绿豆凝集素的分离纯化和若干性质的研究

以猪甲状腺球蛋白—ABSE—交联琼脂为亲和吸附剂,通过比较简便而经济的方法,对绿豆外源凝集素进行了纯化。所获得的外源凝集素在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示一条蛋白带,其亚基分子量约为40,000。此外源凝集素对半乳糖和木糖有相当强的专一性。对此外源凝集素的某些其它性质进行了研究。     

川中南星(Arisaema wilsonii Engl)凝集素的纯化及其部份性质的研究

用猪甲状腺球蛋白一对氨基苯砜乙基一交联琼脂作亲和吸附剂,从川中南星的块茎中分离得到一种凝集素.其亲和层析样品,经碱性聚丙烯酰胺凝胶连续电泳显示为两条带,分子量分别为24,000和11000,前者为糖蛋白.氨基酸分析表明含硫氨基酸甚少。对兔红细胞的凝集下限为,2μg/ml,不凝集人A、B、O血型的红血球.其凝集活性受D-GalNAc的抑制.它能促使人外周血淋巴细胞有丝分裂。具较强的抗热性.体外实验对人肝癌细胞有抑制趋势.     

分离纯化猪甲状腺球蛋白的简便方法

应用硫酸铵分级沉淀,经两次Scphadcx G-100凝胶过滤,从猪甲腺中获得较纯的甲状腺球蛋白。纯化的甲状腺球蛋白经生物活性测定和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,结果与标准的猪甲状腺球蛋白性质相一致。     

雪山豆(Phaseolus sp.)凝集素的纯化与其部分性质

本文报导从雪山豆种子中分离纯化凝集素与其部分性质.种子磨粉、浸取,经硫酸铵分级,再以Sephadex G—150疑胶过滤纯化而得.所得样品经聚丙烯酰胺盘状电泳鉴定,为单一蛋白带.以糖蛋白染色法鉴定,该凝集素为糖蛋白。它具有凝集动物红细胞和促淋巴细胞有丝分裂的活性.     

甘薯品种岩8-6凝集素的分离纯化及其性质

甘薯品种岩8－6的叶片组织依次经硫酸铵分级沉淀,甲壳素亲和层析及Sephadex G-75分离纯化得到一种凝集素（IPomoea Batatas Lectin,简称IBL）,纯化的IBL电泳显示一条蛋白质着色带,IBL的亚基相对分子质量为47000,IBL对兔红细胞有凝集作用,凝血活性可被D－果糖明显抑制,IBL对热不稳定,加热到70度时,活性完全丧失,IBL对碱敏感,IBL含有16种氨基酸,富含Asp和Glu,中性糖含量为5．07％。     

象鼻南星(Arisaema elephas S.Buchet)凝集素的分离纯化及部分性质研究

本文用Sepharose 4B交联鸡卵类粘蛋白亲和层析柱,从天南星科植物象鼻南星(Arisaema elephas S.Buchet)中,纯化出一种具有凝集红细胞活性的糖蛋白.分子量约13,500道尔顿;等电点pH4.5;含糖量约10％.测得肽链N-末端为L-丙氨酸,并对其氨基酸组成进行了分析.象鼻南星凝集素(AEL)能选择性地凝集人的O型红细胞,及鸽、兔、小鼠、马和熊猫等动物的红细胞,但不凝集人的其它血型及鱼、蛙、龟等动物的红细胞.AEL具有光淋巴细胞转化的功能.能凝集人和某些动物的精子.通过FITC荧促标记,初步观察了AEL受体性精子表面的分布.     

外源凝集素的应用(综述摘要)

外源凝集素是一种具有多种生物活性的蛋白质。1888年Stillmak首先从蓖麻籽中获得毒性大且能凝集人和动物红细胞的蛋白,称蓖麻蛋白。以后陆续自3000多种植物中找出了1000多种含有凝集素的植物,这种凝集素还从无脊椎动物及低等脊椎动物中提取得到。由于外源凝集素能特异地与细胞膜上糖     

单抗亲和纯促卵泡激素（FSH）的制备及其特性研究

采用细胞杂交技术生产出抗猪促卵泡激素(pFSH)的单克隆抗体,以其中的AF05单克隆抗体(亲和力常数K=(1.14±0.28)×10~(-9)M)制作成单抗免疫亲和层析柱。以简便快速的一步纯化法从猪垂体浸出液中提取出高纯度pFSH。经小鼠卵巢增重法测定,该pFSH的生物学活性在30Armour单位/mg蛋白以上;聚丙烯酰胺凝胶电泳(pAGE)结果显示,该pF-SH的纯度超过美国Schering公司的pFSH产品。     

鼠肾纤维蛋白溶酶原激活酶的纯化和部分鉴定

采用肝素—Sepharose亲和层析和凝胶过滤自鼠肾提取纤维蛋白溶酶原激活酶,产率5.1×10~(-5)％。在还原和非还原状态下SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳及电泳酶谱分析均呈单一区带,证实产物仍保持单链状态。测得其分子量为70000。纤维平板试验和无纤维蛋白溶酶原纤维平板试验证实其活性依赖于纤维蛋白溶酶原。     

蓖麻毒蛋白提取过程条件优化

以蓖麻毒蛋白为研究对象,对其提取过程进行优化.采用硫酸铵沉淀,聚乙二醇包埋透析,分子筛层析和亲和层析等处理,从去壳蓖麻籽中分离纯化得到蓖麻毒蛋白,结果得到最优的体系为,高速冰冻离心过滤,聚乙二醇包埋透析,100ml缓冲液A冰浴匀浆,并在SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈32kDa和34kDa两条蛋白带,证明蓖麻毒蛋白已被纯化均一.     

菠萝焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶的分离纯化及性质研究

应用硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素、Sephadex G-200、磷酸纤维素柱层析分离纯化了菠萝叶片焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶(PFP).凝胶过滤和非变性聚丙烯酰胺梯度电泳测定酶的分子量为132kD和140kD,SDS-聚丙烯酰胺电泳分析得到一条分子量为66kD的蛋白主带,表明该酶可能是由同种亚基组成的二聚体.此外,还对该酶的部分酶学性质进行了初步研究.     

黑曲霉(UV—11)葡葡糖淀粉酶的分离纯化和酶的多型性性质的初步研究

以黑曲霉UV—11的工业酶制剂为材料,分离纯化葡萄糖淀粉酶。蒸馏水抽提,硫酸铵盐析,凝胶过滤脱盐和DEAE一纤维素DE_(52)柱层析,得到4个部分(峰Ⅰ—Ⅳ),4个部份提纯0.92—1.84倍,酶活收率为26.6％。黑曲霉UV—11葡萄糖淀粉酶具有多型性,经聚丙烯酰胺凝胶水平板电泳共分出5条区带。粗酶和纯化的酶经电泳染色结果表明黑曲霉UV—11葡萄糖淀粉酶为一种糖蛋白。     

Phaseolus lunatus Linn vel aff的种子中A型血专一性凝集素的研究

用亲和层析法从Phaseolus lunatus Linn vel aff的种子中纯化出一种对人类A型血专一的凝集素.该凝集素的粗浸提液都只对A型血细胞凝集,而对B、O型绝不凝集.当纯化的凝集素浓度为0.98μg/mL时,即能凝集A型血细胞,GalNAc、对硝基苯酚-β-D-吡喃半乳糖苷能抑制其凝集作用;酚—硫酸法测得凝集素含有3.8％的中性糖;该凝集素是一个促有丝分裂原,其细胞转化为67.9％;它的分子量为56500,有两种亚基,分子量分别为17200和14600.凝集素分子中亮氨酸和缬氨酸含量较高,分别为9.83和9.64,而酸性氨基酸含量远比碱性氨基酸为高.     

野花生豆凝集素半胱氨酸残基的研究

将野花生豆经浸取、硫酸铵分级沉淀、猪胃粘蛋白-Sepharose4B亲和层析和SephacrylS-200HR分子筛层析后,可得到对人类A型血专一凝集的野花生豆凝集素（Crotalaria mucronata Lectin,CML),纯化的CML在PAGE和SDS-PAGE中均显示单一蛋白带,在含8mol/L,脲和不含脲的缓冲体系中,分别用NEM修饰CML中的半胱氨酸残基,经计算被修饰巯基数目分别为3.1个和3.2个,且修饰后的CML的活性仍不丧失,通过NR/R单向SDS-PAGE和NR/R双向对角线SDS-PAGE研究,发现CML不含二硫键,表明CML中的半胱氨酸残基既与CML的凝集活性无关,也不形成稳定蛋白质结构的二硫键。     

Purification of mouse interferon by sequential affinity chromatography on poly(U)--and antibody--agarose columns.

Mouse interferon has been purified to homogeneity by twostep affinity chromatography. Two polypeptide bands were obtained on sodium dodecyl sulphate--polyacrylamide gel electrophoresis migrating at molecular weights 35,000 and 22,000, both having antiviral activity. The 35,000 but not the 22,000 band, also stained with periodic acid--Schiff. The specific activity was 8 X 10(9) of our laboratory units, corresponding to 2.4 X 10(9) NIH reference units.     

人参中蛋白质的分离纯化

以长白山人参为原料， 用盐溶液抽提、盐析、超过滤、离子交换层析及亲和层析分离纯化出一种人参蛋白质， 经 Ｓ Ｄ Ｓ聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定其纯度为一条带， 并测定其分子量在１４ ０００～１６ ０００ 之间．     

蕲蛇蛇毒中凝血酶样酶的分离纯化与特性

蕲蛇粗毒经DEAE -SephadexA - 5 0、POROS 5 0HS及TSKG30 0 0SW分离纯化 ,得到 1个具有凝血酶活力的峰 .该峰经SDS -PAGE和PAGE检测均为一条带 ,分子量约 2 8.0kDa ,加DTT处理后 ,拆分为约 14.8kDa的亚基 .其凝血酶活力为 14.7NIHu/mg ,精氨酸酯酶活力为 2 1.98TAMEμmol/mg·min .该组分具有激活因子ⅩⅢ的活性 ,但没有明显的出血反应 .肝素不影响该组分的凝血酶和精氨酸酯酶活性 ,EDTA、PMSF、DFP则会产生不可逆抑制作用 ,表明该组分属于金属蛋白 .     

Separation and Purification of Thrombin-like Enzymes by Affinity Adsorbents

An affinity adsorbent, benzamidineSepharose 4B, was used to separate and purify thrombinlike enzymes. The paminobenzamidine as a specific ligand was coupled to the matrix-Sepharose 4B. The recombinant thrombinlike enzyme-defibrase was used as a model in order to evaluate the efficiency of this biospecific affinity adsorbent. The homogeneity of the enzyme preparation was comfirmed as one band on sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis.     

柔嫩艾美耳球虫地克珠利与马杜霉素耐药株的3种同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对柔嫩艾美耳球虫(E imeria tenella)药物敏感株、地克珠利耐药株、马杜霉素耐药株以及2个耐药株重组体的乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸葡萄糖异构酶(GPI)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)同工酶进行了分析.结果显示:在LDH同工酶谱中,敏感株有一条浓带,3株耐药株均没有酶带;在GPI同工酶谱中,敏感株有4条带,地克珠利耐药株有GPI-2和GPI-4,而马杜霉素耐药株和重组体均含有GPI-2、GPI-3和GPI-4;在G6PD同工酶谱中,敏感株有4条带,而3株耐药株均只有G6PD-3和G6PD-4.同工酶分析表明,药物敏感株与3株耐药株之间的3种同工酶均有差异.3株耐药株之间的GPI存在差异,而在LDH和G6PD无差异.