瘦素对猪卵母细胞体外成熟及克隆猪妊娠率的影响

体细胞克隆猪在人类医学、基础科学研究和畜牧业生产方面均具有很大的应用潜力.为了提高体细胞克隆猪的效率,首先比较了两种基础成熟液NCSU-23和TCM199的体外成熟效果,然后在TCM199培养液的基础上,较系统地研究了添加不同浓度的瘦素对猪卵母细胞成熟、孤雌激活胚胎和克隆胚胎的体外发育以及克隆胚胎体内发育的影响.结果表明:成熟液中添加100ng/mL或200ng/mL瘦素对猪卵母细胞的核成熟没有显著影响(P>0.05);对孤雌激活卵裂率和克隆胚胎卵裂率也没有显著影响(P>0.05);但却显著提高了孤雌激活胚胎的囊胚率和囊胚细胞数,并且显著提高了克隆胚胎的囊胚率;当添加量为100ng/mL时,克隆囊胚的细胞数显著升高.另外,研究表明,瘦素很可能具有提高克隆胚胎移植妊娠率和妊娠到期率的作用.     

人类输卵管上皮细胞培养

哺乳动物输卵管是生殖过程中配子输送、受精及着床前胚胎发育的场所。在体外授精一胚胎移植（IVF－ET）工程中,虽然体外培养条件已不断得到改进,但精卵结合、胚胎早期发育及受孕率仍远不及体内。有人尝试用完整的兔子输卵管体外支持牛卵体外成熟、受精及早胚发育获得成功。用羊输卵管上皮细胞与羊胚胎体外共培养,发现可促进胚胎发育并得到高活力胚胎。更进一步的研究证明输卵管上皮细胞可能通过分泌特异蛋白而对精子、卵子及早胚产生影响。目前,对该特异分泌蛋白的研究尚不完全,在体研究很受限制,所以人输卵管上皮细胞体外培养是一…     

小鼠腔前卵泡卵母细胞的体外培养、体外成熟和体外受精研究

小鼠腔前卵泡在体外生长过程中，于培养液中添加血清，以及ＦＳＨ和胰岛素均对小鼠腔前卵泡的体外生长、体外成熟、体外受精起促进作用，其中以胰岛素的效果最为显著，腔前卵泡的体外成熟率和体外受精率可达６９．４％和８０．６％，但是体外受精后的体外发育率低于添加ＦＳＨ的试验组，表明ＦＳＨ有益于卵母细胞生长过程中细胞质的成熟。单层培养的卵巢颗粒细胞对腔前卵泡的体外生长也具有促进作用。将体外受精后发育至２—细胞的胚胎移植入受体鼠，胚胎可以正常着床发育。同时，卵母细胞的核仁和线粒体在培养过程中也发生相应的变化。     

牛体外受精技术研究的现状与展望

系统综述了牛体外受精技术研究的现状及存在的问题．并对今后的研究方向和前景提出了展望。牛卵母细胞可在不含血清的成熟培养液中获得受精及胚胎发育能力，促卵泡素、促黄体素及上皮细胞生长因子均对这一过程具促进作用。肝素是迄今最为有效的精子获能处理方法，但在受精过程中对精子获能起决定作用的是卵丘细胞和卵母细胞本身。提高受精质量可明显提高受精卵的胚胎发育能力。体外受精卵可通过改善培养条件或与体细胞进行复合培养发育到囊胚阶段．但后者更为稳定可靠。目前，牛卵母细胞的体外受精分裂率可达８０％，囊胚发育率达４０％左右．两枚鲜胚的移植妊娠率可达５０％～６０％．而两枚冻胚的移植妊娠率仅３０％～５０％。因此，尚需进一步提高体外受精胚胎的活力和改进胚胎的冷冻保存技术。     

久效磷对小鼠早期胚胎体外发育的影响

采用小鼠早期胚胎的体外培养技术,研究了久效磷对小鼠着床前胚胎发育的影响。结果表明,剂量低于0.22mmol/L对小鼠早期胚胎无明显作用,剂量为0.34mmol/L时,70.6％的8细胞胚胎能发育至囊胚,剂量达0.45mmol/L,对小鼠早期胚胎有显著的毒害作用,只有5.7％可以发育至囊胚。在经久效磷处理的小鼠早期胚胎电镜照片上可以看到,细胞内网架结构保持完好,线粒体被破坏,数量变少,空泡变大、增多,细胞内不同结构对久效磷的敏感性有一定差异。     

血管内皮生长因子对牛早期胚胎发育的影响

为了探明血管内皮生长因子VEGF对牛体外受精胚胎早期发育的影响,本试验采用了成分明确的体外发育培养系统.通过在体外发育培养液中分别添加0、1、5、10 ng/mL的VEGF,对868枚胚胎的发育能力进行检测.研究结果显示:对照组与添加1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL VEGF的各实验组卵裂率分别为61.99%、75.69%、76.81%、68.92%;8-细胞期发育率分别为51.82%、61.21%、65.41%、63.40%;囊胚期发育率分别为27.74%、24.85%、23.90%、22.88%;囊胚孵化率分别为5.11%、4.85%、5.66%、3.27%.添加1、5、10 ng/mLVEGF与对照组比较,卵裂率、8-细胞期发育率有所增加,囊胚期发育率和囊胚孵化率表现下降趋势,但实验组与对照组间上述几项发育指标差异均不显著(P>0.05).     

小鼠孤雌生殖的胚胎干细胞的初步研究

比较去透明带孤雌桑葚胚和留透明带孤雌囊胚、体内受精胚胎、体外受精胚胎在饲养层上囊胚的扩张率、岵壁生长率．结果表明去透明带孤雌桑葚胚比留透明带孤雌囊胚的扩张率显著（p〈0．05）提高,而贴壁率则极其显著地（p〈0．01）提高,此外前者还发生增殖．但孤雌胚胎的囊胚扩张率、贴壁率和增殖率均极其显著地（p〈0．01）低于体内受精胚胎和体外受精组;体内受精胚胎的体外发育最佳．说明去透明带孤雌桑葚胚比留透明带孤雌囊胚更利于在饲养层上贴壁生长,为建立孤雌生殖的胚胎干细胞系提供了基础．     

体外培养时间和表皮生长因子对牦牛卵母细胞成熟及孤雌胚胎体外发育的影响

研究在成熟液中添加表皮生长因子（Epidermal growth factor,EGF）以及成熟时间对牦牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响,以确立牦牛卵母细胞体外成熟的最佳体系.结果表明,成熟液中添加EGF组的成熟率明显高于未添加组（P＜0.05）,并且牦牛卵母细胞的成熟率随着EGF添加的浓度增加也不断上升;随着体外培养时间的延长,成熟率逐渐增加,培养24 h后成熟率趋于稳定;胚胎体外培养液中添加EGF能显著提高孤雌胚胎的8-细胞和囊胚形成率（P＜0.05）.由此推测：在体外培养22-24 h,且添加40 μg/mL EGF最有利于牦牛卵母细胞体外成熟;胚胎培养液中添加40μg/mLEGF能显著提高牦牛孤雌胚胎的体外发育能力.     

胚胎单个定位及三维共培养微流控装置的构建

胚胎体外发育是临床人工辅助生殖技术中的关键环节,对着床后胚胎发育状况有重要作用。该研究利用细胞三维培养技术和微流控芯片技术构建了一种新型的小鼠胚胎体外共培养装置,用于实现自动化的小鼠胚胎定位与共培养操作,并对胚胎在体内的发育环境进行模拟。利用该微流控装置成功进行了小鼠胚胎的单个定位、三维细胞共培养以及发育追踪观察,并对装置中胚胎发育状况做出评价。统计结果表明:共培养芯片中小鼠胚胎发育囊胚率(87.3%±3.1%)显著高于对照组的囊胚率(76.8%±2.7%,P0.01);并且共培养芯片中小鼠囊胚的平均细胞总数(102±4)也显著高于对照组中的平均细胞总数(68±3,P0.01)。因此该胚胎共培养微流控芯片有助于在体外实现自动化的胚胎定位和培养过程,并且对小鼠胚胎发育具有更好的促进作用。     

苍耳子提取物对斑马鱼的发育及运动行为的毒性研究

为研究苍耳子提取物对斑马鱼胚胎发育及运动行为的影响,取受精后12/24 h斑马鱼胚胎,将胚胎分别置于不同浓度苍耳子提取物溶液中,在作用不同时间后,显微镜下统计孵化率、死亡率和心率;取受精后120 h斑马鱼胚胎,用不同浓度苍耳子提取物处理60 min后,利用行为学分析系统统计各组斑马鱼在0~10、10~20、20~30 min内行为轨迹,基于游行距离与游行时间得到游行速度,并统计转圈值。结果表明,苍耳子提取物对受精后12 h斑马鱼胚胎的发育有毒性,使斑马鱼胚胎的孵化率降低,在提取物浓度大于15μg/mL时,孵化率低于40%;0.93μg/mL苍耳子提取物可提高24 h斑马鱼胚胎的心率(P≤0.01),当提取物浓度大于7.5μg/mL时,心率显著性降低(P≤0.01);在行为学分析中发现,当苍耳子提取物浓度大于3μg/mL时,游行速度与转圈均值明显增加。研究认为,苍耳子提取物对斑马鱼胚胎发育有毒性作用,能够兴奋斑马鱼胚胎心率并增加其游行速度。     

二元关系胚的性质及二元关系的胚分解

对于非空集合上的二元关系引入了关系的自反胚、反自反胚、对称胚、反对称胚、等价胚和偏序胚,并讨论了它们的基本性质,得到关系的3个唯一的基本胚分解式.     

鸡胚细胞的培养

研究了鸡胚细胞的生长规律，葡萄糖的利用和乳酸、氨等代谢产物的积累规律，比较了培养基对细胞生长的促进作用，筛选了合适的微载体，初步探讨了用微载体培养鸡胚细胞的方法。实验结果表明，鸡胚细胞在DMEM培养基中生长良好，最适合的微载体为胶原型微载体，如GT-2，Gytodex-3。     

哺乳动物植人前胚胎发育的程序化

哺乳动物植入前胚胎发育的程序化过程,是发育生物学的核心问题,弄清这一过程,对研究哺乳动物早期发育有着重要意义.因受研究方法、实验材料等因素的影响,该研究领域的进展缓慢.文章就近年来在植入前胚胎发育的分子事件、母源调控向合子型调控的过渡、细胞核重建、染色质的重建机制、基因组甲基化与基因表达等方面的研究进展进行了综述.     

哺乳动物植入前胚胎发育的程序化

哺乳动物植入前胚胎发育的程序化过程,是发育生物学的核心问题,弄清这一过程,对研究哺乳动物早期发育有着重要意义.因受研究方法、实验材料等因素的影响,该研究领域的进展缓慢.文章就近年来在植入前胚胎发育的分子事件、母源调控向合子型调控的过渡、细胞核重建、染色质的重建机制、基因组甲基化与基因表达等方面的研究进展进行了综述.     

小鼠胚胎移植实验方法

目的在小鼠胚胎移植实验中除了胚胎的质量外,希望从受体状况及胚胎移植的技术和方法上摸索出最佳胚胎移植的条件,提高胚胎移植率,为临床胚胎移植提供实验和理论数据。方法从超数排卵或自然发情怀孕3.5 d的母鼠子宫内收集胚胎,在显微镜下观察,以最快的速度将发育与胚龄一致并且形态完好的胚胎捡出,并移植到自然发情2.5 d的小鼠子宫内。结果超数排卵的胚胎质量比自然发情的胚胎质量差,在12个自然发情的受体中有3个怀孕并产下12只仔鼠。结论小鼠胚胎移植与供受体的准备、小鼠的超数排卵、胚胎品质有着密切的关系,胚胎移植的技术和方法对胚胎移植有着至关重要的关系。     

寒武纪化石胚胎Markuelia的肌肉组织

利用同步加速器辐射X射线断层显微技术(SRXTM),研究湖南省王村化石库的化石胚胎Markuelia hunanensis.所研究的标本保存了头部和尾部表皮下的栅栏状结构,对这些结构进行三维重建后,发现栅栏结构为环形,呈两侧对称状排列.将头部和尾部的栅栏结构分别解释为可能的咽部和尾刺基部的肌肉组织.对可能的肌肉组织结构...     

小鼠胚胎移植研究

目的研究不同时期胚胎对胚胎移植成功率的影响以提高胚胎移植率。方法采用经超量排卵的KM雌鼠与正常615雄鼠交配,取受精卵,分别将单胚卵、双胚卵、桑椹胚和囊胚、移入发情的假孕KM雌鼠的输卵管和子宫中妊娠产仔。结果移入单胚卵、双胚卵、桑椹胚和囊胚的假孕母鼠妊娠率分别为36.36%、42.86%、10%、27.27%,产仔率分别为46.58%、38.46%、58.33%、60%。结论移植双胚卵可提高小鼠的胚胎移植成功率。