一种基于Propidium Monoazide与PCR结合的选择性检测细菌活细胞的方法

建立了一种PMA与PCR结合的细菌活细胞检测的方法,可有效抑制微生物死细胞DNA的PCR扩增,从而排除死细胞对微生物活细胞检测的影响．结果表明,PMA浓度大于3 μg/ml时可抑制死细胞DNA的PCR扩增,PMA浓度高达50 μg/ml时仍不影响活细胞DNA的PCR扩增;并且得出曝光时间大于3 min可使PMA与死细胞DNA分子共价交联,抑制其PCR扩增;浊度影响PMA交联的结果表明浊度小于10 NTU时,PMA仍能有效地抑制死细胞DNA的PCR扩增,而当浊度大于100 NTU时,PMA失去效果．     

PMA-qPCR快速检测结核活菌方法的建立

为建立快速鉴别诊断结核活/死菌的方法,本研究应用PMA染料与实时定量PCR技术结合(PMA-qPCR),以结核标准株16 sRNA基因为靶基因,PMA对样品基因组提取物进行处理,PMA能够与死细胞DNA分子共价交联并抑制DNA分子扩增。结果显示:PMA浓度在3μg/mL,曝光时间大于15 min时,PMA既不影响活菌的的扩增,又能有效抑制死菌的扩增;当PMA浓度大于20μg/mL时,PMA影响活菌DNA的扩增;PMA-qPCR技术能够定量不同比例的结核活/死菌悬液中的活菌。结论:PMA-qPCR技术能够快速准确检测出结核杆菌中的活细胞。     

用AFM对质粒DNA在云母表面的自组装研究

通过原子力显微镜(AFM)对在云母表面上自然挥干的不同质量浓度的质粒DNA分子进行扫描，原子力显微镜图像显示：当质量浓度为0．1μg／mL时，DNA分子呈现出线性结构，随着质量浓度加大至1μg／mL，DNA分子相互缠绕为网状结构，质量浓度为10μg/mL时，呈现出具有典型的聚合形态，当质量浓度进一步加大到100μg／mL，则呈现出明显的树状脉络结构．通过原子力显微镜对质粒DNA分子的形态表征，可以看出质粒DNA分子具有典型的自组装的特性．     

饮用水紫外线消毒及细菌暗复活研究

目的研究浊度、紫外线强度和水力停留时间对紫外线消毒效果及消毒后水体中细菌暗复活的影响.方法以广州市西江水为原水,经过混凝、沉淀、过滤后进入紫外消毒器,在不同浊度值、紫外线强度和水力停留时间下,分析紫外线消毒效果及消毒后细菌暗复活.结果浊度为0～1.0 NTU、紫外线强度3 126μW/cm~2、水力停留时间1 200 s时消毒效果达到100%;当浊度在0～1.0 NTU时,浊度越大,细菌暗复活速率越快;当浊度1.0 NTU时,浊度对细菌暗复活影响不明显.结论浊度、紫外线强度、水力停留时间对紫外线消毒效果的影响大小依次为:紫外线强度,浊度,水力停留时间;增加紫外强度或水力停留时间能抑制细菌暗复活,而增加浊度会增强细菌暗复活.     

儿茶素、槲皮素和葡萄籽原花青素的协同抗辐射作用

通过建立体外AHH-1淋巴细胞辐射损伤模型,研究儿茶素、槲皮素和葡萄籽原花青素之间的协同抗辐射作用.结果表明:当儿茶素质量浓度为10μg/mL和槲皮素质量浓度为5μg/mL时,儿茶素质量浓度为10μg/mL和原花青素质量浓度为15、25、30μg/mL时,槲皮素质量浓度为5μg/mL和原花青素质量浓度为25μg/mL时,槲皮素质量浓度为10μg/mL和原花青素质量浓度为20、25μg/mL时,两物质间皆具有协同抗辐射作用.当儿茶素质量浓度为10μg/mL时,槲皮素质量浓度为15、20μg/mL以及原花青素质量浓度为10、20μg/mL时,儿茶素分别与槲皮素、原花青素存在拮抗作用.当槲皮素质量浓度为5μg/mL和原花青素质量浓度为20μg/mL时,当槲皮素质量浓度为10μg/mL和原花青素质量浓度为15μg/mL时,当槲皮素质量浓度为15μg/mL和原花青素质量浓度为15、20、25μg/mL时,原花青素与槲皮素皆存在拮抗作用.因此,在适量浓度范围内儿茶素、槲皮素和原花青素之间具有协同、拮抗抗辐射作用,这一研究发现对开发抗辐射功能食品具有指导意义.     

纳米银颗粒增强聚合酶链式反应长片段DNA反复扩增的特异性

基因操作者经常需要把数量稀少的DNA样品进行反复扩增以供进一步研究之用.在反复扩增过程中,上一次扩增产物当作下一次扩增的模板使用.对于较短的DNA片段(几百个碱基),一般反复扩增不会遇到特别的困难;但是较长DNA片段(几千到几万个碱基)的反复扩增一般会极大地降低聚合酶链式反应(PCR)的特异性.实验中发现,当扩增较长片段基因时,在常规PCR热循环体系中添加粒径平均为70 nm的银颗粒,使反应体系纳米银颗粒浓度达到0.1～1.2μg/μL,可以在一定程度上保持PCR反复扩增反应的特异性.其机理之一可能是常规PCR反应体系在添加了纳米银颗粒后改善了溶液的导热性能.     

铁棍山药多糖对PC12及Hepa1-6细胞在体外增殖的影响

采取闪式提取法从铁棍山药中提取山药多糖,利用胰蛋白酶去除多糖中的杂蛋白,冷冻干燥获得山药多糖制品.分别以10μg/mL、100μg/mL、500μg/mL、1 000μg/mL浓度添加于生长良好的PC12及Hepa1-6细胞中,再分别二次培养12h、24h、36h,研究山药多糖在体外对PC12及Hepa1-6两种细胞增殖的影响.结果显示:在培养24h后,当山药多糖浓度为10μg/mL、100μg/mL时,对PC12细胞增殖的影响没有差异性(P>0.05),但当浓度进一步提高到500μg/mL、1 000μg/mL时,则对PC12细胞的增殖体现出显著影响(P<0.05);对于Hepa1-6,在培养12h且山药多糖浓度在10μg/mL、500μg/mL时,对Hepa1-6细胞增殖的影响差异性显著(P<0.05),同时在100μg/mL浓度下,山药多糖对Hepa1-6细胞的增殖抑制更加明显(P<0.01).但当浓度达到1 000μg/mL时,对Hepa1-6细胞增殖呈现促进作用.在培养24h时,各浓度的山药多糖对Hepa1-6细胞增殖的影响均没有差异性(P>0.05).当培养36h后,在山药多糖浓度为10μg/mL、100μg/mL、500μg/mL下,统计显示对Hepa1-6细胞增殖的影响差异性显著(P<0.05).上述结果说明,山药多糖在一定的浓度范围内具有明显的抗肿瘤作用.     

荆豆(Ulex europaeus L.)凝集素Ⅰ的研究

用硫酸铵分级沉淀,当饱和度达40％时,荆豆种子中的荆豆凝集素I就被沉淀出来,再经处理,获得冻干的无盐制剂.当凝集素浓度为7.8μg/mL时,就能凝集人O型血细胞,浓度分别为125μg/mL或500μg/mL时,对人B或A型血发生凝集反应.其凝集O型血的凝集作用可被Fuc所抑制.上述制剂可通过CM—纤维素柱和Sephadex G—200柱2次分子筛过滤而纯化,此纯化的凝集素在PAGE中显示一条蛋白带,浓度为1.25μg/mL时可使O型血和牛精细胞发生凝集反应;浓度为40μg/mL或500μg/mL时,可分别使B型和A型血发生凝集反应.     

应用一体化膜处理设备处理农村微污染地表水

针对目前农村微污染地表水源水中浊度高、氨氮质量浓度高、微生物污染严重等特点,采用一体化膜处理设备处理某农村地表微污染水.结果显示,当微污染地表水源水平均浊度在22 ntu,平均氨氮质量浓度在1.05 mg/L,平均细菌总数为210 CFU/mL时;出水浊度、氨氮质量浓度、细菌总数分别为0.3 ntu、0.28 mg/L和0 CFU/mL,各项指标均达到生活饮用水水质标准(GB5749-2006).     

DPPH·法评价葡萄籽提取物淬灭自由基的方法研究

通过DPPH·法测定葡萄籽梯度提取各组分清除自由基能力的研究,结果表明,最佳活性测定样品浓度范围1.0-10μg/mL、放置时间30min、温度25℃,运用此法测得的清除率在25-80%之间,具有较高的灵敏度和准确度。样品浓度0.25-10μg/mL与活性呈正相关关系,其中从1.0-5.0μg/mL范围内有良好的线性关系。当样品用量低于25μg/mL时,样品自身的贡献微不足道,清除率按公式:IP(%)=[(Ac-Ai)/Ac]×100计算。浓度大于25μg/mL时,其结果计算必须扣除样品背景影响IP(%)=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100%,否则可能得出样品无抗氧化性或有助氧化作用的错误结论。