柱层析法纯化且人肿瘤坏死因子α及其抑瘤作用

半合成人肿瘤坏死因子ＴＮＦ－α在大肠杆菌中高表达，发酵后收集菌体经超声破碎，然后在１２０００ｒ／ｍｉｎ４℃离心１０ｍｉｎ，上清经６０℃热处理３０ｍｉｎ，离心上清用６０％饱和度的硫酸铵沉淀，再依次经过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５，ＤＥＡＥ－５２纤维素和Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－７５柱层析，得到的纯化ｒｈＴＮｆ－ａ比活性为２×１０＾７ｕ／ｍｇ，回收率为２４％，经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和ＨＰＬＣ鉴定，纯度达９５     

黑曲霉胞外葡萄糖淀粉酶的纯化及特性

黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ７２８）的粗酶液，经硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱凝胶过滤脱盐，ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换柱层析和ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－１００凝胶层析纯化，经ＰＡＧＥ鉴定为一条带ＳＤＳ凝胶电泳测定分子量为７００００．金属离子Ｆｅ３＋对该酶有一定的抑制作用，该酶的等电点为３．７，最适ｐＨ为４，最适温度为６０℃．Ｅ２８０１％为１５．７２，Ｋｍ值为０．１１２×１０－３ｍ．     

长白山白眉蝮蛇蛇毒精氨酸酯酶的荧光淬灭研究

交替使用ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘ Ａ－ ５０ 离子交换和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－ ７５ 凝胶过滤层析技术, 从长白山白眉蝮蛇蛇毒（ Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ ｂｌｏｍｈｏｆｆｉｉ Ｕｓｓｕｒｅｎｓｉｓ） 中纯化得到了一种分子量为２９４５８ ±１５Ｄａ 的精氨酸酯酶活性组分． 本文研究了碘离子（Ｉ－ ） 和丙烯酰胺（Ａｃｒ） 对这种精氨酸酯酶的荧光光谱的淬灭作用,Ｉ－ 和Ａｃｒ 对精氨酸酯酶荧光的淬灭符合Ｓｔｅｒｎ － Ｖｏｌｍｅｒ 公式． Ｉ－ 仅能淬灭精氨酸酯酶约５４ ％ 的荧光, Ａｃｒ 可以将精氨酸酯酶荧光淬灭殆尽． Ｉ－ 和Ａｃｒ 对长白山白眉蝮蛇蛇毒精氨酸酯酶荧光淬灭作用的结果表明： 在精氨酸酯酶中含有两种类型的色氨酸残基, 而且处于不同的微环境当中．     

兔角膜上皮特异性水溶性蛋白质的电泳分析

分离兔角膜上皮和皮肤表皮，提取水溶性蛋白质，采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ以及ＩＥＦ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ技术对其组成进行分析研究，发现兔角膜上皮存在５种主要特异性水溶性蛋白质，其分子量和等电点分别为：Ｍｒ６８２００，ｐＩ７．５；Ｍｒ６１７００，ｐＩ５．１；Ｍｒ５１３００，ｐＩ７．６；Ｍｒ３６３００，ｐＩ８．９和Ｍｒ２５７００，ｐＩ５．７。     

新试剂6-(2-羟基-4-二乙基氨苯偶氮)-2,3-二氢-1.4-酞嗪二酮的电化学发光研究

应用自制的ＥＣＬ－１型电致化学发光仪，对新试剂６－（２－羟基－４－二乙基氨苯偶氮）－２．３－二氢－１，４－酞嗪二酮（ＨＤＥＡ）在Ｎａ２ＣＯ３－ＮａＨＣＯ３缓冲介质中的电化学发光行为作了研究．结果发现，当介质ｐＨ值为 １０．５４时，在一定的实验条件下，施加 １．７Ｖ （ＶＳ．ＳＣＥ）三角波脉冲电压，体系的发光强度与ＨＤＥＡ浓度在５．０ × １０－９～１．０×１０－６ｍｏｌ／Ｌ范围内呈线性关系，反应的检测限达１．０×１０－９ｍｏｌ／Ｌ．     

猪心肌细胞质苹果酸脱氢酶的制备

用匀浆提取，９０％硫酸铵沉淀和ＣＭ－纤维素、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｂｅｘＡ－５０、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析的方法从猪心肌中分离纯化了细胞质苹果酸脱氨酶。酶制品达到了ＩＦＣＣ规定的标准。     

蛇毒神经生长因子的分离纯化及鉴定

采用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０、ＣＭ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ３２柱层析，从中华眼镜蛇中分离出神经生长因子（Ｎｅｒｖｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｅｒ，ＮＧＦ）。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法证明所得以的ＮＧＦ为单一组分，相对分子质量约为１．３×１０＾４。经凝胶等电聚焦电泳测得ＮＧＦ等电点ＰＩ约为７．０左右。经ＨＰＬＣ及电泳图像分析系统测得纯度为９８％。此ＮＧＦ等８ｄ鸡胚背     

中华眼镜蛇毒神经生长因子的研究

采用ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ和ＳｅｐｈｏｓｉｌＣ８以及ＨＰＬＣ层析方法，自广西产中华眼镜蛇毒中分离纯化神经生长因子（ＮＧＦ），此ＮＧＦ经８ｄ鸡胚背根神经节体外培养证明具有促进神经纤维生长的活性。经ＨＰＬＣ及聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一组成，经ＳＤＳＰＡＧＥ及ＨＰＬＣ测定分子量分别为２４．１ＫＤ和２４．９ＫＤ，等电聚焦电泳测得ｐＩ为８．２，氨基酸组分分析表明ＮＧＦ含酸性氨基酸较少，通过１２５｜标记ＮＧＦ测定出ＮＧＦ在生物体内主要分布于肾、肺、及周围神经     

小麦巯基蛋白酶抑制剂的纯化和性质研究

将小麦麦胚和麸皮的浸取液，经加热和利用ｐＨ沉淀，获得疏基蛋白酶抑制剂粗品；再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ柱上得到均为单一蛋白带的小麦ＣＰＩ纯品。其纯化度为原料浸液的４２倍。由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＣＰＩ分子为单一肽链     

猪脾来源的免疫抑制组分制备及其性质的初步研究

以猪脾为原料,经提取、等电点沉淀、加热变性除杂蛋白及超滤等步骤,得到了具有免疫抑制作用的组分,其中,相对分子质量〈５ｋＤ（ＳＩＳＥ－ｐ１）和５￣１０ｋＤ（ＳＩＳＥ－ｐ２）的组分具有较强的免疫抑制活性,体外试验在６．８μｇ／ｍＬ的浓度下对植物凝集素（ＰＨＡ）诱导的人处周血淋巴细胞转化的抑制率分别为５９．８％和６１．７％。用ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析对ＳＩＳＥ－ｐ１进行分离,生物活性研究表明用含０．     

枯草杆菌AS1．398制备中性蛋白酶的研究

本文研究了枯草杆菌ＡＳ１．３９８发酵培养制备中性蛋白酶，对发酵培养基配比，培养条件，金属离子的影响等进行了摇瓶试验。制备的ＡＳ１．３９８中性蛋白酶有如下性质：最适ＰＨ７．２－７．４，在ＰＨ６．５－８．０稳定。最适温度４２－４４℃，３５℃下处理２小时能保持约８５％酶活力，６０℃下１０分钟酶完全失活，此酶被ＥＤＴＡ和Ｃｕ２＋所抑制     

解脂假丝酵母胞外脂肪酶的提纯和性质

通过ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅＰｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析等提纯步骤，对解脂假丝酵母胞外脂肪酶进行了纯化，得到了层析纯样品，比活提高２７．４倍，得率１１％．该酶反应最适温度为４０℃；最适ＰＨ为７．５；等电点约在ＰＨ４．５～５．０之间；８℃以下存放，酶活力损失较少，３０℃以上存放，酶活力有明显损失．金属离子Ｓｒ２＋，Ｂａ２＋，Ｚｎ２＋和Ｍｇ２＋对该酶的激活作用为Ｓｒ２＋＞Ｂａ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｍｇ２＋．Ｃｕ２＋和Ｎａ＋对酶活性有抑制作用．ＮａＮ３对保持酶活性有重要作用．     

无氰体系中电沉积光亮铜锡合金的研究

提出了一种无氰电沉积光亮铜锡合金的新工艺，其溶液组成及操作条件为：Ｎａ３Ｃ６Ｈ５Ｏ．２Ｈ２Ｏ９０－１２０，Ｎａ２ＥＤＴＡ．２Ｈ２Ｏ２５－３５，稳定剂ＷＤＺ－９４３１０－１５?ＣｕＳＯ４．５Ｈ２Ｏ２０－４０，ＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ２０－４０ｇ．Ｌ＾－１；溶液的ｐＨ＝５－６，Ｄｋ＝１０－１５０Ａ．ｍ＾－２，Ｔ＝５０－６０℃，在上述条件下可获得含锡量为５％－１５％的光亮、细致、均匀的铜锡合金沉积层。     

环毛蚓纤维素酶C_X的初步研究

从环毛蚓（Ｐｈｅｖｅｔｉｍａａｓｉａｔｉｃａ）提取纤维素酶ＣＸ,用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０凝胶过滤和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５离子交换层析进行分离纯化,得ＣＸⅠ和ＣＸⅡ,分别测定了ＣＸ,ＣＸⅠ和ＣＸⅡ的最适ｐＨ和最适温度．     

环毛蚓纤维素酶Cx的初步研究

从环毛蚓提取纤维素酶Ｃｘ，用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０凝胶过滤和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５离子交换层析进行分离纯化，得ＣｘⅠ和ＣｘⅡ，分别测定了Ｃｘ，ＣｘⅠ和ＣｘⅡ的最适ＰＨ和最适温度。     

福寿螺β-葡萄糖苷酶的分离纯化及性质的初步研究

以福寿螺内脏为材料,经本实验室开发的工业生产法制备粗酶粉,进一步采用葡聚糖凝胶（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００）和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析纯化,获得经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一纯的β－葡萄糖苷酶制剂．测定该酶的最适反应温度为４３℃,最适反应ｐＨ为５．１;在ｐＨ５．１,４５℃下,该酶催化水杨素水解的Ｋｍ值为３．４０ｍｍｏｌ／Ｌ,活化能为５０．６３ｋＪ／ｍｏｌ．研究几种效应物对酶活力的影响,结果表明：Ｍｎ２＋、Ｃｏ２＋对酶有激活作用,而Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、ＳＤＳ及脲对酶有不同程度的抑制作用,其中Ｃｕ２＋和Ｈｇ２＋对该酶的抑制作用最强,其抑制机理均表现为非竞争性抑制     

用HPLC－FLD法测定粮食中痕量硒

论文提出了以２，３－二氨基萘（ＤＡＮ）为荧光试剂，用高效液相色谱－荧光检测系统（ＨＰＬＣ—ＦＬＤ）测定痕量硒（Ｓｅ）的方法．对ＤＡＮ－Ｓｅ化合物的形成和萃取条件和ＨＰＬＣ—ＦＬＤ分高测定条件进行了系统的研究．在实验条件下，ＤＡＮ—Ｓｅ的保留时间为１．７ｍｉｎ，检测限为５．３ｎｇ，测定范围５～２００ｎｇ．并应用该方法测定了几种常见的粮食中的含硒量，标准偏差为３．０～６．５ｎｇ，回收率为８８．８～１０４．０％．     

饭豆铜锌超氧物歧化酶的纯化及性质

饭豆种子粗提液中有６条Ｃｕ·Ｚｎ—ＳＯＤ活性谱带，经氯仿－乙醇混合液处理，硫酸铵盐析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析被分离，获得了两组ＳＯＤ同工酶组分（ＳＯＤ—１，ＳＯＤ—２）．它们在酶分子结构上可能存在一定差异．ＳＯＤ－１含与粗提液相对的、电泳迁移率较小的活性谱带，它在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）图谱上的活性染色带和蛋白染色带相互对在；在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳图谱上均呈现单一区带，说明该酶已纯化到均一程度．该酶分子量为３１３００，亚基分子量为１６５００，等电点为４．２，在紫外区的吸收值为２６４．０ｎｍ．该必在０—７５℃范围内稳定．纯化的ＳＯＤ—１比活性为１７８９Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ—２比活性为２８４Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ活力回收率为３２％．     

生姜蛋白酶的分离纯化及其糖肽键型的初步研究

本文报导以生姜为材料，冷丙酮脱脂脱色后，用０．１ｍｏｌ／ＬＰＨ６的磷酸缓冲液提取、硫酸铝盐析，经ＤＥＡＥ－纤维素ＤＥ－５２和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５纯化，得生姜蛋白酶两个组份ＺＥ１和ＺＥ２。它们经凝胶等电聚焦电泳，均为单一的蛋白带，ＰＩ值别为７．０和８．０。苯酚－硫酸法鉴定，其均为糖蛋白。β－消去反应表明：ＺＥ１和ＺＥ２中的糖肽键型均为非０－型糖肽键。     

花椰菜凝集素的纯化及部分性质的研究

花椰菜凝集素由花蕊组织经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ凝胶层析纯化获得．ＰＡＧＥ鉴定和高碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂反应均显单一条带，说明该凝集素为纯化的糖蛋白．经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱过滤分析，其相对分子质量约为９４０００．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明该凝集素含有４个亚基，其相对分子质量分别约为２８０００、２５０００、２２０００和２００００．花椰菜凝集素经５０℃处理５分钟仍保持高的凝集活性，该凝集素对酸处理较碱处理稳定．