7号淀粉酶链霉菌M1033菌株产分泌型的葡萄糖异构酶

<正>山东省食品发酵工业研究设计院贺家明等人经过诱变筛选获得了一株葡萄糖异构酶(Glucos Isomerase，简称Gl)高产的链霉菌     

链霉菌M1033同源重组葡萄糖异构酶缺陷型菌株的构建

为实现有工业生产价值的葡萄糖异构酶双突变体酶ＧＩ（Ｇ１３８Ｐ－Ｇ２４７Ｄ）的稳定高效表达,在建立７号淀粉酶链霉菌Ｍ１０３３原生质体转化条件的基础上,构建了含６００ｂｐ不完整ＧＩ（Ｇ１３８Ｐ－Ｇ２４７Ｄ）结构基因片段的插入型同源重组质粒ｐＸＷ,并通过同源重组模式整合到Ｍ１０３３的染色体上,实现了ＧＩ基因的破坏（ｇｅｎｅ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ）,获得了同源重组葡萄糖异构酶缺陷型菌株。对同源重组片段的分     

链霉菌M1033葡萄糖异构酶单晶培养及其初步分析

葡萄糖异构酶(EC 5.3.15)可催化葡萄糖到果糖的异构化反应,在果葡糖浆工业生产中有广泛的应用.人们对不同种属来源的葡萄糖异构酶进行了晶体学研究(见表1).虽然源于Streptomyces rubiginosus(简称STRPR)的葡萄糖异构酶与源于Streptomyces olivochromo-     

阿维链霉菌种内原生质体融合选育仅产阿维菌素B的高产菌株

在阿维菌素的8个组分中, B1组分具有最高的杀虫活性, 且毒性最小, 被广泛应用于农业和畜牧业生产. 本研究对两株阿维链霉菌(阿维菌素高产菌株76-05和仅产阿维菌素B不产寡霉素的基因工程菌73-12)进行了种内原生质体融合, 用以选育仅产阿维菌素B不产寡霉素的高产菌株, 获得了两株具有双亲优点的重组菌株F23和F29. 两重组菌侏均只产阿维菌素B组分不产寡霉素, 而且阿维菌素的产量有很大的提高, 分别是亲本菌株76-05产量的84.20%和103.45%, 是亲本菌株73-12的2.66和3.50倍. F23和F29均为遗传稳定的原养型菌株, 与亲本菌株高产菌株76-05相比, F29对发酵条件比较宽容. F23和F29高产阿维菌素B不产阿维菌素的其他组分和寡霉素的特性有利于阿维菌素的生产, 而菌株F29对发酵条件相当宽容更有利于其在工业生产中的应用.     

N-糖基化引起葡萄糖淀粉酶不同型的差异

红曲霉葡萄糖淀粉酶具有多型性,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上有5条蛋白带(E_1——E_5) E_3,E_4,和E_5均为糖蛋白,含糖量分别为7%和9%.用ConA-Sephafose分高纯化红曲霉葡萄糖淀粉酶时,被α-甲基D-葡萄糖苷依亲和力由小到大的顺序将E_3,E_4和E_5洗脱下来,也说明他们的含糖量E_5>E_4>E_3.糖肽之间的连结方式除O-糖苷键外,还有N-糖苷键、我们试图用内切或外切糖昔酶切去糖链,以查明糖基化对多型性的影响.     

圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成基因sanB的克隆、结构和功能

从圈卷产色链霉菌７１００中克隆到６ｋｂ与尼可霉素合成有关的ＤＮＡ片段,对其中的部分片段进行了序列分析,其中１．９ｋｂ的Ｔｔｈ１１１Ⅰ片段含有一个１７４０ｂｐ的完整可读框,起始密码子为１００ｂｐ处的ＧＴＧ,终止密码子为１８４０ｂｐ处的ＴＧＡ,编码一个由５８０个氨基酸残基组成的蛋白质。     

细菌Ⅱ型分泌途径控制产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes) S2中卵磷脂酶的分泌

从水稻根际分离筛选出1株降解卵磷脂的有机磷降解细菌菌株S2, 通过形态指标、生理生化性状、16S rDNA序列、(G+C)含量以及DNA-DNA杂交分析, 鉴定为产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes). 采用双亲接合的方法将带有Tn5转座子的质粒导入产碱假单胞菌S2菌株中进行转座子插入诱变, 从5000个卡那霉素抗性的Tn5插入突变株中, 筛选到3株丧失解磷能力的突变株(M808, M1329和M1400)和1株解磷能力增强的突变株(M20). 对Tn5插入位点的基因进行DNA测序表明, 丧失解磷能力突变株中被突变的基因分别是xcpS, xcpX和xcpW, 它们分别编码XcpS, XcpX和XcpW蛋白, 这些蛋白是细菌Ⅱ型分泌途径中的主要成分. 将xcpS, xcpX和xcpW基因分别构建在pLAFR3载体上, 通过双亲接合的方式分别导入上述M808, M1329和M1400三个丧失解磷能力突变株中进行功能互补实验, 结果表明这3个基因都能使各自相对应的突变株恢复解磷能力. 以上结果表明, 在产碱假单胞菌中卵磷脂酶的分泌是通过Ⅱ型分泌途径来完成的. 解磷能力的丧失可能是由于Tn5插入xcp基因簇中的某一基因破坏了卵磷脂酶向胞外的分泌, 造成突变株不能降解有机磷. 在解磷能力增强突变株M20中, 被突变的基因与铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) PAO1中的chpA基因(参与细菌的颤动)同源性达88%.