一株耐盐芽孢杆菌的分离与鉴定

从校园草坪土壤中分离得到一株能够在20%NaCl的高盐条件下生长的耐盐细菌,经过形态观察、生理特征分析及16SrDNA序列分析,鉴定为一株芽孢杆菌(Bacillussp.),并在GenBank中完成该菌株16SrDNA序列的注册,登录号为EU167738.     

高产芽孢杆菌MS12木聚糖酶发酵条件优化及酶学性质研究

从昆明某磷矿土壤中筛选出一株产木聚糖酶能力较强的菌株——MS12,通过单因素试验初步优化了该菌株的产酶条件.试验结果显示,该菌株最佳产酶培养基为玉米芯粉50 g/L、麸皮40 g/L、NH_4Cl 10 g/L、CaCl_2 5 g/L、NaHPO_42 g/L,pH自然;最佳产酶发酵条件为30℃,180 r/min,装样量30 mL/250 mL三角瓶,震荡培养96 h.经测定,菌株MS12所产木聚糖酶的最适反应温度为65℃,最适反应pH值为7.0,具有较好的pH稳定性. 1 mmol/L Na~+、Ba~(2+)和10 mmol/L Ca~(2+)、Mg~(2+)对酶活有促进作用,Ag~+对酶活有明显的抑制作用.     

芽孢杆菌WF63脂肪酶分离纯化及酶学性质

芽孢杆菌WF63脂肪酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、Sephaery1 S200柱层析、CMSephrose FF柱层析,得到纯化的脂肪酶,纯化倍数为9.45倍,活性回收率为4.27%.对该酶性质研究表明:该酶水解橄榄油的最适温度为50℃,最适pH为8.0,在60℃以下和pH4~10之间有很好的稳定性.K+,Mg2+对该脂肪酶的水解活性有促进作用,而Na+,Mn2+,Ca2+对脂肪酶则没有显著的促进作用,Fe2+对酶活的抑制作用不明显.浓度为0.1%时,Triton X-100对脂肪酶活力有明显促进作用;Brij 35,Tween-80对酶活力的影响不明显;离子型表面活性剂SDS则表现出抑制作用.     

Structure and control of phosphofructokinase from Bacillus stearothermophilus.

The allosteric enzyme phosphofructokinase binds its substrate fructose-6-phosphate between two subunits of the tetramer, and allosteric effectors between another pair of subunits. The effector binding site accommodates both the activator and the inhibitor. The substrate cooperativity and allosteric control are mediated by these ligand bridges between subunits.     

枯草芽孢杆菌葡聚糖内切酶的克隆与表征

利用已公布的枯草芽孢杆菌基因组序列中假定的葡聚糖内切酶基因进行引物设计,从菌株Bacillus sp.ECU0013中克隆表达得到重组葡聚糖内切酶BsEG.经镍柱纯化后进行酶学性质表征,其最造反应pH约为6.0;最适反应温度为50℃,具有较好的热稳定性,50℃时半衰期达101h.Km值为20.1 g/L,相应的Vmax...     

芽孢杆菌纤溶酶稳定性的研究

芽孢杆茵纤溶酶是一种微生物来源的新型溶栓酶，作者研究了pH，温度，金属离子及某些有机物质对该酶稳定性的影响，应用“系统数值化及数值全面反馈技术”进行了一系列系统行为控制实验，优化了酶复合稳定促进剂．同时，为研究其作为溶栓药物的应用前景，在模拟人体胃肠环境中对该酶的稳定性进行了研究，发现其在胃环境中酶活损失较大而肠道中相对稳定，有望开发为肠溶型溶栓新药．     

Structure of cytochrome c nitrite reductase.

The enzyme cytochrome c nitrite reductase catalyses the six-electron reduction of nitrite to ammonia as one of the key steps in the biological nitrogen cycle, where it participates in the anaerobic energy metabolism of dissimilatory nitrate ammonification. Here we report on the crystal structure of this enzyme from the microorganism Sulfurospirillum deleyianum, which we solved by multiwavelength anomalous dispersion methods. We propose a reaction scheme for the transformation of nitrite based on structural and spectroscopic information. Cytochrome c nitrite reductase is a functional dimer, with 10 close-packed haem groups of type c and an unusual lysine-coordinated high-spin haem at the active site. By comparing the haem arrangement of this nitrite reductase with that of other multihaem cytochromes, we have been able to identify a family of proteins in which the orientation of haem groups is conserved whereas structure and function are not.     

泥土芽孢杆菌YMTC1049菌株高温蛋白酶产酶条件的优化

 报道高温蛋白酶产生菌YMTC1049(Geobacillus sp.)产酶条件的优化过程.在基础培养基中分别添加葡萄糖、麦芽糖、酵母提取物、蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白、聚胨等7种营养成分,获得对酶活影响较大的碳、氮源.用多因素正交试验设计考察了pH、酪蛋白、葡萄糖和温度对酶活的影响水平,菌株在优化发酵条件下培养24h时,上清液蛋白酶活力达312U/(mL·min).     

生物表面活性剂产生菌的发酵条件优化及其产物性能研究

对筛选出的一株能产生表面活性剂的芽胞杆菌DF-10的发酵液进行薄板层析,表明所产表面活性剂的主要成分为糖脂.确定了菌株产生表面活性剂的最适发酵培养基组成和发酵条件,并对DF-10所产表面活性剂的表面活性、乳化性能、起泡性能及其抗硬水性进行了研究.结果表明,DF-10所产表面活性剂表面活性和起泡性好,并有较强的乳化能力和抗硬水能力.     

表面活性剂对Achromobacter sp．CH-1解毒铬渣的影响

为提高细菌Achromobacter sp.CH-1(简称为A.sp.CH-1)解毒铬渣过程中酸溶性Cr(Ⅵ)的浸出率,研究不同表面活性剂对A.sp.CH-1的生长及其解毒铬渣效果的影响;通过考察表面活性剂的加入对细菌生长、Cr(Ⅵ)还原、铬渣中Cr(Ⅵ)浸出率以及浸出体系pH值的影响,评价不同表面活性剂促进A.sp.CH-1解毒铬渣的效果.研究结果表明:加入低浓度的表面活性剂对A.sp.CH-1菌的生长及其还原Cr(Ⅵ)没有显著影响;阴离子型表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)、非离子型表面活性剂吐温60、吐温80都能提高A.sp.CH-1解毒铬渣的效果,其最佳用量分别为75,200和250 mg/L:在此最佳用量下,铬渣中Cr(Ⅵ)的浸出率比原来分别提高约8%,9%和11%;阳离子表面活性剂十二烷基三甲基溴化铵(DTAB)对铬渣的解毒效果没有明显提高.     

芽孢杆菌(Bacillus sp. No.16A)苎麻脱胶研究

利用丙酮分级沉淀的方法,将Bacillus sp. No.16A发酵液中的果胶酶和甘露聚糖酶处理成不同活性比例的3组脱胶酶液.分别进行苎麻脱胶后,分析了纤维的一些特征,包括:手感柔软程度、纤维分散程度、果胶残留、失重率、纤维细度及扫描电镜图.通过比较发现,甘露聚糖酶对果胶酶的脱胶效果有一定的协同作用,前者能增强后者的脱胶效果.     

一株菌根辅助细菌(MHB)芽孢杆菌Bacillus sp.对杨树生长的影响

为探讨菌根辅助细菌(MHB)对杨树生长的影响,在温室条件下,将筛选到的菌根辅助细菌芽孢杆菌Bacillussp.DZ18分别与两种外生菌根真菌彩色豆马勃(Pisolithus tinctorius(Pers.)CokerCouch,Pt2)、劣味乳菇(Lactarius insulsusFr.Li)双接种于1年生美洲黑杨(Populus deltoides),处理120 d后,测定菌根形成率以及对杨树苗高、地径、根生物量、茎生物量、光合作用、矿物质代谢能力的影响。结果表明,芽孢杆菌DZ18与Pt2、Li双接种时与单接种Pt2、Li相比显著提高了杨树的菌根形成率,且无论单接种DZ18还是DZ18与两种外生菌根真菌双接种均对杨树的各项生长指标具有显著的促进作用。     

Purification and characterization of keratinase from a new Bacillus subtilis strain

The aim of this study was to purify and characterize a keratinase produced by a new isolated Bacillus subtilis KD-N2 strain. The keratinase produced by the isolate was purified using ammonium sulphate precipitation, Sephadex G-75 and DEAE (diethylaminoethyl)-Sepharose chromatographic techniques. The purified enzyme was shown to have a molecular mass of 30.5 kDa, as determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis. The optimum pH at 50 °C was 8.5 and the optimum temperature at pH 8.5 was 55 °C. The keratinase was partially inactivated by some metal ions, organic solvents and serine protease inhibitor phenylmethanesulfonyl fluoride (PMSF). Sodium dodecyl sulfate (SDS) and ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA) had positive effect on the keratinase activity. Reducing agents including dithiothreitol (DTT), mercaptoethanol, L-cysteine, sodium sulphite, as well as chemicals of SDS, ammonium sulfamate and dimethylsulfoxide (DMSO) stimulated the enzyme activity upon a feather meal substrate. Besides feather keratin, the enzyme is active upon the soluble proteins ovalbumin, bovine serum albumin (BSA), casein and insoluble ones as sheep wool and human hair. Calf hair, silk and collagen could not be hydrolyzed by the keratinase.     

高温芽孢杆菌碱性蛋白酶发酵条件及酶性质研究

从西藏尼木卡如林温泉附近土样中分离到一个碱性蛋白酶产生菌株SD-142．该菌株经初步鉴定为芽孢杆菌．在50℃条件下，以10％的接种量接种于发酵培养基中振荡培养48h后，发酵液中碱性蛋白酶活可达516U／mL．发酵培养基的组成成分为麦芽糖6％、豆饼粉3％、麸皮3％、Na2HPO4 0．4％、MgSO4 0．02％、CaCl2 0．02％，pH自然．对该酶的性质研究表明，其最适作用pH为9．5，最适反应温度为60℃，具有良好的pH稳定性和热稳定性，并且显示了与去污剂良好的相容性．     

假单胞菌HS-D36偏苯三酚1,2-双加氧酶克隆表达与催化特性研究

由pnpC编码的偏苯三酚1,2-双加氧酶(Hydroxyquinol 1,2-dioxygenase,PnpC)是微生物分解硝基芳香族类环境污染物的关键酶.本研究从对硝基苯酚(p-nitrophenol,PNP)降解菌HSD38(Pseudomonas sp.)中克隆pnpC基因,利用E.coli BL21(DE3)高效表达重组PnpC,通过亲和色谱纯化并分析其催化特性.实验结果表明:HS-D36的pnpC开放阅读框长度为873bp,编码290个氨基酸,酶蛋白相对分子量33KD;20℃、异丙基硫代-β-半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导可高效表达重组PnpC;重组酶经Ni-NTA亲和色谱一步分离可达到电泳纯;纯酶比活力9.3U/mg,纯化倍数37.2,活力收率23.8%;重组PnpC催化邻苯二酚开环反应的最适温度45℃、最适pH 5.0;Lineweaver-Burk双倒数作图表明PnpC对邻苯二酚降解的米氏常数(Km)为21.95mol/L、最大反应速度(Vmax)为2.68mol/(min·mg);Fe3+、Cu2+、Fe2+和Zn2+对该酶具激活作用,Ni 2+则显示抑制效应.     

汶川地震中底层框架砖房震害特点及分析

底层框架砖房是一种混合结构形式,底部一层全部或部分采用钢筋混凝土框架承重,上部多层采用砖墙承重,在我国城镇地区应用非常广泛,通常具有"上刚下柔"的结构特性。512汶川地震中不同烈度地区均有大量该类建筑严重破坏甚至倒塌,也有部分位于极震区的底框砖房表现出很好的抗震性能。地震发生后,四川大学组织了考察队,对地震灾区建筑物的震害情况进行了广泛深入的科学调查。在介绍和总结了汶川地震中底框砖房的表现——底层过大的水平侧移、过渡层严重破坏或完全坍塌、底层严重破坏或房屋完全倒塌、上部砌体整体发生侧移、以及设计和施工质量良好的底层抗震墙砖房"大震不倒"的基础上,得出以下结论和建议:在抗震设防地区应禁止使用部分底框砖房,地震中过渡层的实际受力情况与设计所采用的受力状态有明显的区别,规范应考虑砌体和钢筋混凝土材料的不同力学性质来制定上下层刚度比要求,明确对过渡层的延性和强度要求,明确该类结构抗震概念设计的具体措施。     

鱼腥藻铁吸收调节蛋白基因(alr0957)的克隆和表达

依据CyanoBase提供的鱼腥藻PCC7120 furC基因(alr0957)的序列信息设计了一对特异性引物,用Touch-down PCR的方法从基因组DNA中扩增得到大小约450bp的目的片段.通过TA克隆的方法将该片段连接到pMD18-T载体上筛选出重组质粒pMD18-T-fur,然后进行双酶切,纯化furC基因,再连接到原核表达载体pET-28a(+)上,转化表达菌株BL21(DE3).经PCR、双酶切和测序鉴定,对阳性菌株进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组蛋白.结果表明:在25℃条件下经1mmol/L IPTG诱导20h,融合蛋白被成功表达,其分子量约为19 000,为进一步纯化蛋白和对基因的调控功能方面研究奠定了基础.     

克雷伯氏菌N-5对三苯基锡的降解性能

通过耐受性实验,得到三苯基锡(TPT)高耐受性细菌N-5、N-6和酵母菌Ja、Jc.经初步测试,发现克雷伯氏菌N-5菌株的降解性能较为理想.性能研究表明,当菌龄为36 h且水样中菌质量浓度、TPT质量浓度、外加碳源葡萄糖质量浓度分别为14g/L、5、5 mg/L时,该菌对TPT的降解效果最好,5 d降解率达到50%左右.扫描电镜观察显示,该菌在有TPT存在的环境中,细胞发生明显变化,其变化程度随着TPT质量浓度的提高和处理时间的延长而加大,刺激强度较大时细胞变皱.且该菌体有集中起来抵御不良生长环境的自我保护机制.     

Structure of fumarate reductase from Wolinella succinogenes at 2.2 A resolution

Fumarate reductase couples the reduction of fumarate to succinate to the oxidation of quinol to quinone, in a reaction opposite to that catalysed by the related complex II of the respiratory chain (succinate dehydrogenase). Here we describe the crystal structure at 2.2 A resolution of the three protein subunits containing fumarate reductase from the anaerobic bacterium Wolinella succinogenes. Subunit A contains the site of fumarate reduction and a covalently bound flavin adenine dinucleotide prosthetic group. Subunit B contains three iron-sulphur centres. The menaquinol-oxidizing subunit C consists of five membrane-spanning, primarily helical segments and binds two haem b molecules. On the basis of the structure, we propose a pathway of electron transfer from the dihaem cytochrome b to the site of fumarate reduction and a mechanism of fumarate reduction. The relative orientations of the soluble and membrane-embedded subunits of succinate:quinone oxidoreductases appear to be unique.