一株产吩嗪羧酸抗生素的甜菜内生细菌的分离与鉴定

从中国农业大学试验田中生长的健康甜菜肉质根内分离到1株分泌高活性抗真菌色素物质的优势内生细菌TCl,通过形态学、生理生化特征和16SrDNA系统发育分析,确认该菌株为绿针假单胞菌致金色假单胞菌亚种（Pseudomonas chlororaphis subsp．aureofaciens）。对TCI发酵分泌物经硅胶柱层析分离提纯后,采用薄层层析（TLC）和紫外一可见光谱扫描分析确认其主要活性成分为吩嗪一1一羧酸（Phenazine一1一Carboxylic Acid,PCA）。从TCl菌悬液浸种处理过的甜菜苗根内可以重复分离到完全相同的菌株,表明TCl的确可以在甜菜根内定殖,该菌株有可能被制成活菌制剂作为生物农药直接应用于宿主植物病害的生物防治。     

香蕉皮内生细菌的分离纯化及初步鉴定

为了鉴定新鲜香蕉皮中通过分离纯化得到的一株细菌,本实验采用观察细菌菌落形态特征、生理生化鉴定试验以及16S rDNA基因序列分析等方法对该分离菌进行鉴定.结果表明,该分离菌为革兰氏阴性菌.此菌不能降解棉子糖、阿拉伯糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、乳糖、枸橼酸盐等,但可以降解尿素、甘露糖.经鉴定该菌株属于变形菌门、莫拉菌科、不动杆菌属细菌.该菌种在香蕉皮中的发现丰富了不动杆菌属细菌在环境中的分布,也为香蕉皮内生菌种的进一步开发和利用奠定了研究基础,因此本研究工作具有重要的理论意义和潜在的应用价值.     

一株白及内生细菌的分离鉴定及抑菌机理初步研究

从药用植物白及中分离内生细菌,采用滤纸片扩散法进行抗菌活性筛选,最终得到能够对4种致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、藤黄微球菌、胡萝卜果胶杆菌)有不同抑制作用的内生细菌BSR2010;采用3种有机溶液(乙酸乙酯、石油醚、正丁醇)对该菌株的发酵产物进行萃取并检测其抑菌活性,发现抑菌活性最强的为乙酸乙酯提取物;根据内生细菌...     

滇重楼茎组织内生细菌的分离、鉴定及促生菌筛选

为了开发利用重楼内生细菌资源,从滇重楼茎组织中分离获得128株内生细菌,采用16S rDNA序列分析,将其鉴定归类到3个门,4个纲,6个目,11个科,14个属,其中芽孢杆菌属是优势属(75.0％),研究结果初步揭示了其茎组织内生细菌的多样性.进一步将128株内生细菌分别与小麦幼苗进行共培养,通过检测株高、根长、根数和鲜...     

一株柑橘内生菌生长条件优化

采用单因子和正交试验相结合的方法,在摇床水平对柑橘内生菌YS4的生长条件进行研究。结果表明：最适生长条件为：温度30℃,pH8.0,接种量12%,种龄8h,摇床转速150r/min。     

哈密瓜内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

对新疆不同品种和不同种植地区的健康哈密瓜植株组织中内生细菌进行分离,共得到252个菌株.经鉴定分属于芽孢杆菌属(Bacillus spp.)、黄单胞菌属(Xanthomonas spp.)、假单胞菌属(Pseudomonas spp.)、欧文氏菌属(Erwinia spp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus spp.)及短小杆菌属(Curtobacterium),其中芽孢杆菌为优势种群.对内生细菌数量测定表明,不同品种、组织及种植地,内生细菌的数量不同,品种间内生细菌的数量变化为3.15×103～2.01×105CFU/g鲜重;各组织中以种子中最多,平均含量在6.18×106CFU/g鲜重;其次为根,再次为叶片,茎和叶柄中较少;对分离菌株进行哈密瓜叶斑病和果斑病菌拮抗菌的筛选表明,252株内生细菌中有71个菌株对叶斑病菌有拮抗作用,占菌株总数的28.2%,抑菌圈半径最大的可达8mm;6.7%的菌株对果斑病菌有拮抗作用.     

产酶苦豆子内生细菌筛选及其活性菌株鉴定

对苦豆子健康植株和种子内的内生细菌进行分离,共分离获得41株内生细菌.对41株菌株进行了分泌胞外淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶特性的研究.结果表明,有80.5%的菌株具有蛋白酶活性;有78.0%和61.0%的菌株具有淀粉酶和纤维素酶活性;具有几丁质酶和葡聚糖酶活性的菌株则较少.经16SrRNA基因序列分析鉴定,6株高活性产酶菌株与枯草芽孢杆菌属(Bacillus subtilis)、韩国丛毛假单胞菌(Pseudomonas koreensis)、固氮阴沟肠细菌(Enterobacter cloacae)、苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)和嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)亲缘关系较近,核苷酸序列一致性在98%以上.     

一株西沙群岛野生诺尼种子的内生细菌CICC 10594的分离与鉴定

以中国西沙群岛野生诺尼种子的内生细菌菌株CICC 10594为研究对象,利用基于形态学观察、生理生化特征鉴定及系统发育学分析的微生物多相分类鉴定技术,对CICC 10594的分类地位进行了鉴定与分析,结果显示,CICC10594为阴沟肠杆菌.     

海星内生细菌的分离与初步鉴定

从罗氏海盘车（Aster rollestoni Bell）的胃、幽门盲囊和生殖腺内共分离到20株菌株．其中从其胃中分离到14株,幽门盲囊中分离到5株,生殖腺中分离到1株．根据菌落及菌体形态特征和生理生化实验结果初步认定海星胃中的W1^#、幽门盲囊中的Y1^#以及生殖腺中的S1^#为同一菌株,另外海星胃中的两株菌株（W13^#、W2^#）分别与幽门盲囊中的两株菌株（Y3^#、Y4^#）相同．所得菌株中只有一株为革兰氏阳性球菌,其余为革兰氏阴性杆菌．实验表明海星内生细菌中有62．5％的菌株分属于假单胞菌属（Pseudomonas）和弧菌属（Vibrio）．     

一株产普鲁兰酶细菌的分离鉴定及其发酵条件优化

从淀粉加工厂附近土壤中筛选得到一株普鲁兰酶高产菌株,编号为Z-13,其初始酶活达到5.7 U/mL.通过对此菌株的16S rDNA比对,以及生理生化鉴定,鉴定此菌株为克雷伯氏菌(Klebsiella variicola),通过发酵条件优化,确定最佳发酵产酶条件为:玉米淀粉1.5%,蛋白胨2.0%,KH2PO40.05%,MgSO4·7H2O 0.01%.装液量为70 L/250 L,培养基最初pH为6.0,发酵温度30℃,摇床转速200 r/min,发酵时间48 h,优化后菌株产普鲁兰酶的酶活高达67.8 U/mL,是优化前菌株产普鲁兰酶活性的11.89倍.     

新疆远志内生真菌的分离及其代谢产物分析

采用组织块法从栽培新疆远志(Polygala hybrida DC)的根、茎、叶中分离内生真菌32株.利用化学成分的系统预试验,对部分菌株发酵液中代谢产物进行研究.结果表明:新疆远志内生真菌代谢产物的种类比较多,主要是皂苷、内脂、香豆素、生物碱、蛋白质及糖类物质.采用薄层层析(TLC)和紫外-可见光分光光度法对内生真菌发酵液进行分析,最终发现真菌YZ-31可代谢产生皂苷等成分.经形态学初步鉴定该菌株为交链孢霉属(Alternaria Nees)真菌.     

土木香内生细菌的分离鉴定及抑菌活性检测

利用组织分离法从用药植物土木香根、茎和叶中分离得到内生细菌32株.采用纸片法对菌株进行了抑菌活性研究,并运用生理生化与分子生物学方法进行种类鉴定.抑菌试验结果表明,10株内生菌发酵液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌以及禽多杀性巴氏杆菌均有不同程度的抑菌活性.鉴定结果表明,菌株YIR-5,YIR-7,YIR-8,YIR-9为假单胞菌属菌种,菌株YIR-3,YIR-6为沙雷氏菌,菌株YIR-4,YIS-1,YIS-2分别为水生拉恩氏菌、薄壁芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌,而菌株YIL-3归属于芽孢杆菌属.土木香内生细菌组成丰富,莫海威芽孢杆菌（Bacillus mojavensis）YIS-1对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和禽多杀性巴氏杆菌的抑菌活性最强.     

桔梗中多糖的提取及测定

桔梗是桔梗科多年生草本植物,具有较高的经济价值,为更好地利这种植物资源,服务于地方经济建设,我们研究了桔梗中多糖的提取及测定:用热水浸提、乙醇沉淀、DEAE-纤维素柱层析的方法从桔梗中提取并纯化桔梗多糖,用苯酚-硫酸比色法测定多糖含量,实验所得桔梗中多糖的含量为26.6%。     

萍蓬草的组织培养及快速繁殖的研究

以萍蓬草的嫩根茎为外植体,在附加不同浓度的BA、IAA、NAA和2,4-D的MS、1/2MS或1/3MS培养基上进行了愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、不定芽的生根、试管苗的移栽和移植研究,成功的建立起萍蓬草嫩根茎无性系,达到了快速繁殖的目的。结果表明：MS＋BA0.4-0.8mg·L^-1＋2,4-D1.2mg·L^-1是诱导嫩根茎形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基;1/2MS＋AgN031.2mg·L^-1＋BA0.3mg·L^-1＋NAA0.1mg·L^-1是诱导颗粒状愈伤组织和不定芽分化的理想培养基;1/3MS＋IAA0.5mg·L^-1的液体培养基是试管苗生根培养和生根继代培养的理想培养基;试管苗移栽平均成活率为99.4%。     

白子菜总黄酮含量的测定

白子菜样品经45％乙醇提取后，以芦丁为标准品，用聚酰胺吸附-硝酸铝显色法于510nm处测定总黄酮含量．结果表明，白子菜植株总黄酮质量分数为1．43％，叶为1．16％，茎为2．60％，根为4．28％．研究结果可为利用白子菜生产黄酮类药用成分提供科学依据．     

青钱柳产黄酮类物质真菌的分离与鉴定

【目的】对青钱柳产黄酮内生真菌进行鉴定,探究提取黄酮类物质的新方法。【方法】采用组织分离对青钱柳枝、叶、根、皮的内生真菌进行分离,用不同培养基进行培养,观察其形态特征进行初步分类;通过显色反应、薄层层析(TLC)、高效液相色谱(HPLC)对内生真菌的发酵产物进行分析,筛选产黄酮类物质的内生真菌,并测定总黄酮产量。根据菌株的形态学特征,结合真菌rDNA的居间序列(internal transcribed spacer, ITS)的系统进化分析鉴定。【结果】分离得到67株内生真菌,通过菌落形态和显微形态观察,隶属于3纲、4目、6科、10属;最终确定4株产黄酮物质的内生真菌:PZ06、CY12、CP06、PP03,其中黄酮产量最多的是菌株PZ06,产量为3.61 mg/L。分子鉴定结合4种菌株的形态学鉴定结果表明,PZ06、CP06、PP03均属于链格孢属(Alternaria),CY12属于正青霉属(Eupenicillium)。【结论】青钱柳产黄酮的优势菌群为链格孢属(Alternaria)。该研究对植物内生菌的开发利用有着重要参考意义,产黄酮类物质的内生真菌的发现为活性物质的提取提供了新方法。     

两面针中氯化两面针碱对照品的制备

建立从两面针中制备氯化两面针碱对照品的方法,利用硅胶柱层析、重结晶和反相制备高效液相色谱对两面针的乙醇提取物进行分离纯化,以HPLC对氯化两面针碱进行纯度检查和含量测定,并通过UV、IR、MS、1 HNMR等对其进行结构确证。从两面针叶中分离、纯化出氯化两面针碱对照品,质量分数>99.0%。所建的制备方法简单,制备出的氯化两面针碱对照品符合中药化学对照品的相关要求,可作为两面针药材和含两面针成药质量控制,以及中药药效物质基础用的化学对照品。     

一株珙桐耐铅、镉内生真菌的分离鉴定及生物学特性分析

从珙桐2年生健康实生苗的茎段中分离到一株耐铅、镉内生真菌。经形态学观察,该菌初步鉴定为链格孢属真菌。该菌的最佳培养基为PDA培养基。温度、p H、碳源和氮源对其生长有一定影响。在温度为15~35℃时均能生长,最适温度为25~30℃。该菌能适应较宽的p H值范围,在p H值5~9的条件下生长旺盛。多种碳源和氮源均能促进该菌生长,最佳的碳源为葡萄糖、可溶性淀粉、甘露糖和蔗糖,最佳的氮源为硝酸钠。该菌能在含1 000 mg/L Pb(NO2)2或100 mg/L Cd Cl2.2.5H2O培养基上生长,表明该菌在铅、镉胁迫下仍有较强的生长能力。     

一株中度嗜盐菌的分离鉴定及其强化高盐有机废水处理的研究

为探索中度嗜盐菌在高盐有机工业废水处理中的应用,解决高盐有机工业废水处理这一难题,从山东省威海市路道口盐场晒盐池盐水中分离一株嗜盐菌株YS - 1,通过对该菌株进行原子力显微镜观察、生理生化测定,全细胞脂肪酸分析、16S rDNA序列同源性分析发现YS - 1菌株16S rD NA序列与Halomonas sp.(AB167061)的亲缘关系最为接近,结合上述其他各项结果确定该菌株为盐单胞菌属(Halomonas sp.),属中度嗜盐菌;在SBR反应器中对该菌株进行强化高盐有机废水处理试验,结果表明,含盐12%,CODCr=1 494 mg/L的高盐模拟有机废水,经72 h C ODCr去除率为90.0%,120 h 的CODCr去除率为98.1%,该菌株具有强化高盐有机废水处理的功能,通过分离筛选嗜盐菌强化高盐有机工业废水处理具有可行性.     

乳苣水提取物诱导肺癌细胞H1299和A549的凋亡

为探讨乳苣水提取物对体外培养的肺癌细胞H1299和A549的影响,用不同浓度的乳苣水提取物分别作用于H1299和A549细胞,从细胞形态(显微镜观察)、细胞增殖活力(cck8法)、细胞凋亡(AnexinⅤ-FITC/PI染色)、线粒体膜电位(JC-1染色)几个方面检测乳苣水提取物对H1299和A549细胞的影响.当处理浓度达到1.2 mg/mL,作用细胞48 h后,细胞出现明显皱缩的凋亡形态学特征,与对照组相比处理组细胞增殖活力显著下降(P0.05).进一步用流式细胞仪检测发现浓度达到1.2 mg/mL的处理组细胞凋亡率显著提高,同时检测到细胞的膜电位都明显下降,呈剂量依赖关系.这些结果表明乳苣可以通过诱导H1299和A549细胞凋亡从而抑制其生长和增殖,是一种潜在的预防和抑制肿瘤生长的药食两用植物.