2个由HSVⅠ诱导的人成纤维细胞EST差异表达基因的SAGE分析

 对单纯疱疹病毒Ⅰ型感染KMB-17细胞后的基因反应所克隆得到2个未知功能新基因片段HSP-5和HSP-7进行了初步探讨,运用电子SAGE分析和组织表达分析,表明HSP-5和HSP-7基因和肿瘤组织具有一定的相关性,且在KMB-17细胞刺激2h的细胞中的表达及癌组织中表达均大于对照细胞,显示出HSP-5和HSP-7与HSVⅠ病毒刺激,以及肿瘤组织均有着一定的相互关系.     

激活素受体相互作用蛋白2a的全长基因克隆及其与ActRIIA的相互作用

为了研究激活素受体介导的信号传导调控机制,从小鼠脑cDNA文库中克隆了新的激活素受体相互作用蛋白2a(ARIP2a)全长基因;并通过序列分析与已发现的ARIP2进行了同源性比较;用RT-PCR方法检测了小鼠ARIP2a及ARIP2 mRNA的组织分布以及激活素刺激RAW264．7细胞后ARIP2a及ARIP2 mRNA表达的差异;同时应用哺乳细胞双杂交、Pull-down实验分析了ARIP2a和激活素IIA型受体(ActRIIA)的相互作用．结果表明,克隆的ARIP2a基因全长1008bp,编码153个氨基酸残基,与ARIP2编码蛋白仅第99位氨基酸不同;ARIP2a mRNA在大脑、垂体、睾丸中表达较高,胰腺、卵巢组织中表达较弱,而在其他组织中未见表达;ARIP2 mRNA则在多种组织内均有表达．激活素刺激RAW264．7细胞后ARIP2a mRNA表达明显降低,而ARIP2 mRNA表达升高．哺乳细胞双杂交和Pull—down实验均证实ARIP2a可与ActR II A相互作用．上述结果提示ARIP2a与ARIP2在组织学分布以及对激活素应答上均存在差异,两者属于ARIP2同源分子．ARIP2a属于ARIP家族新成员,同样可与激活素Ⅱ型受体相互作用．     

低氧通过HIF-2α诱导CCNE2表达的初步研究

低氧是肿瘤发生侵袭转移必经的过程之一,它促进了肿瘤致癌基因的表达,从而使肿瘤细胞发生远处转移.低氧环境对于调节肿瘤的EMT过程具有重要作用,刺激肿瘤的恶化和转移,也可促进血管激活因子的表达从而促进肿瘤血管的形成.CCNE2作为调节细胞周期的关键基因,在肿瘤发生和转移过程中的作用已经得到广泛研究,在多种癌细胞中都发现CCNE2蛋白是高表达的.为此在MCF-7细胞中通过一系列的实验证明了CCNE2是一个新的低氧靶基因,并证明了低氧通过刺激HIF-2α促进了CCNE2的表达.     

低氧通过HIF-2α诱导CCNE2表达的初步研究

低氧是肿瘤发生侵袭转移必经的过程之一,它促进了肿瘤致癌基因的表达,从而使肿瘤细胞发生远处转移.低氧环境对于调节肿瘤的EMT过程具有重要作用,刺激肿瘤的恶化和转移,也可促进血管激活因子的表达从而促进肿瘤血管的形成.CCNE2作为调节细胞周期的关键基因,在肿瘤发生和转移过程中的作用已经得到广泛研究,在多种癌细胞中都发现CCNE2蛋白是高表达的.为此在MCF-7细胞中通过一系列的实验证明了CCNE2是一个新的低氧靶基因,并证明了低氧通过刺激HIF-2α促进了CCNE2的表达.     

菠菜抗坏血酸过氧化物酶基因家族的鉴定及表达分析

利用生物信息学分析方法,在菠菜全基因组中鉴定出了菠菜(Spinacia oleracea)抗坏血酸过氧化物酶(APX)家族成员,并对其理化性质、亚细胞定位、基因结构、保守基序、同源关系及基因表达进行了分析,发现菠菜中存在7个SoAPXs(SoAPX1～7)基因,并通过进化树分析将菠菜APX家族分为4类.基因结构分析发现该家族基因由5～9个外显子构成.亚细胞定位预测表明大部分菠菜APX蛋白定位在细胞质.实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)结果表明:SoAPXs在各个组织器官中呈组成型表达,其中SoAPX1和SoAPX3的组织表达模式相似,SoAPX4和SoAPX5相似,SoAPX2在新叶中表达最高,SoAPX7在雄花中表达最高.对经胁迫处理后的样品进行表达分析发现,低温胁迫与氧化胁迫对SoAPXs的表达均有诱导作用,盐胁迫与干旱胁迫也刺激了大部分SoAPXs的表达.这些结果表明:SoAPXs可能在菠菜的抗盐、耐寒、抗旱以及抗氧化过程中起作用,为后续深入鉴定APX家族成员的功能提供参考.     

发育调控基因Pax5 mRNA在膀胱癌中的表达及意义

了解发育调控基因Pax5在膀胱肿瘤中的表达,探讨其在膀胱肿瘤发生发展中的作用,采用逆转录PCR（RT－PCR）和Southern杂交方法检测13例膀胱移行细胞癌（TCC）组织、4例癌旁组织、3例正常组织和3种癌细胞系（膀胱移行细胞癌、结肠腺癌、肺癌）中Pax5mRNA的表达。结果显示,3种癌细胞系中均有Pax5mRNA表达;13例膀胱肿瘤组织和4例癌旁组织中Pax5mRNA阳性表达分别为10例和3例,阳性率为77％和75％。3例正常组织中仅有1例检出Pax5mRNA表达。Pax5基因在膀胱肿瘤组织中的表达提示Pax5调控通路可能在膀胱肿瘤发生发展中具有重要作用。     

PPP2R5C转录本在正常人和血液肿瘤病人中的分布情况

目的:建立分析不同PPP2R5C转录本检测方法,分析正常人和血液肿瘤病人中5种PPP2R5C基因转录本的表达特点.方法:根据PPP2R5C基因的结构特点,设计4对引物,利用RT-PCR方法分析9例正常人、7例T细胞-非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)、11例B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)和8例急性髓细胞白血病(AML)病人外周血单个核细胞(PBMC)中PPP2R5C基因的表达情况.结果:所设计的4对引物,均可在样本中扩增到预期PCR产物,其中第1对引物可扩增两个不同大小PCR产物(包含12+13+14外显子的大片段及仅含12+14外显子的小片段),而另3对对引物所扩增的产物分别为10+11+12+12a外显子,Ⅲ+2外显子和Ⅳ+2外显子的基因片段,所有PCR产物均通过核苷酸序列分析证实.结果显示所有样本均表达全部PPP2R5C转录本.结论:初步建立区分不同PPP2R5C转录本的方法,各转录本在正常人和不同血液肿瘤病人中的分布情况基本一致.     

人类逆转录病毒的长末段重复序列（VRTVLTR）的表达与肺癌转移的关系

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一。肿瘤癌很容易发生转移。实验以17例肺癌（5例肺腺癌、1例腺鳞癌、7例肺鳞癌及4例小细胞末分化癌）的原发灶、癌旁正常组织及转移淋巴结为材料,采用PCR及非放射性标记的RNA斑点杂交分析LTR在基因组的存在及其表达情况。研究结果发现：LTR序列在17例肺癌病人的正常组织及肿瘤组织的基因组中普遍存在,LTR致肺癌转移与其插入基因组中无关;LTR致肺癌转移与其表达增高有关,而且其高表达与小细胞肺癌的转移无关,而与非小细胞肺癌的转移密切相关。提示LTR参与了非小细胞肺癌的转移过程。实验结果为从细胞系获得的结论提供了进一步的证据。     

SPATA12基因在多种肿瘤中的组织芯片表达谱分析

为了检测生精相关基因SPATA12在多种肿瘤组织中的表达及其与临床病理特征的关系,采用数字虚拟Northern方法分析SPATA12在41种正常组织及其相应肿瘤组织中的表达丰度;利用组织芯片技术结合原位杂交的方法,对96例多器官肿瘤组织芯片和208例肺肿瘤组织芯片样本中SPATA12基因的表达情况进行检测.虚拟Northern结果显示,SPATA12主要表达于正常睾丸组织以及少部分肺癌组织中.组织芯片原位杂交结果显示,SPATA12在多种肿瘤组织中表达频率不一,主要在皮肤恶性黑色素瘤、前列腺癌及前列腺慢性炎症组织、胃癌、结肠癌、甲状腺乳头状癌等肿瘤组织中高表达;在肺肿瘤组织中,SPATA12主要表达于非小细胞肺癌,其中在腺癌、鳞癌、类癌和大细胞癌组织的阳性表达率分别为16.13%,29.17%,30%和100%.SPATA12的阳性表达率与肺癌不同病理类型相关(P<0.01),而与年龄、性别以及临床分级无关(P>0.05).SPATA12基因具有肿瘤-睾丸抗原的组织表达谱特点,其阳性表达与肺肿瘤组织的不同病理类型存在明显的相关性,对肺肿瘤的分子分型有一定的参考价值.     

仿刺参硫氧还蛋白基因在灿烂弧菌和鳗弧菌刺激下的应激表达特征

分别用灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和鳗弧菌(V.anguillarum)对仿刺参(Apostichopus japonicus)进行注射感染试验,取注射后0、3、6、9、12、24 h的仿刺参体壁、肠道、呼吸树、触手和体腔细胞5种组织或细胞进行了实时荧光定量PCR检测,分析硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因在这5种组织或细胞中的表达特征,探讨了硫氧还蛋白在仿刺参先天免疫中的作用。结果显示,Trx基因在仿刺参体壁、肠道、触手、呼吸树及体腔细胞中均表达;在灿烂弧菌刺激下各组织或细胞中Trx基因变化趋势相似,呈现一种"突增-下降-再突增"的双峰型模式;鳗弧菌刺激下Trx基因表达量变化同样呈现先升高后降低的趋势,但与灿烂弧菌组相比反应时间与上调幅度都不同。总而言之,Trx基因在仿刺参体内有组成型和诱导型两种表达模式,并存在表达的组织特异性和病原特异性;Trx基因参与了仿刺参对病原感染的免疫应答,使机体免受氧化胁迫,在抵御外界病原入侵、维持胞内氧化还原状态方面起到重要作用。