DAP 玻璃化冷冻液对小鼠2-细胞胚胎的冷冻保存

摘要: 目的探索和优化小鼠2-细胞胚胎冷冻效果,建立小鼠胚胎冷冻保存技术以及超低温保存模型动物胚胎实验室所需的相关技术。方法选择3 个品系( C57BL/6、ApoE － / －、NOS3 － / － ) SPF 级4 周龄雌性小鼠,运用超数排卵、体外受精、玻璃化冷冻法,以及二细胞期胚胎复苏、体外培养等技术方法,观察上述实验效果。结果C57BL/6、ApoE － / －、NOS3 － / － 3 个品系小鼠超数排卵平均值分别为42. 98 个/只、27. 93 个/只、23. 11 个/只,体外受精2-细胞期胚胎率分别为68. 79%、32. 70%、23. 08 %,胚胎冷冻复苏后胚胎回收率72. 77%、80. 87%、83. 33%,存活率分别为56. 92%、54. 84%、70%,存活胚胎体外培养发育到囊胚比率分别为72. 37%、60. 78%、25%。结论选择4 周龄小鼠,按预定相同的技术方法做超数排卵、体外受精、胚胎冻存、胚胎复苏,呈现出较好效果,C57BL/6 小鼠优于基因工程小鼠,基本建立起小鼠2-细胞胚胎冷冻保存技术。     

小鼠早期胚胎不同移植方法的建立

目的建立小鼠胚胎移植技术,探索小鼠胚胎输卵管伞部移植、输卵管剪口移植和子宫移植技术要点,为进一步将该项技术应用到生物净化等领域提供参考数据。方法对4周龄C57BL/6雌性小鼠采用腹腔注射7.5 IUPMSG(孕马血清促性腺激素),48 h后腹腔注射7.5 IU HCG(人绒毛膜促性腺激素)进行超数排卵处理,并与C57BL/6雄鼠合笼,分别在见栓0.5 d、1.5 d和3.5 d取出相应胚胎,对所得胚胎进行筛选,将质量较好的胚胎选出,并将相应胚胎阶段(单细胞、2细胞、囊胚)移入同期发情并经KM结扎雄鼠交配刺激后见栓的KM假孕小鼠输卵管或子宫内,待妊娠生产后得到移植小鼠。结果对88只4周龄雌性C57BL/6小鼠进行超数排卵处理,见栓62只,共取得单细胞胚胎510枚、2细胞期胚胎400枚、囊胚35枚,采用输卵管伞部移植、输卵管剪口和子宫移植,共移植假孕母鼠43只,妊娠生产39只,产仔361只。结论输卵管伞部移植与输卵管剪口移植比较无显著差异,输卵管伞部移植对动物伤害较小,但对术者要求较高;输卵管剪口移植操作较快捷,但对动物损伤较大;子宫移植的妊娠效果最好,处于这一阶段的胚胎极易着床。     

小鼠胚胎移植实验方法

目的在小鼠胚胎移植实验中除了胚胎的质量外,希望从受体状况及胚胎移植的技术和方法上摸索出最佳胚胎移植的条件,提高胚胎移植率,为临床胚胎移植提供实验和理论数据。方法从超数排卵或自然发情怀孕3.5 d的母鼠子宫内收集胚胎,在显微镜下观察,以最快的速度将发育与胚龄一致并且形态完好的胚胎捡出,并移植到自然发情2.5 d的小鼠子宫内。结果超数排卵的胚胎质量比自然发情的胚胎质量差,在12个自然发情的受体中有3个怀孕并产下12只仔鼠。结论小鼠胚胎移植与供受体的准备、小鼠的超数排卵、胚胎品质有着密切的关系,胚胎移植的技术和方法对胚胎移植有着至关重要的关系。     

重组人促性腺激素对小鼠排卵影响的机理

探讨不同剂量和组合的重组人促性腺激素对小鼠卵泡发育和排卵的影响及其与小鼠血清中雌、雄激素水平变化的相互关系.实验采用DNA重组技术合成的重组人促性腺激素对性成熟前雌性昆明白小鼠(22～24日龄)以不同剂量和组合进行超数排卵处理,结果表明,一定剂量和组合的重组促性腺激素的处理对小鼠卵泡的发育和血清中雌、雄激素水平产生较大影响,卵泡的正常发育及最终的排卵要求一定的重组人卵泡刺激素(r-hFSH)、重组人促黄体生成素(r-hLH)、重组人绒毛膜促性腺激素(r-hCG)的配比组合和相应的剂量范围.重组促性腺激素处理后小鼠卵泡的发育和排卵与雌、雄激素生成的量有关.     

实验小鼠胚胎冷冻技术实验研究

本文在建立和引进实验小鼠超排卵技术、卵采集技术、胚胎输卵管移植技术的基础上 ,应用小鼠初期胚的快速冷冻复苏法对实验小鼠C5 7BL 6J、BDF1 、A wy及昆明种小鼠进行了初期胚的冷冻保存与仔鼠存活率的研究 ,并将冷冻复苏胚与非冷冻胚经移植后的生存率作了比较 ,均取得了重复性的结果 ,可望为实验小鼠胚胎种子库提供参考依据。     

小鼠胚胎移植技术优化及对巨细胞病毒净化研究

目的 建立小鼠巨细胞病毒净化方法,以获得无MCMV感染的小鼠。方法 利用胚胎移植技术,通过使用不同激素、不同发情周期注射激素、受体鼠品系、不同的移植方法、不同时期胚胎移植,以及移植胚胎数量等对比试验,优化了净化条件。利用优化的胚胎移植净化方法,对供体鼠进行了净化。结果 SIGMA生产的激素,在10 IU剂量下超排得到的可用胚胎数量约为17枚/只;在小鼠发情间期超排得到的可用胚胎最多,超排的可用胚胎数约为23枚/只;选取C57雄性小鼠与ICR雌性小鼠交配的子一代作为受体鼠,产仔率达44.5%;输卵管移植较子宫移植效果好,产仔率为40.64%;移植2细胞胚胎的妊娠率为80%,明显优于单细胞和8细胞;受体鼠移植24枚胚胎时,产仔率达到了43.75%。利用优化的小鼠巨细胞病毒胚胎移植净化方法,净化得到了无MCMV感染的小鼠。结论 建立了小鼠巨细胞病毒净化方法,为获得无MCMV感染的小鼠种群提供了可靠的保障。     

HMG在家兔超数徘卵中的应用

用国产的尿促性腺激素(HMG)，孕马血清促性腺激素(PMSG)，人绒毛膜促性腺激素(HCG)，对40只母兔进行超数排卵处理试验。结果显示，国产的HMG对母兔有良好的超排作用。试验兔中有90％表现出超排效应，平均每只母兔可回收到30．2个胚胎，最多的一只母兔回收到103个胚胎，对照组(PMSG)平均为7．6个胚胎，差异十分显著(P＜0．01)，同时显示季节对超数排卵的影响也很大，春季优于秋季。     

基因工程小鼠制备和保种、育种技术研究

摘要: 本文从小鼠的超数排卵、采集胚胎、原核受精卵显微注射、胚胎移植、基因型鉴定等多个环节,详细阐述制备基因工程小鼠的技术操作要领; 通过实施辅助生殖技术IVF( 体外受精) 、精子和胚胎的冷冻、复苏技术实现了基因工程小鼠的保种和育种,涉及相关技术的要点改进和操作体会,成功建成了基因工程小鼠的制备和保种、育种平台,提供了良好的技术服务。     

三-(2,3-二溴丙基)异氰脲酸酯的急性毒性研究

探讨三-(2,3-二溴丙基)异氰脲酸酯(TBC)的急性毒性.预实验分别采用5、10、15 g/kg·bw三个剂量,每个剂量组对10只昆明小鼠进行经口一次灌胃染毒,连续观察1周动物的死亡情况.正式试验采用限量法测定经口半数致死量,共用40只实验动物,其中Wistar大鼠20只,昆明小鼠20只,均雌雄各半.染毒剂量为15 g/(kg·bw),染毒后观察24 h内死亡数量,并持续观察两周.预实验中三个剂量组24 h内均无动物死亡,且观察一周内小鼠状态良好.正式试验中大鼠和小鼠在15 g/(kg·bw)的染毒剂量下也均无死亡,观察两周内大鼠和小鼠的状态良好.TBC的急性毒性分级为无毒,此研究为TBC的进一步毒理学研究奠定了基础.     

Wistar大鼠超数排卵及胚胎移植

不同剂量激素对Wistar雌鼠超数排卵,并与正常雄鼠交配,收集2-细胞胚胎进行输卵管移植,收集8-细胞胚胎进行子宫移植,结果发现每只Wistar雌鼠间隔48h分别腹腔注射50IU的PMSG与hCG,Wistar大鼠的超数排卵效果最好,平均可获得2-细胞胚胎36.3±15.8枚,输卵管移植后产仔率为73.33%,平均可获得8-细胞22.6±13.1枚,子宫移植产仔率为75.00%.     

小鼠冲胚效果与子宫内膜形态变化的组织学观察

本实验对５５例昆明小鼠用同等剂量的ＰＭＳＧ和ｈＣＧ注射，诱导其超排，在冲胚后取其子宫制作组织切片进行光镜下观察，其结果表明，有冲胚效果组中子宫腺腔数和子宫内膜微血管数量普遍高于无冲胚效果组。且当子宫内膜上皮呈高立方型时及子宫腺上皮呈高立方型和立方型时，在子宫腺腔数量上，两组差异显著，Ｐ〈０．０１（Ｐ〈０．０５）两组中子宫内膜微血管数与上皮形态变化曲线相似，而子宫腺腔数与上皮形态的关系，两组曲线变化     

小鼠胚胎移植研究

目的研究不同时期胚胎对胚胎移植成功率的影响以提高胚胎移植率。方法采用经超量排卵的KM雌鼠与正常615雄鼠交配,取受精卵,分别将单胚卵、双胚卵、桑椹胚和囊胚、移入发情的假孕KM雌鼠的输卵管和子宫中妊娠产仔。结果移入单胚卵、双胚卵、桑椹胚和囊胚的假孕母鼠妊娠率分别为36.36%、42.86%、10%、27.27%,产仔率分别为46.58%、38.46%、58.33%、60%。结论移植双胚卵可提高小鼠的胚胎移植成功率。     

激素剂量、小鼠品系及周龄对超数排卵的影响

目的采用孕马血清促性腺激素（PMSG）和人促绒毛膜性腺激素（hCG）对不同品系和周龄小鼠进行超数排卵处理,比较激素（PMSG/hCG）注射剂量、小鼠品系和周龄对超排效果的影响,以便获得比较优良的超排方法。结果 1）激素剂量为PMSG（10 IU/只）＋hCG（10 IU/只）的超排效果优于PMSG（5 IU/只）＋hCG（5 IU/只）,但无显著差异（P〉0.05）;2）相同剂量时I,CR小鼠和C57BL/6J小鼠的超排效果显著优于BALB/c小鼠和FVB小鼠（P〈0.05）;3）5周龄与8周龄的小鼠比较,8周龄超排效果较好,但差异不显著（P〉0.05）。结论采用10 IUPMSG＋10 IU hCG的组合对8周龄的ICR、C57BL/6J进行超排处理效果相对较好。     

C_(57)BL/6小鼠繁殖性能的观察与研究

C57BL/6纯系小鼠生殖能力较低,为提高受孕率,对其生殖性能进行了研究。结果表明:性周期动情期的鉴定是提高小鼠受孕率的关键;自然交配的受精卵质量比超数排卵的好,产仔成活率高,但超数排卵仍是一种良好的获得更多受精卵的辅助办法;光照、温度、噪音、湿度、营养等因素对小鼠性周期影响很大。