉醇含量也较高     

小鼠精原干细胞的体外培养与鉴定

建立一种简单、有效体外分离和培养精原干细胞（Spermatogonia stem cell,SSCs）的方法。采用酶消化6—8d新生小鼠睾丸制备睾丸细胞悬液后进行培养,碱性磷酸酶（AKP）染色和间接免疫荧光对培养的细胞进行鉴定;结果显示：SSCs培养3～5天可观察到细胞克隆的产生,AKP染色强阳性;间接免疫荧光显示GCNF阴性,oct-4、c—kit均呈阳性反应。由此可知以DMEM＋15％胎牛血清＋白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）＋L-谷氨酰胺等为培养基,成功建立了精原干细胞的体外培养体系。     

大肠杆菌内毒素对Vero细胞培养的作用研究

将精制大肠杆菌内毒素(E.COliEndotoxin)加入含血清细胞培养液(MEM)中,配制成浓度分别为50、100、200、500EU/mL的细胞培养液 用此培养液对Vero细胞进行培养,测定细胞生长曲线、细胞平均倍增时间、最大增殖浓度及台盼蓝拒染率等指标,研究大肠杆菌内毒素对非洲绿猴肾细胞(Vero)培养的影响 结果显示,内毒素含量为50EU/mL时,Vero细胞仍能正常生长 当内毒素含量逐渐升高,培养时间逐渐延长时,细胞的增殖速度及活率明显下降 这表明,内毒素对Vero细胞的生长及活性具有明显的抑制作用,且该作用具有一定的时间、剂量依赖性     

缺氧胁迫小细胞团法选育高产黄酮苷悬浮细胞系

以银杏优良品种的种苗诱导愈伤组织,考察了B5,sH,MS,White4种培养基对银杏愈伤组织生长性状和黄酮苷合成能力的影响,采用缺氧胁迫小细胞团法从愈伤组织中筛选高产黄酮苷的细胞系,并对细胞系在悬浮培养时的条件进行了优化.结果表明TZG-1培养周期18d,生长指数为4.12,黄酮苷含量为1.25％,比愈伤组织提高了257.1％;Ms培养基有利于形成质地松软的愈伤组织,当培养基中NH4+与NO3-的浓度比为20.3/39.4或10.3/29.1,蔗糖质量浓度为30g/L或40g/L,pH值为5.6～6.0时,有利于细胞生长和黄酮苷合成.     

高生物产量川芎细胞悬浮培养条件优化

在基本培养基为MS的基础上,研究激素浓度、接种量等因素对川芎悬浮细胞生长的影响,建立川芎细胞悬浮培养体系.实验结果表明:川芎悬浮细胞同步化继代培养液生长16 d左右,对数生长中后期时,按照1∶4(V/V)悬浮液,新鲜培养液,以MS+6-BA 0.5 mg·L-1+2,4-D 2 mg·L-1+30 g·L-1蔗糖培养基可获得较高产量的川芎悬浮细胞,湿重达到182.6 g·L-1,干重达到39.2 g·L-1.