邻氯硝基苯降解菌OCNB-1的分离鉴定与降解质粒

以邻氯硝基苯为唯一碳源、氮源和能源,从某化工厂废水处理站活性污泥中分离出一株细菌OCNB-1, 经微生物自动测定仪WSVTK-R07.02和16S rDNA扩增测序初步鉴定为Pseudomonas putida;在培养基pH值为8.0、培养温度为32 ℃、摇床转速为120 r/min的条件下,考察了该菌株降解邻氯硝基苯的能力,发现菌株42 h内将起始浓度为1.07 mmol/L的该化合物降解了约80%;经质粒检测,在OCNB-1菌株中发现一条质粒条带,选用7种内切酶对质粒pOCNB-1进行单酶切,得出质粒大小约为32 kbp;抗生素抗性实验表明菌株对红霉素、氨苄青霉素、青霉素钠的抗性与质粒无关,对利福平、氯霉素的抗性与质粒有关;通过细菌接合,质粒转移到无降解邻氯硝基苯能力的Pseudomonas.stutzeri受体菌中,接合子Pseudomonas.stutzeri能利用邻氯硝基苯为唯一碳源、氮源和能源,证明质粒为降解质粒.     

硝基苯降解菌筛选和鉴定

微生物法处理硝基苯废水是较理想的方法。从吉林市某化工厂的排污口的江底底泥采样,以硝基苯为底物,在好氧条件下,经过长时间的驯化、筛选,成功地分离出了4株对硝基苯有较强耐受力的高效降解菌,经鉴定为假单胞杆菌属(Planococcus Migula)、动性球菌属(Pseudomonas Migula)。研究结果表明,在好氧条件下它们能把硝基苯作为惟一的碳源并对硝基苯有较强的生物降解能力;通过驯化可以使降解菌对硝基苯的降解能力有较大地提高。     

苯酚降解菌的富集、分离与鉴定

 用苯酚作为唯一碳源富集培养化工厂、废水处理厂、造纸废水样品,从中分离得到4株具有苯酚降解能力的菌株.用编码苯酚羟化酶大亚基基因的保守序列设计特异引物进行检测,共有3株菌扩增出相应的产物.对其中降解能力最强的1株菌的16SrDNA序列进行系统发育分析,确定其为假单胞菌.与以前方法相比,本方法可检测到目前几乎所有的苯酚羟化酶基因,从而实现快速、准确、方便地从苯酚污染的环境中检测苯酚降解菌.     

多菌灵降解菌GRPD-1的分离鉴定及降解特性研究

从成都彭州蔬菜基地土壤中分离得到1株能以多菌灵作为唯一碳氮源生长的细菌,命名为GRPD-1.经形态观察、生理生化实验以及16S rDNA基因同源性序列分析,鉴定其为假单胞菌属(Pseudo-monas sp.).研究了该菌株在不同pH值、温度、接种量和外加碳氮源条件下对多菌灵降解效果的影响.实验结果表明,该菌株在以多菌灵为唯一碳氮源的基础盐培养基中培养6 d,对50 mg/L多菌灵的降解率达到60%.添加少量葡萄糖、蛋白胨作额外碳氮源时可促进菌株GRPD-1对多菌灵的降解,第2天的降解率提高到90%以上.其最适降解条件为pH值7.0,温度30℃,接种量9%.研究结果表明菌株GRPD-1在农药污染的土壤修复方面具有广阔的应用前景.还考察了菌株在不同碳氮源生长条件下产生的蛋白酶的试验,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,初步分析了酶谱条带,发现菌株在不同碳氮源生长条件下表达的蛋白酶有差异.     

1株氯苯降解菌的分离鉴定及降解特性研究

从大连化工厂的活性污泥样品中分离得到1株氯苯降解菌CB-2,该菌株能够以氯苯为唯一碳源进行生长.通过对其形态、生理生化特征分析以及对16SrDNA序列进行同源比较,初步鉴定该菌株为肠杆菌属（Enterobacter）.研究了菌株CB-2对氯苯的降解特性,实验结果表明,该菌株对氯苯的最适降解条件为pH=7,温度35℃,摇床转速为120r/min,接种量5%.在最适条件下,氯苯降解率可达82%以上.测定了降解途径中相关酶的活性,表明菌株CB-2降解氯苯是通过邻苯二酚1,2-双加氧酶催化的邻位开环途径进行的.     

石油降解菌的分离与鉴定

按照石油污染土壤微生物修复技术目前发展的方向,本论文针对天津大港油田地区石油污染盐碱土壤的现状,经过分离、筛选、复筛,从大港油田的石油污染土壤中富集分离、优选出2株石油降解菌,并进一步研究了2株菌的生理生化特性.菌株鉴定结果表明,菌株DB-1属于假单胞杆菌属,菌株DF-1属于曲霉菌属.     

多菌灵降解菌的分离、鉴定及其降解特性研究

从长期施用多菌灵的葡萄园土壤中分离纯化得到一株对多菌灵降解较好的菌株djl-11,经生理生化鉴定和16S rDNA序列比对分析,鉴定该菌株为红平红球菌（Rhodococcus erythropolis）。试验研究表明,添加少量氮源可促进菌株djl-11对多菌灵的降解作用。该菌能够以多菌灵为唯一碳源,在多菌灵浓度达到1000 μg/mL的无机盐培养基中,28℃摇床培养48 h降解率达到了99.15%。在pH值4~9之间均能降解多菌灵,最适温度在20~30℃。     

正十六烷降解菌的分离、鉴定及降解特性研究

以持续供给正十六烷为外界环境压力,从大庆石油污染土壤中筛选出一株正十六烷高效降解菌株,命名为L1.经菌株形态特征观察和16S rDNA基因测序,确定该降解菌株为溶血不动杆菌(Acinetobacter haemolyticus).通过单因素试验探究环境因子(正十六烷体积分数、菌液接种量、初始pH值、NaCl质量浓度、培...     

对硝基苯酚降解菌Pseudomonas sp．HY1的分离与活性分析

通过驯化富集,从受污染的土壤中分离出一株降解对硝基苯酚（p-nitrophenol,PNP）的细菌．16SrDNA序列分析鉴定该菌为恶臭假单胞菌Pseudomonas sp．HY1．在有氧,pH7和30℃条件下,该菌能利用PNP为碳源和能源生长并将中等浓度（100mg／L）的PNP快速彻底的降解,高浓度（300mg／L）PNP条件下未检测到菌的生长和降解活性．该菌在15～40℃和pH值5～10的条件下具有降解PNP活性,其中碱性条件（pH8～10）和30℃时活性最高．     

喹啉降解菌BW004的分离、鉴定及降解特性

从武汉钢铁(集团)公司焦化废水处理厂的好氧活性污泥中分离出一株细菌, 可利用喹啉作为唯一的碳、氮和能源进行生长。经16S rRNA测序鉴定为假单胞菌属, 命名为Pseudomonas sp. BW004。利用响应曲面法确定其最佳降解条件, 为pH 7, 转速180 r/min, 温度30.0℃。单菌株?单基质降解试验表明, BW004菌可将200~1000 mg/L的喹啉在4~12小时降解98.8%以上。喹啉降解过程中, 首先产生有机中间产物2-羟基喹啉和2,8-二羟基喹啉, 同时杂原子氮转化为无机终产物氨氮。其后双环结构被破坏, 溶液中的有机物在12~24小时被基本矿化。     

假单胞菌中抗汞质粒pBH33的分离与鉴定

从污染环境中分离出一株抗100μM HgCl_2的假单胞菌B-33.经试验证实,假单胞菌B-33具有汞盐抗性质粒,定名为pBH33质粒,其分子量约为7.24×10~6道尔顿.     

阿特拉津降解菌株Alclegenes sp.SG1的分离鉴定和降解特性研究

用富集培养法,从农药厂的工业废水中分离到降解除草剂阿特拉津的SG1菌株,经16S rRNA基因序列分析,该菌株被鉴定为产碱杆菌(Alcalegenes sp.).Alcalegenes sp.SG1能以葡萄搪、果糖、蔗糖、麦芽糖、丙酮酸钠或柠檬酸钠为碳源,以阿特拉津为唯一氮源生长,将阿特拉津完全矿化.PCR分析表明,SG1菌株含有阿特拉津降解基因atzA、atzB、atzC和trzD.生物降解实验表明,与模式菌株Pseudomonas sp.ADP不同,额外加入氮源NH4Cl或KNO3,并不影响SG1菌株对阿特拉津的降解,30℃震荡培养16 h后阿特拉津降解率在98%以上,这一特性使其成为应用于阿特拉津污染土壤生物修复的优良候选菌株.     

一株耐镍寡养单胞菌的分离及鉴定

从福建某五金厂综合污水中筛选到一株对Ni2+耐受性400 mg/L的菌株,对其形态学、16S r DNA序列及生理生化特征进行分析,并利用较佳生长条件对所得菌株进行Ni2+吸附验证.结果表明:该菌为革兰氏阴性杆菌,在牛肉膏蛋白胨培养基上形成的菌落,表面较光滑,边缘整齐;经16S r DNA序列比对及生理生化特征的分析,将菌株JMUZJ-1鉴定为寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.);菌株JMUZJ-1生长的较好条件是p H 7.0,温度30℃,Na Cl质量分数0.5%,在该条件下,菌株对Ni2+表现出良好的吸附性能.     

肝素酶产生菌的筛选及其粗酶性质的研究

肝素酶 (ＥＣ4 .2 .2 .7)是一类能降解肝素类物质的裂解酶 .自Ｋｏｒｎ等在肝素黄杆菌 (Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｈｅｐａｒｉｎｕｍ)中发现了肝素酶以来 ,肝素黄杆菌一直是肝素酶的主要来源 .目前的研究表明 ,肝素黄杆菌中有3种肝素酶 :肝素酶Ｉ[1,2 ] 、肝素酶ＩＩ[3] 和肝素酶ＩＩＩ[4 ] .在它们的共同作用下 ,肝素酶能特异性地断裂肝素链上的特定序列 ,从而产生一系列寡糖片段 .肝素酶具有许多重要的医药用途 ,包括体外循环中肝素的消除[5] ,肝素精确结构的确定[6 ] ,肝素抗凝机理及肝素结构和功能的研究[7,8] ,制备低分子量肝素[9…     

一株海洋新鞘氨醇杆菌phe-8(Novosphingobium sp.)的PAHs降解基因和降解特性

以菲为唯一碳源和能源从厦门近海海水样品中筛选到一株能够降解多种PAHs的细菌.16S rDNA序列同源性分析表明它可能属于新鞘氨醇杆菌属(Novosphingobium sp.).根据已经报道的PAHs起始双加氧酶大亚基基因序列,设计了一对简并引物,并PCR扩增得到了约700 bp的基因片段.比对结果显示它同已报导的一株降解菌Novosphingobium aromaticivorans F199质粒上的bphA1f基因相似度最高,达到98.26%,该基因编码的蛋白推断是萘或联苯双加氧酶大亚基.以PCR产物为模板制备DNA探针, Southern杂交表明:该基因位于其质粒DNA上.采用气相色谱-质谱联用测定了该菌的降解率,发现它可以高效降解多种高分子量PAHs.     

抗真菌菌株JW-725的分离、鉴定及发酵产物性质的初步分析

JW-725茵株是从西藏类鸟齐协马山口高山草甸的土壤中分离得到的一株细菌，经初步鉴定为多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)，该菌株的发酵液经抗茵谱分析具很强的抗真菌活性，尤其是对柑橘青霉菌(Penicillium italicum)的抗性很高，且对革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)也有一定的抗性作用。     

脂肪酶产生菌的筛选及基因的克隆表达

目的筛选出脂肪酶活性较高菌株,通过脂肪酶基因克隆技术获得高表达的脂肪酶,根据酶活曲线确定该酶的最适温度和最适pH.方法采用透明圈法,以三丁酸甘油酯为底物筛选脂肪酶活性较高菌株;通过PCR扩增获得其脂肪酶基因Pseudomonas peli(PP)序列,构建pET-28 a表达载体,并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行异源表达;通过Ni柱将脂肪酶纯化,并根据酶活曲线确定该酶的最适温度和最适pH.结果筛选到一株脂肪酶活性较高的菌株,16S rRNA基因序列比对结果初步鉴定为Pseudomonas peli.PCR扩增得到的基因片段长度为801 bp,其序列与Pseudomonas peli中的脂肪酶基因序列相似性达到100%,PP基因在大肠杆菌中异源表达蛋白的分子量约29 KD,该蛋白在55℃、pH 7.0时活性最高.结论通过基因克隆表达后得到的脂肪酶Ni柱纯化后纯度达95%以上,且耐高温,为脂肪酶工业化应用奠定了基础.     

一株鸭源恶臭假单胞菌16S rDNA的序列测定与分析

从病鸭翅静脉无菌采集抗凝血,直接镜检和姬姆萨染色镜检,微生物感染呈阳性．从血液中分离出该微生物,用细菌16SrDNA通用引物扩增出约1500bp的条带,经DNA测序得到一条长1499bp的16SrDNA序列,与GeneBank已提交的序列进行BLAST相似性搜索表明该微生物应归属于假单胞菌属（Pseudomonas）,并用DNAStar进行同源性分析并构建系统进化树,显示与恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）同源性最近,首次发现恶臭假单胞菌可能感染家鸭．