ANXA2表达对Caco2细胞形态影响的扫描电镜观察

为研究ANXA2表达水平对结直肠癌细胞(Caco2)形态学的影响,将ANXA2特异性干扰重组质粒pU6H1-GFP-siANXA2导入Caco2细胞,用扫描电子显微镜在转染后不同时间点对Caco2细胞的形态及表面结构进行观察.结果显示,抑制ANXA2表达后Caco2细胞的外观形态改变,细胞表面微绒毛及伪足等结构受损,并随时间延长而加剧,最终细胞表面趋于光滑,部分细胞出现凋亡表型.这些结果提示,ANXA2高表达是维持Caco2细胞活跃运动力有关恶性形态学特征的重要因素.     

细胞骨架对肝癌细胞粘附性的影响

利用微管吸吮技术,定量研究了肝癌细胞在ＩＶ型胶原／层粘素复合裱衬表面上的粘附特性,在此基础上,利用两种细胞骨架干扰剂进上步探讨了细胞骨架系统对肿瘤细胞粘附力的影响。结果：以正常肝细胞对照,用细胞松弛素Ｄ（０．２５～５ｕｇ／ｍＬ）处理后,两种细胞粘附力大大降低约７０％～９０～,而癌细胞降低幅度更大,用秋水仙素（１～６０ｕｇ／ｍＬ）处理后,癌细胞的粘附力降低或趋于降低,而正常肝细胞则升高１４０％～５０     

超氧化物歧化酶模型化合物对离体肝癌细胞的影响

探讨了外源抗氧化剂超氧化物歧化酶模型化合物MSOD(Cu2C21N14H27C13)对人肝癌细胞增殖的影响．采用离体培养的人肝癌细胞SSMC-7721细胞株,接种入96孔板,24h后加入MSOD模型化合物,采用MTT(methyl thiazolyl tetrazolium)实验,计算肝癌细胞生长抑制率;结果表明,不同浓度组的SOD模型化合物对肝癌细胞的增殖均有抑制作用,而且这种抑制作用呈时间和剂量效应．     

Bcl—2基因加强表达对OA诱发的细胞编程死亡的效应

ＯＡ能诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞编程互亡，死亡细胞缩小为圆，细胞质凝聚，ＤＮＡ有控降解成约２００ｂｐ左右的片段，且这一过程可由蛋白南合成抑制剂环己酮抑制将编码Ｂｃｌ－２全长蛋白质的ｃＤＮＡ植入ｐＸＪ４ｌｎｅｏ载体中，使其表达由ＨＣＭＶ病毒启动子控制。     

龙葵碱对HepG2细胞NAT1酶活性的影响

探讨龙葵碱对HepG2人肝癌细胞的N-乙酰基转移酶1(NAT1)酶活性的影响.采用高效液相色谱法(HPLC),以对氨基苯甲酸(PABA)为底物,以PABA被NAT1乙酰化为乙酰对氨基苯甲酸(Ac-PABA)的量反应NAT1酶的活性.观察不同质量浓度、不同时间龙葵碱对完整HepG2细胞NAT1酶活性的影响;龙葵碱对HepG2细胞细胞质中NAT1酶活性的影响.结果表明,在NAT1酶活性测定中,龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT1的活性;龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT1的活性,且作用具有剂量依赖性;随着时间的增加NAT1转化产物的量逐渐增加,但龙葵碱能显著降低同一时段NAT1的活性.提示龙葵碱通过抑制HepG2细胞中NAT1的活性是龙葵碱抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用机制之一.     

硫酸长春新碱对肝癌细胞HepG2抑制作用

通过体外实验观察长春新碱对人体肝癌细胞增殖的影响效果.通过MTT比色法检测药物在不同时间和不同质量浓度条件下对细胞增殖的抑制作用.结果显示,24、48 h作用效果不理想,在72 h从质量浓度0.031 25μg/mL开始的长春新碱能造成对人体肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,达到8μg/mL时抑制效果基本达到最大.实验表明,长春新碱对人体肝癌细胞的增殖有比较明显的抑制作用,是一种效果较高,毒性较低,需要作用时间较长的化疗药.     

缺氧环境下三氧化二砷对人肝癌HepG2细胞c-myc 表达的影响

目的：探讨缺氧环境下三氧化二砷（As20 3）对体外培养的人肝癌HepG2细胞c-myc蛋白表达的影响.方法：用氯化钴（CoC l2） 创造缺氧微环境,设常氧组、缺氧组及缺氧加药物组,用免疫细胞化学法观察4.0umol/L As203作用HepG2细胞48h后c-myc蛋白表达的影响.结果：常氧环境下c-myc蛋白呈弱阳性表达,缺氧诱导48小时后c-myc蛋白表达显著升高（t=186.51,P〈0.05）,缺氧环境下As 203能抑制c-myc蛋白的表达（t=483.64,P〈0.05）.结论：缺氧环境下As 203能抑制c-myc蛋白的表达.     

抗坏血酸和亚硒酸钠对肝癌细胞逆转的研究

采用细胞倍增时间、分裂指数、生化变化和软琼脂克隆形成率等指标测定分化,研究了抗坏血酸和亚硒酸钠对人肝癌细胞逆转的作用.结果表明用抗坏血酸4mmol*L-1联合亚硒酸钠2μmol*L-1处理细胞后,细胞的生长率和有丝分裂指数都显著下降.一些与细胞恶性表型有关的指标,如细胞表面电荷明显下降,电泳率从1.74μm*s-1*V-1*cm-1下降到0.91μm*s-1*V-1*un－1,甲胎蛋白含量从331μg*g-1(蛋白)下降到90μg*g-1,γ-谷氨酰转肽酶活性从0.74U*g-1(蛋白)下降到0.19U*g-1.与细胞分化有关的指标,如酪氨酸-α-酮戊二酸转氨酶（TAT）的活性从14.7μmol*g-1(蛋白)升高至42.6μmol*g-1,软琼脂克隆形成能力下降94.7%.由此可见,抗坏血酸和亚硒酸钠联合能诱导肝癌细胞在分化,逆转肿瘤细胞的恶性表型.     

隐丹参酮诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡作用研究

目的:探讨隐丹参酮诱导人肝癌细胞HepG-2细胞凋亡作用及机制。方法:采用MTT法测定隐丹参酮对人肝癌HepG-2细胞生长率的影响,流式细胞仪测定隐丹参酮诱导人肝癌细胞HepG-2细胞DNA的影响,蛋白印记测定隐丹参酮对人肝癌细胞HepG-2、caspase-3、PARP、bcl-2以及bax蛋白表达的影响。结果:隐丹参酮12.0μM-100μM对HepG-2细胞生长率的抑制与对照组比较具有显著性差异;隐丹参酮作用12h、24h和48h后,细胞凋亡率分别为1.95%、5.84%和9.05%;隐丹参酮(12μM)孵育24h和48h可显著促进caspse-3和PARP的裂解;隐丹参酮(12μM)孵育24h和48h可显著抑制bcl-2促进bax的蛋白表达。结论:隐丹参酮诱导人肝癌细胞HepG-2细胞凋亡,机制可能是通过抑制bcl-2,促进bax表达,通过调控bcl-2/bax比值,最终激活下游效应因子cas-pase-3,从而诱导细胞凋亡。     

三氧化二砷对肝癌BEL-7402细胞生长及端粒酶活性的影响

目的：观察不同浓度三氧化二砷作用不同时间对肝癌BEL—7402细胞生长及端粒酶活性的影响并探讨其作用机理。方法：应用不同浓度三氧化二砷作用于肝癌细胞系BEL—7402不同时间后，观察肝癌细胞的存活；用端粒酶检测试剂盒检测端粒酶活性的变化。结果：三氧化二砷可显抑制肝癌细胞系BEL—7402的生长；经三氧化二砷作用后肝癌细胞端粒酶活性下降；抑制作用与时间、剂量有关。结论：三氧化二砷可明显抑制肝癌细胞系BEL—7402的生长，其机理可能是降低细胞端粒酶活性和其他的机制。     

肺癌A549细胞COX-2与MMP-2表达的关系

目的:探讨肺癌A549细胞环氧化酶-2(COX-2)表达和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达之间可能潜在的关系.方法:①用Western blot法检测对照组和干预组(5、10、15μg/mL脂多糖(LPS)干预12 h,10 μg/mL的LPS干预6、12、24 h)A549细胞MMP-2蛋白质表达;②用ELISA法检测对照组和干预组A549细胞培养上清液COX-2活性产物前列腺素E2(PGE2)及MMP-2的变化.结果:①在5、10、15μg/mL的LPS 12 h诱导下,肺癌A549细胞MMP-2蛋白表达及MMP-2和PGE2的分泌增加;②10 μg/mL的LPS干预肺癌A549细胞6、12、24 h后MMP-2蛋白表达及MMP-2和PGE2的分泌增加;③肺癌A549细胞PGE2与MMP-2正相关(r1=0.980,r2=0.975).结论:①肺癌A549细胞PGE2与MMP-2密切相关;②肺癌A549细胞可能通过激活肺癌A549细胞MMP-2,参与肺癌的侵袭与转移.     

特异性siRNA对大鼠肝星状细胞TIMP-1表达的影响

观察金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）小干扰RNA真核表达载体转染肝星状细胞株HSC-T6后TIMP-1基因表达的情况。构建携带绿色荧光蛋白（GFP）基因的小干扰RNA真核表达载体pGCsi-U6／TIMP-1 shRNA,利用该载体介导四个特异性和一个非特异性的TIMP-1 shRNA,分别为TIMP-1 shRNA1、TIMP-1 shRNA2、TIMP-1 shRNA3、TIMP-1 shRNA4和TIMP-1 shRNA—NON。采用阳离子脂质体介导法转染HSC-T6细胞,激光共聚焦显微镜观察GFP表达,荧光实时定量PCR方法检测TIMP-1 mRNA表达情况。质粒转染HSC—T6细胞后,激光共聚焦显微镜观察转染组细胞内均见绿色荧光,未转染组未见绿色荧光;mRNA水平检测显示：与正常对照组相比,TIMP-1 shRNA1、TIMP—1 shRNA2和TIMP-1 shRNA4对TIMP-1基因表达较强的抑制作用,尤TIMP-1 shRNA1抑制作用最强（P〈0．01）。pGCsi—U6介导的TIMP-1 shRNA1能更加有效的抑制肝星状细胞中TIMP—1的表达。     

柴胡皂苷d对肝星状细胞的作用分析

从传统药物中寻找生物活性成分是开发抗肝纤维化药物的重要途径。人们发现中药柴胡成份柴胡皂苷d（SSd）可以抑制肝星状细胞（HSC）活化,但是相关生物学机制的研究较少。本研究以体外诱导活化的HSC为肝纤维化细胞模型,探究SSd抗肝纤维化效果及其分子机制。结果显示,SSd能够抑制HSC增殖和纤维化相关基因转录,并且可能通过激活细胞凋亡通路和抑制线粒体能量代谢两条途径诱导HSC发生凋亡。本研究表明,SSd有希望成为抗肝纤维化的潜在药物。     

中国对虾（PUENAEUSCHINENSIS）肝小管管壁细胞结构的研究

用透射电镜观察中国对虾肝小管。指出肝小管管壁由六种细胞组成。描述六种细胞的超微结构，并根据各种细胞的结构特点，探讨其功能。     

整合素α2β1对肝癌细胞粘附与趋化行为的影响

采用微吸管技术,研究整合素α2β1对肝细胞癌（HCC）细胞SMMC-7721与Ⅳ型胶原衬表面粘附力特性和该细胞对Ⅳ型胶原趋化行为的影响．观察Anti-α2、Anti-β1对SMMC-7721细胞与Ⅳ型胶原裱衬表面的粘附力的影响;采用双微吸管实验法,观察SMMC-7721细胞伪足形成过程以及Anti-α2、Anti-β1对SMMC-7721细胞伪足形成的影响．利用流式细胞仪对SMMC-7721细胞表面整合素α2、β1亚单位的表达进行分析．结果表明,SMMC-7721细胞与5μg／mL Ⅳ型胶原裱衬表面之间的粘附力为952±134（×10^-10 N,n=60）,加入5μg／mL Anti-α2粘附力减小到605±128（×10^-10 N,n=60）;加入10μg／mL Anti-α2时粘附力减小到579±57（×10^-10 N,n=50）．加入5μg／mL Anti-β1粘附力减小到449±119（×10^-10 N,n=60）;加入10μg／mL Anti-β1时粘附力减小到220±78（×10^-10 N,n=55）．双微吸管趋化实验表明：两侧微吸管加入相同浓度Ⅳ型胶原,细胞向两侧微吸管均有伪足形成;在此基础上,微吸管分别加入Anti-α2、Anti-β1的一侧,SMMC-7721细胞伪足生长曲线呈现明显的抑制,而未加入抗体的微吸管一侧与加入的对侧相比,该侧细胞的伪足明显增加．流式细胞仪分析表明,所研究细胞整合素α2、β1亚单位表达率达分别为23．17％和95．78％．上述结果表明,整合素α2β1是联系SMMC-7721肝癌细胞与Ⅳ型胶原裱衬表面粘附以及SMMC-7721细胞对Ⅳ型胶原趋化性伪足形成的重要受体基础．     

重组GGPPS腺病毒载体的构建及其调节肝星状细胞活化的研究

目的:构建携带人源ggpps基因的重组腺病毒并用其研究GGPPS对人肝星状细胞的活化作用.方法:利用PCR方法扩增ggpps基因片段,并亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成穿梭质粒pAdTrack-CMV-GGPPS.测序正确后,经PmeⅠ单酶切线性化的pAdTrack-CMV-GGPPS与腺病毒骨架...     

东方蝼蛄提取物对3株人宫颈癌细胞的细胞毒性研究

采用乙醇冷浸法对东方蝼蛄的干燥品粉碎物进行提取,采用聚酰胺柱层析分离划段得到东方蝼蛄乙醇提取物的不同部位,所得部位通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)对3种人宫颈癌细胞株(He La、Caski、C-33A)进行了体外肿瘤细胞毒性测试.结果表明,东方蝼蛄提取物中有1个分离样品的半数抑制浓度(IC50)接近10.0μg/mL,对3种人宫颈癌细胞株均具有明显的细胞毒性.东方蝼蛄乙醇提取物中存在抑制肿瘤细胞生长的物质,值得对其进一步深入研究.     

百草枯对人肝HepG2细胞生长和周期的影响

为全面理解百草枯(PQ)对人肝的毒性效应,寻找新的方法增强肝对PQ的解毒能力,本文采用显微观察和流式细胞术分析了PQ处理24h对人肝HepG2细胞生长和周期的影响.结果显示,7.21mg/L的PQ处理即可抑制部分HepG2细胞的生长,23.36mg/L的PQ可导致HepG2细胞周期停滞,S期细胞明显减少、G1和G2期细胞明显增多,且细胞生长抑制和周期受阻程度与PQ处理浓度呈正相关.该结果表明,PQ对HepG2细胞的生长和周期具有明显阻滞作用,生长因子类或促增殖类药物可能有助于增强人肝对PQ的解毒能力.     

用siRNA抑制胃癌细胞AGS中COX-2表达及对AKT磷酸化的抑制

构建了可在真核细胞中表达针对COX-2基因的siRNA表达载体,并用胃腺癌细胞系AGS建立了COX-2 siRNA的稳定转染细胞系。用Western-Blot检测稳定转染细胞系中COX-2的表达以及AKT的磷酸化水平。结果表明稳定转染C0X-2 siRNA的细胞中COX-2的表达较转染空载体的细胞明显降低,且发现COX-2表达的降低可抑制AKT—Ser^473和Thr-^308的磷酸化水平。为进-步探索抑制COX-2对胃癌细胞生物学特性的影响,及其在肿瘤治疗中的作用奠定了基础。