脉冲电离子联合α-2b干扰素预防尖锐湿疣复发疗效探讨

为探讨脉冲电离子联合α-2b干扰素预防尖锐湿疣复发的疗效和作用机制，采用随机对比法，两组均电灼去掉疣体后，治疗组病损处注射α-2b干扰素，对照组全身肌注α-2b干扰素，比较4个月后复发率分别为8．9％和28．9％．提示电灼联合α-2b干扰素局部给药是降低尖锐湿疣复发率新的有效途径．     

重组人干扰素α-2b工程菌培养条件的优化研究

对重组人干扰素α-2b工程菌的培养条件、诱导条件进行研究.提高菌体目标蛋白表达量.通过实验条件的优化确定了适合重组人干扰素α-2b表达的诱导温度、诱导时间和诱导收获时间等.改进工艺后,目的蛋白的表达量大大提高,为进一步的下游工艺的开发奠定了基础.     

过氧化氢酶-2能力验证样品的制备及其 均一性和稳定性测定

目的 制备a、b两个型别的过氧化氢酶-2能力验证样品,并对其均匀性和稳定性进行测定评价。方法 均匀性测定均按照4%比例随机抽样,冻融稳定性以4次冻融为测定终点;时间-温度稳定性以4、20、37 ℃这3个温度为观测纵坐标,1、2、3、7、15、30 d为观测横坐标,在每个坐标交点,a型、b型分别随机抽取2瓶,测定不同条件下各型别样品的稳定性。结果 a型、b型样品在均匀性测定中,均表现为各型别的清晰条带;4次冻融后仍能稳定存在,且30 d内在4、20 ℃和37 ℃三种条件下均能稳定存在。结论 过氧化氢酶-2样品均匀性和稳定性良好,适于能力验证样品的制备发放需求。     

家猪Ⅲ型干扰素的生物化学性质与抗病毒能力研究

根据(GenBank公布的家猪Ⅲ型干扰素序列,设计特异性引物,从猪肾细胞PK-15中调取了家猪干扰素PoIFN-λ1,-λ3的cDNA序列,构建成pcDNA3.1B-/PoIFN-λs真核表达载体,并进行表达及性质研究.首先检测了在中华仓鼠肾细胞(BHK-21)中的转录及翻译水平,发现PoIFN-λ1,-λ3分别具有1个及2个N端糖基化位点.其次,鉴定了PoIFN-λs在猪肾细胞IBRS-2及PK-15中对合成双链RNA poly I:C、口蹄疫病毒(FMDV)及伪狂犬病毒(PRV)的应答表达谱.此外,检测了PoIFN-λs在IBRS-2中诱导抗病毒基因及细胞因子的表达情况,结果显示PoIFN-λs可显著诱导MX、OAS、PKR等干扰素激活基因(ISGs)及细胞因子IL-6、TNF-α的表达.抗病毒实验表明,PoIFN-λs在PK-15/PRV及IBRS-2/FMDV系统均具有低于PoIFN-α12的抗病毒活性;但在与PoIFN-α12联合使用时,抗FMDDV效果增强,Real time PCR检测发现ISGs表达量协同升高.     

重组大肠杆菌BL21(pBAI)生产人干扰素α2b

通过培养重组大肠杆菌BL21(pBAI)表达人干扰素α2b(Human Interferon α2b,hIFNα2b).hIFNα2b表达由PL,启动子控制,通过升温至42℃诱导表达.本研究比较了分批培养和多种补料分批培养方式下hIFNα2b的生产,其中通过恒速流加葡萄糖,hIFNα2b的表达量达到6 540 mg/L,平均生产速率和比速率分别为546 mg/(L·h)和27 mg/(g·h).升温前1.5 h补充25 g酵母提取物,并以0.27 g/(g·h)的比速率供应葡萄糖,hIFNα2b的平均生产速率达到1 006 mg/(L·h),比生产速率为54 mg/(g·h),对有机氮源的得率提高到138 mg/g.     

含疏水基右旋糖酐对α-淀粉酶的稳定作用

用含疏水基团的右旋糖酐可以方便有效地稳定α-淀粉酶,显著地提高其贮存稳定性。实验结果表明,含苄氨基右旋糖酐、钙离子和硼酸盐的α-淀粉酶稀溶液(0.5mg/mL)于室温(25℃～30℃)贮存2个月,酶活力仍保留87％。     

融合胸腺素α1的猪干扰素α在毕赤酵母中的表达及效价测定

猪干扰素α(IFN-α)是在特定条件下由细胞产生的一种具有广谱、高效抗病毒活性的可溶性糖蛋白,胸腺素α1(Tα1)是一种具有免疫调节的活性肽.本研究中将Tα1基因与去掉信号肽序列的猪IFN-αN端融合,构建酵母表达载体PHBM-Tα1-IFNα,同时构建单独表达IFNα的重组质粒PHBM-IFNα,重组质粒电转化至毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株,甲醛诱导表达.利用SDS-PAGE法检测融合蛋白的表达,并用细胞病变抑制法测定干扰素的效价.实验结果表明,酵母表达上清中IFNα的效价为2.916×10~6U/m L;Tα1-IFNα的效价为2.860×10~7U/m L,该结果证实胸腺素α1可提高融合表达蛋白猪干扰素的活性,因此,通过酵母表达体系获得高活性胸腺素-猪干扰素融合蛋白,可为高效、低成本获得抗病毒药物提供一种新的模式.     

干扰素的基本特点与临床效果

干扰素(Interferon,IFN)是由细胞产生的一类诱生性蛋白质,研究发现干扰素具有广谱抗病毒、免疫调节及抗肿瘤三大功能,目前干扰素被公认为一种广谱治疗病毒性疾病的生物制剂,而且在抗肿瘤方面也呈现可观的临床疗效。早期干扰素是用病毒或干扰素诱生剂诱导人体细胞产生的自然干扰素,自然干扰素是含有不同型别及亚型的多种干扰素混合体(如人白细胞干扰素99％α-干扰素,1％-β干扰素)。近年来     

重组猪α-干扰素的纯化及生化性质鉴定

对巴斯德毕赤酵母高效分泌表达的猪α-干扰素(PoIFN-α)纯化工艺和纯化后重组蛋白的部分生化特性进行了研究,结果表明:猪α-干扰素(PoIFN-α)发酵液经离心、透析、过滤处理之后,依次利用亲和层析和离子交换层析使目的蛋白得到了纯化.经N端氨基酸测序,Westem-blot,对酸、热、巯基乙醇的稳定性和糖基化程度等检测后发现,所表达的猪α-干扰素N端氨基酸序列(前5个)正确,对酸和热基本稳定,二硫键对目的蛋白的活性至关重要,没有发现目的蛋白的糖基化.     

比色法测定聚乙二醇化重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量

建立比色法测定聚乙二醇化干扰素α2b(PEG-IFNα2b)注射液中吐温80含量,并评估聚乙二醇(PEG,分子量:20KD)对该测定方法的影响。     

融合干扰素rPoIFN-α/β联合黄芪多糖抗病毒活性研究

以融合干扰素rPoIFN-α/β和黄芪多糖(APS)作为抗病毒药物,采用MTT法与细胞病变(CPE)抑制试验评价了二者联用抗PRRSV,CSFV和PRV 3种猪源性病毒的效果.结果显示,融合干扰素rPoIFN-α/β和黄芪多糖(APS)联合使用对PRRSV,CSFV和PRV 3种猪源性病毒抑制作用远远高于单独使用,体现出显著的协同抗病毒效应,为融合干扰素与黄芪多糖的联合用药防控病毒性疾病提供了理论基础.     

HPV感染重型宫颈病变患者应用LEEP联合重组人干扰素α-2b栓治疗的效果评价

目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)感染重型宫颈病变患者应用宫颈环形电切术(LEEP)联合重组人干扰素α-2b栓治疗的应用价值。方法选取2016年12月至2017年12月间于佛山市口腔医院诊治的HPV感染重型宫颈病变患者78例,按随机数字法分为对照组和观察组,其中采用LEEP术治疗的患者39例(对照组),采用LEEP术联合重组人干扰素α-2b栓治疗的患者39例(观察组)。比较两组临床疗效、HPV转阴率、围术期指标和并发症情况。结果观察组的治愈率及有效率、治疗后12周HPV转阴率均高于对照组,观察组患者复发率明显低于对照组;观察组患者术后创面愈合时间、阴道出血时间及阴道渗液时间均少于对照组;观察组术后并发症发生率明显低于对照组。以上对比均有统计学意义(p0.05)。结论应用LEEP联合重组人干扰素α-2b栓治疗HPV感染重型宫颈病变可提升疗效,减少阴道出血和渗液,促进切口愈合,减少并发症,降低复发率,值得在临床应用中推广。     

α2b干扰素基因与Ag85B基因在毕赤氏酵母中的融合表达

Ag85是结核分枝杆菌的一种分枝菌酸转移酶复合体,在结核分枝杆菌的细胞壁合成过程中起着重要作用Ag85B是该复合体的一个组分,具有较好的免疫原性通过连接多肽（G4S）4的编码序列,将α2b干扰素基因与Ag85B基因连成融合基因,然后克隆到毕赤氏酵母表达载体pPIC9上,转化Pichia pastoris SMD1168后获得重组酵母工程菌SMD1168／pPIC9-α2bAg85B,经甲醇诱导培养,发酵上清液经抗病毒活性测定,Western blot鉴定以及初步纯化,结果表明,分泌表达的融合蛋白具有一定的抗病毒活性．     

实验动物遗传检测能力验证样本稳定性研究

目的 对2021年能力验证计划肽酶-3样本的均匀性和稳定性进行研究。方法 根据CNAS-CL04和GB/T 14927.1—2008,对肽酶-3样本进行均匀性和稳定性检验。考察4个温度(37℃,室温，4℃和-20℃)条件下和运输条件下的样本稳定性。结果 肽酶-3样本，均匀性检验合格。在37℃条件下可以稳定6 h;在室温条件下可以稳定7 d;在4℃条件下，可以稳定4周；-20℃条件下，可以稳定2个月；在运输条件下，可以稳定7 d。结论 肽酶-3样本的均匀性和稳定性检验结果满足开展能力验证计划的要求。     

按大肠杆菌高表达序列设计的人干扰素α-2b基因的化学合成和克隆

根据大肠杆菌高表达序列重新设计了人干扰素α-2b基因编码区的核苷酸序列,应用化学合成的方法合成了多个互补DNA片段,经互补片段分别退火和连接后,将完整编码区分两段分别克隆于pUC19质粒中,进行DNA序列分析,分别选取序列完全正确的两种克隆片段进行重组.获得了与设计序列完全一致的含有完整编码区的人干扰素α-2b基因.     

3%氯化钠联合重组人干扰素α-1b高频雾化吸入治疗毛细支气管炎的临床观察

研究3%氯化钠联合重组人干扰素α-1b高频雾化吸入治疗毛细支气管炎的临床效果。选择靖远煤业集团有限责任公司总医院儿科收治的毛细支气管炎患儿82例,按照床位单双号分为两组,其中观察组38例,常规组44例,常规组给予基础治疗,观察组在此基础上给予3%高渗盐水2ml+重组人干扰素α-1b,高频雾化吸入治疗,观察两组患儿临床症状及体征,记录喘憋消失的时间、气促消失的时间、咳嗽消失时间、肺部哮鸣音消失的时间及住院时间。观察组的患儿治疗后临床表现缓解时间(喘憋消失、气促消失、咳嗽消失及肺部哮鸣音消失)均明显短于常规组,差异具有统计学意义(P0.05)。3%氯化钠联合重组人干扰素α-1b高频雾化吸入治疗毛细支气管炎,能够较快缓解患儿喘憋时间,减轻临床症状及体征,提高患儿的治疗效果。     

用五种标准物质的稳定性评价实验动物遗传质量研究

目的 通过分析5种标准物质的稳定性,获得标准物质的贮存条件和运输条件。方法 依据国家标准 GB/T 14927.1—2008进行标准物质的制备,设定-20℃,4℃,室温和37℃为4个温度检验点,设定1、2、3、7、14、30、60 d和90 d为8个时间检验点,进行稳定性检验。结果 5种标准物质在4 ℃和-20 ℃均可以稳定保存至90 d。过氧化氢酶-2在37 ℃能稳定保存3 d,其他4种标准物质在37 ℃仅能稳定保存1 d。在室温条件下,苹果酸酶-1,异柠檬酸脱氢酶-1和过氧化氢酶-2能稳定保存3 d,碱性磷酸酶-1能稳定保存5 d,肽酶-3能稳定保存14 d。结论 用于实验动物遗传质量评价使用的标准物质,有必要严格控制其保存条件和运输条件。     

重组人干扰素α-1b和利巴韦林治疗儿童手足口病疗效对比研究

目的:探讨重组人干扰素α-1b治疗儿童手足口病的疗效和安全性。方法:将388例手足口病患儿随机分为两组,两组患儿给予相同的对症和支持治疗。治疗组184例用重组人干扰素α-1b肌肉注射,1岁1 ug/(kg·d),2~10岁10 ug/d,1次/d;对照组204例用利巴韦林〔10~15 mg/(kg·d)〕静脉滴注。结果:治疗组与对照组比较,在退热时间,手足皮疹及口腔溃疡愈合方面均优于对照组(P0.01),除个别患儿有发热外,治疗组未发现明显副作用。结论:干扰素治疗儿童手足口病安全有效,值得临床推广使用。     

实验小鼠肾匀浆中肽酶-3样本稳定性分析

目的 通过分析肽酶-3样本的稳定性,了解该样本的贮存条件和运输条件,进而采取适当措施保障能力验证样品的品质时刻符合实施能力验证活动的要求。方法 按照国家标准 GB/T 14927.1—2008进行样本的制备,设定-20 ℃,4℃,室温和37 ℃为4个温度检验点,设定1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、14 d和28 d为9个时间检验点,进行稳定性检验。结果 肽酶-3样本在37 ℃仅能稳定保存1 d,在4 ℃、室温和-20 ℃均可以稳定保存至28 d。结论 在该项目实施过程中,有必要严格控制肽酶-3样本的保存条件和运输条件。     

金属酞菁负载分子筛对孔雀石绿的降解

采用浸渍法制备了4种负载型金属酞菁催化剂:MCM-41-α-(C5H11O)4PcCo(Ⅱ)[Ni(Ⅱ)、Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)].并在室温(25±1℃)中性以及可见光条件下,考察了上述催化剂中心金属、催化剂用量、H2O2浓度以及重复利用方面对孔雀石绿降解速率的影响.研究结果表明:4种催化剂均具有良好的催化性能,在相同条件下, MCM-41-α-(C5H11O)4PcCo的催化效果最好,并且其浓度在0.7g/L(质量为20mg),H2O2浓度为10mmol/L条件下,孔雀石绿在10min内降解率可达92%.对重复性的研究表明该种负载催化剂具有良好的重复利用性