化学合成的α—降钙素基因相关肽基因在大肠杆菌中的融合表达 …

化学法合成的α－降钙素基因相关肽基因从ｐＸＺ１０１有达质粒转移到ＰＵＣ１８质 测序鉴定后,克隆到ＰＧＥＸ表达载体上,在大肠杆菌Ｃ６００中表达。     

缺氧性肺动脉高压大鼠的降钙素基因相关肽含量和分布

目的：研究降钙素基因相关肽（ Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ） 对缺氧性肺动脉高压（ Ｈ Ｐ Ｈ） 的影响。方法：应用常压缺氧方法建立大鼠肺动脉高压动物模型;采用酶联免疫测定法测定大鼠血浆降钙素基因相关肽的含量;用免疫组织化学染色法观察肺组织中 Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ 的分布。结果：缺氧组大鼠血浆 Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ 含量较正常对照组有明显下降（ Ｐ＜ ００１） ,且血浆 Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ 水平与肺动脉平均压（ ｍ Ｐ Ａ Ｐ） 呈负相关（ Ｐ＜００５） ;正常大鼠肺组织有极少量 Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ 样免疫物质,缺氧组大鼠肺组织有大量 Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ 样免疫物质。结论：缺氧时血浆 Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ 含量减少可能是其释放减少所致, Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ 在缺氧继发肺动脉高血压中起重要的肺循环调节作用。     

化学合成的α-降钙素基因相关肽基因在大肠杆菌中的融合表达及产物分离纯化

化学法合成的α－降钙素基因相关肽基因从pXZ101表达质粒转移到pUC18质粒中测序鉴定后,克隆到pGEX表达载体上,在大肠杆菌C600中表达．融合蛋白经谷胱甘肽亲和层析初步纯化,用凝血酶切去融合蛋白,经SephadexG－50柱纯化后,用溴化氰裂解,再经SephadexG－25柱纯化后得到纯品CGRP．经ELISA反应及放射免疫鉴定具有生物活性;经末端氨基酸测定与设计的一致．动物活体实验证明,大肠杆菌中表达的蛋白有降压活性．     

内皮素、降钙素基因相关肽与心衰

内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ，ＥＴ）是血管内皮细胞合成和分泌的缩血管肽〔１〕，是由２１个氨基酸组成的多肽，最初是从血管内皮细胞中发现，后来许多研究证实，体内其它部位肾、肺、肝、脑、心及血管内皮细胞均能合成这种多肽〔２〕。降钙素基因相关肽（ｃａｌｃｉｔ...     

降钙素基因相关肽对实验性心肌肥厚的影响

使用降钙素基因相关肽(CGRP)干预压力超负荷心肌肥厚大鼠,探讨CGRP与心肌组织中一氧化氮、内皮素含量变化的关系以及CGRP对心肌肥厚的影响,期望进一步揭示心肌肥厚的可能机制。采用腹主动脉缩窄的方法复制压力超负荷心肌肥厚大鼠模型。选取雄性Wistar大鼠40只,随机分为4组:对照组,缩窄组,CGRP组,卡托普利组(每组N=10)。术后一周开始CGRP组给予CGRP 8μg/(kg.d-1),卡托普利组给予卡托普利30 mg/(kg.d-1)。给药4周后处死动物,检测各项指标,光镜下观察心室肌组织结构变化,分别用放射免疫方法和硝酸还原法测定心室肌ET、NO的水平。与对照组相比的结果是缩窄组大鼠SBP、LVW/BW及心肌中ET水平明显升高(P<0.05),NO明显降低(P<0.05);干预组与缩窄组相比,SBP、LVW/BW及心肌中ET水平明显降低(P<0.05),心肌中NO水平升高(P<0.05),ET水平与左心系数呈正相关。光镜下观察结果:缩窄组与对照组比较,可见心肌纤维横径明显增粗,细胞核肥大,深染,异型,心肌纤维间隙增宽,间质纤维结缔组织增生明显。CGRP组和卡托普利组心肌纤维横径及细胞核较缩窄组缩小,间质增生程度较缩窄组明显减轻形态已经与对照组相近。说明:(1)心肌中NO水平下降、ET水平上调可能参与了压力超负荷性心肌肥厚的发生发展。(2)CGRP具有一定的逆转高血压心肌肥厚的作用,此作用与临床常用抗高血压药物卡托普利相近。     

降钙素基因相关肽衍生物的制备及降血压功能研究

用PCR法将人的降钙素基因相关肽(calcitonin gene related—peptide,CGRP)基因克隆到表达载体pGEX-4T-2的GST基因后,构建成一个新的表达质粒pGEX—CGRP．另外分别将2个有降压功能的小肽HHL和RPLKPW的基因克隆到CGRP基因后,构建成2个表达质粒pGEX—CGRP-3AA和pGEX—CGRP-6AA．将此3个表达质粒转化到大肠杆菌TG1中,获得3个高表达的融合蛋白：GST—CGRP,GST—CGRP—HHL,GST—CGRP—RPLKPW;通过G1utathione Sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白,测定蛋白浓度,利用自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)来检测蛋白的降血压功能,发现融合蛋白GST—CGRP—HHL具有显著的降压效果,能使舒张压下降8．0kPa,且降压维持时间延长,达到70min以上．     

降钙素基因相关肽生物学效应及其运动对其的影响

降钙素基因相关肽是具有强大的扩张血管作用的生物活性多肽。该文采用文献资料法,时新近研究的降钙素基因相关肽及运动对其的影响进行分析,总结了降钙素基因相关肽生物学效应;运动可引起降钙素基因相关肽的分泌改变;运动对血浆中降钙素基因相关肽含量变化的影响;在运动心脏重塑中起重要的调节作用。为今后降钙素基因相关肽在运动医学领域的研究提供新思路。     

酵母密码子编码的α降钙素基因相关肽基因的化学合成和克隆

记叙了α降钙素基因相关肽基因的化学合成和克隆.该多肽的合成基因序列是根据已知的氨基酸序列,选用酵母偏爱的密码子,由计算机辅助设计而成的,共136个碱基对.全基因分为六个寡核苷酸片段在DNA合成仪上合成.这些片段混合退火后,用T4DNA连接酶一次装配成功,并克隆到M13mp18载体上.经核酸序列分析,证明所得克隆的核苷酸顺序与设计完全一致.     

酵母密码子编码的α降钙互素基因相关肽基因化学合成和克隆

记叙了α降钙素基因相关肽基因的化学合成和克隆，该多肽的合成基因序列是根据已知的氨基酸序列，选用酵母偏爱的密码子，由计算机辅助设计而而的，共136个碱基对，全基因分为六个寡核酸片段在DNA合成仪上合成。这些片段混合退火后，用T4DNA连接酶一次装配成功，并克隆到M13mp18载体上，经核酸序列分析，证明所得克隆的核苷酸顺序与设计完全一致。     

散手运动员大运动量训练期安静时内皮素、降钙素基因相关肽和心钠素水平变化的探讨

采用放射免疫方法测定了9铭武术散手运动员大运动量训练期安静时内皮素（endothelin,ET)，降钙素基因相关肽（calcitonin gene related,CGRP)和心钠素（atrial natyiuretic peptide,ANP)等心血管激素，随着大运动量训练的深入，散手运动员血浆ET水平呈逐渐升高趋势，直至后两次取样点时出现显著差异。剧烈运动时，血浆儿茶酚胺及血管紧张素浓度增加，刺激ET分泌增加，另外，骨骼肌和心肌缺血，缺氧或损伤，也可导致ET的分泌增加，训练初期散手运动员血浆CGRP水平逐渐下降，但无显著差异，随着训练时间的延长该激素水平下降明显，表明与矩时间极限运动的作用不同，长期训练可使机体CGRP分泌减少。ET／CGRP比值的变化随着训练时间的推移，呈逐渐上升趋势，ANP水平在训练初期显著提高，之后的训练中始终高于训练前，到最后测试点时与其前两个点比较也有显著差异，说明比赛前大强度训练对散手运动员心脏激素的作用很大。ET与CGRP之间的变化具有明显的负相关，CGRP与ANP之间具有非常显著的负相关，ET与ANP之间有非常显著的正相关，ET，CGRP和ANP水平变化与血液浓缩无关。     

穴位针刺对面神经再生影响的动物模型制作

介绍了穴位电针刺激对面神经再生影响的实验研究动物模型的制作,包括动物选择,穴位选择及其定位,针刺方法及治疗参数等方面,所造之模型使实验进行顺利,治疗后针刺组动物面神经的再生质量明显优于非针刺组,显示了其实用性和科学性。     

大鼠面神经颅外段的解剖及组织学研究

目的研究大鼠面神经的组成、走行、分支,为实验研究提供依据。方法显露面神经及各分支,测量各分支长度及外径,改良特殊三色法染色观察光镜结构。结果大鼠面神经出茎乳孔后前行,贴咬肌的表面分为颞支、颧支、颊支、下颌缘支和颈支至面部表情肌。面神经分支的长度和和中点外径依次为颞支(10.59 mm±0.34 mm,0.56±0.12 mm),颧支(15.48 mm±1.86 mm,0.70 mm±0.08 mm),颊支(26.18 mm±1.37 mm,1.01 mm±0.28 mm),下颌缘支(26.31 mm±1.32 mm,0.91 mm±0.20 mm),颈支(17.54 mm±0.75 mm,0.64 mm±0.15 mm)。特殊三色法染色光镜下可见神经内膜呈绿色,完整;神经束较少,多为2~3束。大量神经纤维整齐排列,轴突位于中央,较小,呈蓝绿色,髓鞘呈枣红色,红细胞呈鲜红色,细胞核呈紫蓝色。结论应选择大鼠面神经颊支和下颌缘支进行缺损修复模型的制备。     

雪旺细胞对于周围神经再生的功能与作用

通过查阅近年来国内外大量文献,结果显示雪旺细胞的生物学特性决定了其是周围神经再生过程中的重要种子细胞,并正成为周围神经损伤修复领域中的研究热点.     

大鼠CHOP基因克隆及其在颅脑损伤模型中的表达分析

利用巢式PCR(nest PCR)克隆大鼠CHOP基因.该基因ORF区全长507bp,编码168个氨基酸,推测其分子量为19.03kDa,等电点4.59.大鼠CHOP蛋白在第95~160位氨基酸残基位点存在一个"碱性亮氨酸拉链"结构域.蛋白进化分析显示:大鼠CHOP蛋白与啮齿类该蛋白具有较近的亲缘关系.实时荧光定量PCR结果显示:大鼠早期颅脑损伤中,CHOP基因表达呈逐步上升趋势,颅脑损伤24h表达量达到顶峰,为对照组的11.47倍.     

高频超声在创伤性周围神经病变中的诊断价值

目的:探讨高频超声在创伤性周围神经病变中的诊断价值。方法:对31例患者(35条神经)临床诊断周围神经病变进行高频彩超检查与病理或其它影像学进行比较分析。结果:高频超声能清晰显示周围神经神经外膜、神经束膜及神经纤维束走行及内部结构,根据不同周围神经超声声像图特征,能判断其损伤部位、程度、范围及损伤类型。结论:高频超声能清晰显示不同类型周围神经损伤,准确判断损伤部位及程度,具有较高临床应用价值。     

大鼠促红细胞生成素受体基因克隆及其在颅脑损伤模型中的表达分析

利用巢式PCR(nest PCR)的方法克隆大鼠促红细胞生成素受体基因.该基因ORF区全长1 524bp,编码507个氨基酸,推测其相对分子质量为55.48ku,等电点5.07.实时荧光定量PCR结果显示:大鼠早期颅脑损伤中,EPOR基因表达呈逐步上升趋势,颅脑损伤后24h表达量达到顶峰,为对照组的6倍.     

大鼠肝再生中肝细胞基因表达与DNA裸露的相关性研究

为了解大鼠肝再生中肝细胞的基因表达与DNA裸露的相关性,分离大鼠肝细胞,提取裸露DNA,用SOLEXA方法对DNA测序,用BWA软件拼装测序片段,用IPA软件分析拼装的基因种类和作用,用Rat Genome230 2.0芯片检测基因的转录情况.研究表明,大鼠肝再生的12h(PH后12h),肝细胞的裸露DNA涉及16 912个基因,1 701个基因发生了有意义裸露量变化.其中,25个基因的裸露量上调,1 676个基因的裸露量下调.与Rat Genome 230 2.0芯片的检测的基因转录比对表明,肝细胞的AKR7A3,BMYC,CDC25B等26个基因的裸露量和表达量均下调,表明大鼠肝再生12h时,这些基因的表达可能受染色体结构调控.     

人类抗砷相关基因hARRG全长cDNA的克隆和在E.coli中表达

通过对构建的人胎脑cDNA文库进行大规模测序,发现一条人类新基因,序列与仓鼠asr2序列高度同源,达88％,命名为人类抗砷相关基因（human arsenic resistance related gene.hARRG),hARRG与抗砷基因相关序列ARS2（AF082871）几乎完全全同源,仅比它短253bp,hARRG并不是全长基因而仅是一个cDNA片段,为了获得hARRG全长cDNA,运用Northern blot电子RACE和5－SMART－RACE的方法克隆了一条2999bp 的hARRG全长cDNA,通过Unigene染色体定位于7q21.3,经过生物信息学分析发现,该cDNA有完整的读码框,编码一个788个氨基酸的蛋白,预计分子质量为89．2ku,并在大肠杆菌中获得了成功表达。     

EGFP和ALR融合基因表达载体构建及其在HeLa细胞中的表达

从人血液中提取总DNA,利用PCR技术扩增人肝细胞再生增生因子基因,将其插入表达载体pEGFP—C1的多克隆位点中,构建增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescence protein gene,EGFP）和人肝细胞再生增强因子（human augmenter of liver regeneration gene,ALR）融合基因表达载体pEGFP／ALR,并将其转染Hela细胞系,用含G418的DMEM／F12培养液筛选转基因细胞,然后利用PCR和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测转基因细胞中ALR基因的存在及其表达,用荧光显微镜检测EGFP基因的表达．结果显示：得到了构建正确的EGFP和ALR融合基因表达载体;在转基因细胞中,PCR扩增得到1．7Kb的ALR条带,蛋白电泳得到57KD大小条带．与ALR和EGFP融合蛋白大小相符;荧光显微镜下观察到发绿色荧光的Hela细胞．在转基因细胞中,EGFP和ALR同时存在并表达,绿色荧光蛋白可作为报告基因指示目的基因的表达,从而简化了目的基因繁琐的检测手段．