地衣芽孢相菌高α—乙酰乳酸脱羧酶活力菌株的筛选

以从土壤中分离出的9株地衣芽孢杆菌为源菌株，通过α-乙酰乳酸脱羧酶活力实验发现BL-4的产酶活性最好，通过UV和NTG对BL-4进行复合诱变，获得了一株产酶活性比出发菌株BL-4高1.22倍的α- 乙酰乳酸脱羧酶高产菌株，并研究了该菌株的最佳发酵产酶条件是培养温度30℃，发酵时间36h，发酵液起始pH6.5。     

地衣芽孢杆菌高α-乙酰乳酸脱羧酶活力菌株的筛选

以从土壤中分离出的9株地衣芽孢杆菌为源菌株,通过α-乙酰乳酸脱羧酶活力实验发现BL-4的产酶活性最好,通过UV和NTG对BL4进行复合诱变,获得了一株产酶活性比出发菌株BL-4高1.22倍的α-乙酰乳酸脱羧酶高产菌株,并研究了该菌株的最佳发酵产酶条件是培养温度30℃、发酵时间36 h、发酵液起始pH 6.5。     

地衣芽孢杆菌NK-27菌株β-甘露糖苷酶的产酶条件及粗酶性质

地衣芽孢杆菌NK－27菌株可以产生胞外β－甘露聚糖酶和胞内β－甘露糖苷酶。β－甘露糖苷酶活力主要集中于细胞匀浆液中。以2．0％魔芋粉、1．0％（NH4）2SO4为碳、氮源地衣芽孢杆菌NK－27菌株经30℃振荡培养20－24h产生β－甘露糖苷酶酶活力最高。该酶于30－40℃、pH6.0时酶活力最高，在30－40℃、pH5．4－7．0酶稳定性较好。     

地衣芽孢杆菌A.4041耐高温α-淀粉酶的纯化及性质

地衣芽孢杆菌A.4041（Bacillus，licheniformisA．4041）耐高温α-淀粉酶，经硫铁沉淀和垂直板制备凝胶电泳纯化，得到三种电泳均一的组分，α－Ⅰ，α－Ⅱ和α－Ⅲ．其相对质量分数分别为14.7％，32.2％和52.9％；等电点为5．2，5．4和5．5；相对分子质量为48000，55000和60000．酶作用于可溶性淀粉的米氏常数分别为4.5mg／mL，3．4mg／mL和2．6mg／mL．最适作用温度皆为90℃；最适pH为6.0～6.5；稳定pH范围皆为4～11．5在温度高于70℃，保温30min条件下，三组分的活力开始下降，但α－Ⅱ和α－Ⅲ在100℃，保温30min时仍分别保持15％和20％的残余活力，表明该酶的热稳定性良好．Ca2+，Mg2+，K+对酶明显激活；Cu2+，Fe3+，Zn2+，Al3+，EDTA、甲醛、戊二醛对酶强烈抑制．     

离子注入选育α—乙酰乳酸脱羧酶菌株

采用离子注入技术对一株产α-乙酰乳酸脱羧酶的地衣芽孢杆菌(Bacillus     

壳聚糖固定化α-乙酰乳酸脱羧酶的研究

采用壳聚糖作为载体，戊二醛作交联剂制备固定化α-乙酰乳酸脱羧酶（ALDC），优化了固定化条件。实验结果：活力1380U／g，蛋白载量98．30mg／g，比活力14．04U／mg，活性回收率37，l％，固定化α-乙酰乳酸脱羧酶最适温度30℃，最适pH5．5。     

α-乙酰乳酸的合成及α-乙酰乳酸脱羧酶产生菌的筛选与鉴定

利用有机反应合成α-乙酰氧基-α-甲基-乙酰乙酸乙酯，后者经NaOH水解生成的α-乙酰乳酸，可以用作测定α-乙酰乳酸脱羧酶(简称ALDC)活力的底物．通过富集，从土壤和水体中分离出100株产芽孢的菌株，其中获得VP反应为阳性的37株芽孢杆菌，通过对ALDC活力的反复测定，得到7株有较高酶活性的菌株，并根据其生理生化的特征进行了初步的鉴定，为进一步开发和利用α-乙酰乳酸脱羧酶奠定了基础．     

含α—乙酰乳酸脱羧酶基因重组酿酒酵母的啤酒发酵

利用Ｅ．ｃｏｌｉ和酿酒酵母的穿梭质粒ｐＹＥＳ２为载体,将寻衣芽孢杆菌α－乙酰乳酸脱羧酶基因导入酿酒醇母中,构建了重组质粒ｐＹＥＡ,实现了α－乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达。     

地衣芽孢杆菌α-耐高温淀粉酶基因的克隆及原核表达

地衣芽孢杆菌(Bacillus Lichenifarmis)是产生具有重要工业生产价值的耐高温α-淀粉酶(α-amylase)的优良菌株．本实验在提取地衣芽孢杆菌完整的基因组DNA序列的基础上，通过PCR方法克隆了耐高温淀粉酶的结构基因全长1449bp，与pUCm-T载体连接转化入宿主菌DH5α中，经过酶切鉴定筛选出阳性的克隆菌，再提取质粒与表达载体pET-28a( )酶切后连接转化入宿主菌DE3中，其阳性克隆在37℃1．0mmol/L IPTG诱导下，α-淀粉酶的基因得到了较好的表达．表达产物经SDS—PAGE鉴定，确定表达的蛋白大小为58000 Dal左右，与理论推导的分子量相一致；并初步对酶及活性及酶活最适温度和pH进行了研究。     

地衣芽孢杆菌HX-12-5的鉴定及中性蛋白酶性质的研究

对一株能产生具有良好脱毛效果的中性蛋白酶的高产菌芽孢杆菌Bacillus sp。HX－12－5进行了菌种鉴定，结果表明，该菌株属地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis)。中性蛋白酶的最适作用条件为：50℃，pH7.0,40℃时在pH6-9范围内稳定；EDTA和PMSF对酶活力有不同程度的抑制作用。     

猪心肌乳酸脱氢酶的提纯工艺及酶反应最适条件

研究了适合于工业化生产的猪心肌乳酸脱氢酶的初步提取工艺，经硫酸铵分级沉淀得到酶的比活为86．5U／mg，再经DEAE离子交换层析比活可达525．0U／mg，酶活总收率为54．5％．并对酶促反应的最适条件进行了研究，其最适反应pH为7．6～7．8，最适反应底物浓度分别为NADH5mg／mL和丙酮酸钠25mmol／L。     

产α-ALDC的枯草芽孢杆菌原生质体融合条件

通过双亲灭活原生质体融合技术对2株产α-乙酰乳酸脱羧酶的枯草芽孢杆菌3226-5和V-20进行原生质体融合.初步探讨了2菌株较适宜的融()条件.对获得的几百株融合子进行酶活比较,从中得到20株酶活比双亲高的菌株.     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究…

从土壤中筛选到一株嗜碱性地衣芽孢杆菌５３－Ａ６．，该菌株能在ｐＨ１０以上６０℃的环境中良好生长，４５℃ｐＨ９￣１２的条件下均可产生活力较高的碱性蛋白酶，酶反应的最适条件：６０℃，ｐＨ１０￣１１，在ｐＨ８．５￣１１之间较稳定。６０℃保温１ｈ剩余酶活在２０％以上。     

枯草芽孢杆菌WD-23 β-甘露聚糖酶的纯化及其酶学性质

利用硫酸铵盐析缓冲液透析、聚乙二醇浓缩、DEAE-Sepharose FF窝子交换层析等方法,纯化了枯草芽孢杆菌WD-23 β-甘露聚糖酶,并研究了其酶学性质。结果表明:纯化的枯草芽孢杆菌WD-23 β-甘露聚糖酶的分子质量约为40 ku,酶的纯化倍数为14.1倍; 最适反应pH和pH稳定范围分别为5.6和5.0～7.0; 最适反应温度和温度稳定范围分别为55 ℃和40～70 ℃; Ca²⁺对该酶的促进作用最为明显,Li⁺的抑制作用最明显。     

氮离子注入选育耐酸性α-淀粉酶产生茵诱变效应的研究

利用低能（30keV）氮离子注入中温中性α-淀粉酶产生菌枯草芽孢杆菌BF7658，研究对其产耐酸性α-淀粉酶的诱变效应结果表明，BF7658菌株存活率曲线是典型的“马鞍型”剂量-效应曲线，在“马鞍型”区域对应注入剂量50×10^14-100×10^14ions／cm^2下具有较高的突变率．通过诱变筛选到一株最适作用pH为5．0，较出发菌株的最适作用pH偏低一个单位的突变株，编号TUST743．该突变株产酸性α-淀粉酶的酶活为343U／mL．该酶在DH4．5和4．0条件下的相对酶活为61％和38％，说明此突变株所产酸性α-淀粉酶对低pH有较好的耐受性．经连续传代实验，表明该菌株遗传性质稳定、     

ErCl_3作用下枯草杆菌所产α-淀粉酶的温度、pH性质

研究ErCl3对枯草杆菌所产α-淀粉酶的酶学性质如温度、pH性质的变化.研究结果表明,在枯草芽孢杆菌培养时加入ErCl3,所产α-淀粉酶的酶活、pH和温度性质具有较大改变.实验结果说明了ErCl3作用下枯草杆菌所产α-淀粉酶的活性提高,提高率为370%.在pH值为5~7时,酶活明显增加,酶活提高率为115.61%~126.32%.酶活最适温度由40 ℃上升为50 ℃,在50～70 ℃始终保持较高酶活性,酶的耐热性增加.     

对硝基酚磷酸酶的原核表达、纯化及性质研究

克隆到脂肪芽孢杆菌Bacillus stearothermophilus中的对硝基酚磷酸酶(p-nitrophenylphosphatase，pNPPase)基因，将其编码区eDNA连接到pQE30表达载体中，在E．coli M15中经IPTG诱导得到高效表达．用Ni-NTA Superflow层析柱对表达产物进行了分离纯化，初步测定了pNPPase的酶学性质．发现它的反应最适pH是10．0，最适反应温度是55℃，热稳定性Tm值为52℃，Mg^2 、Mn^2 和Co^2 对pNPPase的活性有一定的促进作用，而Zn^2 和Ni^2 对pNPPase没有影响．纯化后其比活为120U／mg．     

含α-乙酰乳酸脱羧酶基因重组酿酒酵母的啤酒发酵

利用E .coli和酿酒酵母的穿梭质粒pYES2为载体 ,将地衣芽孢杆菌α 乙酰乳酸脱羧酶基因导入酿酒酵母中 ,构建了重组质粒pYEA ,实现了α 乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达 .α 乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达与菌体生长有关 .pYEA质粒在无选择压力的发酵条件下 ,仅能保持一定的稳定性 ,并具有降解α 乙酰乳酸的能力 ,但丢失率比较高 .     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究──1出发菌株的筛选及产酶条件的研究

从土壤中筛选到一株嗜碱性地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）５３－Ａ６．，该菌株能在ｐＨ１０以上６０℃的环境中良好生长，４５℃ｐＨ９～１２的条件下均可产生活力较高的碱性蛋白酶。酶反应的最适条件：６０℃，ｐＨ１０～１１，在ｐＨ８．５～１１之间较稳定。６０℃保温１ｈ剩余酶活在２０％以上。     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的性质

对短小芽孢杆菌ｃ１７２（ｐＢＸ９６）转化子发酵淀粉产生的碱性蛋白酶,采用硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５脱盐、ＤＥＡＥ－纤维素柱层析等方法进行纯化,并对纯化酶的性质进行了研究．结果表明,酶反应的最适ｐＨ值为１１．０;在ｐＨ８．０～１１．０之间稳定;最适反应温度为４０℃;热稳定性较好,４５℃下处理３０ｍｉｎ酶活性不变,６０℃下处理３０ｍｉｎ活力保留６５％．对甲基苯磺酰氟（ＰＭＳＦ）能完全抑制该酶活性,洗涤剂中的三聚磷酸钠对酶有较大钝化作用．